抗體是由脊椎動物產(chǎn)生的一種能高親和力、特異性識別抗原的多功能分子。在植物保護(hù)領(lǐng)域,抗體即可作為農(nóng)藥殘留免疫分析的生物識別分子,又可用于農(nóng)藥的分子模擬,替代其與靶標(biāo)昆蟲受體結(jié)合,甚至引發(fā)生物學(xué)效應(yīng)。本研究從抗體的生物識別和分子模擬兩大功能著手,開展了多種擬除蟲菊酯農(nóng)藥共性代謝產(chǎn)物3-苯氧基苯甲酸（3-PBA）免疫分析技術(shù)研究。同時采用抗獨特型抗體技術(shù)對蘇云金芽孢桿菌（Bt）Cry2Aa毒素進(jìn)行分子模擬,并對其生物活性與原毒素進(jìn)行比較研究,具體取得的結(jié)果如下:（1）3-PBA膠體金免疫層析法的建立試驗采用體內(nèi)誘生腹水法制備了 3-PBA單克隆抗體,并用Protein G柱進(jìn)行親和純化。用間接競爭ELISA法測定的3-PBA對純化抗體的抑制中濃度（I50）為0.63 μg/mL,最低檢測限（110）為0.13μg/mL,線性檢測范圍（I20-I80）在0.19-2.04μg/mL之間。用檸檬酸三鈉還原法制備了 15nm的膠體金顆粒用于純化抗體標(biāo)記,測定的最佳抗體標(biāo)記濃度為48μg/mL。試驗以硝酸纖維素膜為載體,組裝了免疫層析試紙,優(yōu)化的檢測線濃度和金標(biāo)抗體噴膜量分別為2 mg/mL和5μL... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：149 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１抗體分子的基本結(jié)構(gòu)??（圖片來自于文獻(xiàn)［４］并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了修改

子模擬研究???ＳｃＦｖ?Ｄｉａｂｏｄｙ?Ｕｖ??Ｆａｂ?（－２７ｋＤａ）?＜－５５ｋＤａ）?＜￣５０ｋＤｓ）??卜?Ｓ５?ｋＤａ）?＿?—??／％?＾?｜?％?＾?＾＾?０??ｘ?＃?＼??Ｔｅｔｒａｂｏｄｙ?Ｔｒｉａｂｏｃｆｙ??八?灣?Ｃ－ｌＯＯｋＤａ）?（￣７５ｋＤａ）??Ｆａｂ２???????ＨｌＯｋＤａ）?丨?｜Ｖ?３，??｜ＶＨ??Ｍ?ｃｈｚ?１１?１１?Ｊ１＇??翟?ｃＨ３１＃?％ｔ??｛￣Ｌ１ｋ）?卵■）?一??圖１－２重組抗體及天然抗體的類型（圖片引自文獻(xiàn)［８］）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｙｐｅｓ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ?ａｎｄ?ｎａｔｕｒａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ??（Ｔｈｉｓ?ｆｉｇｕｒｅ?ｗａｓ?ａｄａｐｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ?［８］）??２．３．１來源于單抗的重組抗體??從單抗細(xì)胞株為基礎(chǔ)構(gòu)建重組抗體主要涉及以下幾個步驟：（１）利用ＰＣＲ技??術(shù)擴(kuò)增雜交瘤細(xì)胞株抗體基因；（２）抗體基因克隆至合適的表達(dá)載體；（３）重組??抗體的功能性表達(dá)。１９９３年Ｗａｒｄ等首次報道了從識別阿特拉津的雜交瘤細(xì)胞中??克隆抗體基因，構(gòu)建至ｐＥＴ３ｄ載體后，在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中成功表達(dá)出識別??阿特拉津的Ｆａｂ片段［９］。至今，已有包括百草枯、對硫磷、毒死蜱、敵草隆等多??種來源于單克隆抗體的重組抗體報道［１（）］。其中，一些抗體與母體單克隆抗體相似，??或者其抗體性能發(fā)生改變。這些性質(zhì)的差異可能來源于抗體化合價的變化（如??ＩｇＧ具有兩個抗原識別區(qū)，而Ｆａｂ和ｓｃＦｖ僅有一個抗原識別區(qū)），以及在雜交瘤??抗體基因擴(kuò)增

第一章文獻(xiàn)綜述??Ａｂ２ｙ??八＾２?６?Ａｎｔｉｇｅｎ??Ａｂｌ?Ｉ??Ａｂ２Ｐ??Ａｂ２ａ??圖１－４抗獨特型抗體的類型??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４?Ｔｙｐｅｓ?ｏｆ?ａｎｔｉ－ｉｄｉｏｔ＞?ｐｉｃ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ??４．２抗獨特型抗體與生物受體??生物受體是可與配體（激素、神經(jīng)遞質(zhì)、藥物、細(xì)胞內(nèi)信號分子）結(jié)合并引??起細(xì)胞功能變化的生物大分子。抗獨特型抗體又是怎樣與生物受體產(chǎn)生聯(lián)系的呢？??如圖１－５所示，是一個抗獨特型抗體模擬抗原結(jié)構(gòu)，與其受體發(fā)生結(jié)合從而引發(fā)??生物學(xué)效應(yīng)的示例。即用一種抗原（配體）免疫動物后，將誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體（Ａｂｌ?），??Ａｂｌ的抗原識別部位即“獨特型”（Ｉｄ）又可以誘導(dǎo)機(jī)體淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗獨特型抗??體（Ａｂ２）。其中，部分Ａｂ２?（Ａｂ２ｐ）具有模擬原始抗原的空間結(jié)構(gòu)的能力，能夠??替代抗原與其生物受體結(jié)合，甚至可以引發(fā)與原始抗原相似的生物學(xué)活性，抗獨??特型抗體從而與生物受體發(fā)生了聯(lián)系。??抗說（．＼ｎｔｉｇｃｎ）??抗療與受體結(jié)％▲?ｚ?、｜抗衆(zhòng)與技體結(jié)合??引發(fā)屮物￥活性?受休?＼ｈｉ?ｊ??Ｉ?丨抗體（Ａｂｌ）??抗往特轚抗體與受體結(jié)合抗體與抗法特變抗體結(jié)合??Ａｂ２?＜?ｆ?Ａｂ２??ＫＺｗ￣－－－％ｙ??抗獨特５？抗體（Ａｂ２＞??圖１－５抗獨特型抗體替代抗原與其生物受體結(jié)合??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ａｎｔｉ－ｉｄｉｏｔｙｐｉｃ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ?ｂｉｎｄ?ｔｏ?ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ?ａｓ?ｔｈｅ?ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ａｎｔｉｇｅｎ??１３??

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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[2]Bt Cry2Aa毒素基因工程抗體的制備及活性研究[D]. 武愛華.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：3466274