發(fā)布時間：2021-10-28 13:02

　　晚疫病是影響馬鈴薯生產(chǎn)的重要因素,不僅使產(chǎn)品的質量下降,還使田間馬鈴薯產(chǎn)量降低。為了研究晚疫病抗病機理,本實驗室在前期研究的基礎上得到了一些呈現(xiàn)出不同的誘導表達模式的馬鈴薯晚疫病水平抗性相關基因的EST片段。這些基因可能在晚疫病水平抗性的信號識別與傳導過程中發(fā)揮重要作用,但其基因全長序列及其在馬鈴薯晚疫病水平抗性信號傳導和抗病反應中的作用還不清楚,需要進一步的研究鑒定。為此,根據(jù)VIGS檢驗結果,本研究從這些ESTs中選擇了脂氧合酶基因（St LOX）及與細胞壁栓化作用相關的陰離子過氧化物酶基因（St POPA）作為研究對象,擬進行全長基因的克隆和功能分析,以期為控制馬鈴薯晚疫病的發(fā)生提供理論依據(jù)及數(shù)據(jù)支持。研究結果如下:1.克隆了馬鈴薯脂氧合酶基因（St LOX）。St LOX基因編碼序列全長2730bp,編碼909個氨基酸,定位于馬鈴薯葉片葉綠體中。St LOX基因屬于組成型表達,在馬鈴薯所有組織中均有表達,其中在匍匐莖中表達水平最高,根中次之,其它組織中相對較低。St LOX基因可以被晚疫病菌和機械傷害誘導表達,該基因受JA正調控,參與了JA信號途徑前期的調控作用;不受SA與ET... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 前言
    1.1 馬鈴薯晚疫病
    1.2 馬鈴薯晚疫病抗性分子機理
        1.2.1 垂直抗性
        1.2.2 水平抗性
    1.3 植物與病原菌互作
    1.4 馬鈴薯抗病相關信號傳導途徑
        1.4.1 SA信號分子
        1.4.2 JA信號分子
        1.4.3 ET信號分子
        1.4.4 ROS信號分子
    1.5 脂氧合酶
        1.5.1 脂氧合酶分子特性
        1.5.2 脂氧合酶基因家族
        1.5.3 脂氧合酶與逆境脅迫
    1.6 陰離子過氧化物酶
        1.6.1 過氧化物酶的分類及特性
        1.6.2 過氧化物酶的功能
    1.7 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 晚疫病原菌
        2.1.3 載體
        2.1.4 試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 馬鈴薯StLOX和StPOPA基因的克隆
        2.2.2 干涉和超量載體的構建
        2.2.3 馬鈴薯的遺傳轉化
        2.2.4 轉基因株系小量法抽提DNA及PCR檢測
        2.2.5 轉基因株系小量法抽提RNA
        2.2.6 RNA的純化及反轉錄
        2.2.7 Real time-PCR檢測轉基因株系中目的基因的表達量
        2.2.8 轉基因株系晚疫病原菌的接種
        2.2.9 植物組織化學染色分析
        2.2.10 透射電鏡樣品的制備
        2.2.11 熒光實時定量PCR檢測胼胝質合成關鍵基因的表達
        2.2.12 熒光實時定量PCR檢測病原菌菌絲生長量
        2.2.13 生物和非生物脅迫處理
        2.2.14 StLOX與StPOPA在馬鈴薯中不同組織器官內的表達
        2.2.15 基因細胞定位
第三章 結果與分析
    3.1 StLOX基因的克隆與功能研究
        3.1.1 StLOX基因全長的克隆與序列分析
        3.1.2 StLOX基因的亞細胞定位
        3.1.3 StLOX基因的表達分析
        3.1.4 StLOX轉基因馬鈴薯植株的獲得與分子檢測
        3.1.5 StLOX轉基因馬鈴薯植株晚疫病抗性鑒定
        3.1.6 StLOX基因的抗性機理
    3.2 StPOPA基因的克隆與功能研究
        3.2.1 StPOPA基因全長的克隆與序列分析
        3.2.2 StPOPA基因的亞細胞定位
        3.2.3 StPOPA基因的表達分析
        3.2.4 StPOPA轉基因馬鈴薯植株的獲得與分子檢測
        3.2.5 StPOPA轉基因馬鈴薯植株晚疫病抗性鑒定
        3.2.6 StPOPA基因的抗性機理
第四章 討論
    4.1 StLOX在馬鈴薯晚疫病抗病反應中的作用
    4.2 StPOPA在馬鈴薯晚疫病抗病反應中的作用
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[8]干旱脅迫對杏脂氧合酶活性的影響[J]. 葛云俠,姚允聰,張杰,韓振海.  果樹學報. 2007(01)
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博士論文
[1]馬鈴薯晚疫病水平抗性相關的小G蛋白基因克隆與功能分析[D]. 高文.華中農(nóng)業(yè)大學 2012
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[3]晚疫病菌誘導的兩個馬鈴薯泛素連接酶基因的克隆與功能分析[D]. 倪雪梅.華中農(nóng)業(yè)大學 2009
[4]馬鈴薯晚疫病水平抗性與β-氨基丁酸誘導抗性防衛(wèi)系統(tǒng)基因表達的差異[D]. 李亞軍.華中農(nóng)業(yè)大學 2009
[5]馬鈴薯晚疫病水平抗性相關基因誘導表達譜及水平抗性機制初探[D]. 王冰林.華中農(nóng)業(yè)大學 2005

碩士論文
[1]小麥新抗源一粒葡抗條銹病的組織學和超微結構研究[D]. 張宏昌.西北農(nóng)林科技大學 2007



本文編號：3462844