細(xì)胞蛋白穩(wěn)態(tài)失衡會導(dǎo)致各種疾病和損傷,例如人類的亨廷頓綜合征（Huntington’s Disease,HD）和動物的熱應(yīng)激損傷。亨廷頓綜合征是人類醫(yī)學(xué)中典型的由于蛋白穩(wěn)態(tài)失衡性導(dǎo)致的神經(jīng)退行性疾病。該病的發(fā)生是由于患者體亨廷頓基因（Huntingtingene）發(fā)生突變,過長的CAG重復(fù)序列編碼出過長的多聚谷氨酰胺鏈,使得變異的亨廷頓蛋白（mutant Huntingtin,mHtt）發(fā)生異常聚集引起的。隨著mHtt在細(xì)胞內(nèi)的積累,最終可形成直徑達(dá)2 μm的內(nèi)涵體（Inclusion）,神經(jīng)細(xì)胞失去功能,甚至死亡。熱應(yīng)激損傷是畜牧生產(chǎn)過程中較為常見的蛋白穩(wěn)態(tài)失衡性損傷,特別是熱應(yīng)激對禽類的損傷。暴露于高熱環(huán)境會導(dǎo)致禽鳥體內(nèi)多個器官衰竭,尤其是心臟的損傷,極易導(dǎo)致動物猝死,給畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來經(jīng)濟損失。在人類對抗HD的過程中發(fā)現(xiàn)了一些因子可以通過修復(fù)蛋白穩(wěn)態(tài)來抑制mHtt蛋白聚合。我們試圖將人類醫(yī)學(xué)中的關(guān)于蛋白穩(wěn)態(tài)失衡性疾病的理論和成果應(yīng)用到動物醫(yī)學(xué)中。利用熱休克蛋白具有糾正細(xì)胞內(nèi)蛋白穩(wěn)態(tài)失衡的作用,通過誘導(dǎo)雞心肌細(xì)胞中熱休克蛋白的表達(dá)實現(xiàn)降低熱應(yīng)激對心肌細(xì)胞的損傷。1、Foxo1防止mH... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?Ｆｏｘｏｌ特異性降低ｍＨｔｔ的表達(dá)并抑制ｍＨｔｔ發(fā)生聚合??ａ）Ｆｏｘｏｌ降低了可溶性（２％ＳＤＳ）?ＨＡＱ４３的表達(dá)；ｂ）Ｆｏｘｏｌ降低了?ＨＡＱ４３的聚合；ｃ，ｄ）定量分??析細(xì)胞中可溶性ＨＡＱ４３和ＨＡＱ４３聚合物的含量；ｅ，ｆ）盡管Ｆｏｘｏｌ對ｍＨｔｔ的表達(dá)和聚合具有抑??制作用，但卻沒有影響ＧＦＰ的表達(dá)

Ｓ?ａｎｄ?Ｈｓｐｂ６?ａｒｅ?ｂｅｙｏｎｄ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｂｙ??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｉｎｇ．??２．３?Ｆｏｘｏｌ沒有通過任何已知的通路加速ｍＨｔｔ的降解??細(xì)胞內(nèi)錯配蛋白可以通過多種途徑進(jìn)行降解，有研究報道指出，Ｆｏｘｏｌ可以誘導(dǎo)??自噬的發(fā)生［２８．２９］。為了驗證Ｆｏｘｏｌ抑制ｍＨｔｔ聚集的作用是否與任何已知或者未知的??蛋白降解途徑有關(guān)，我們用３５Ｓ標(biāo)記了?ＧＦＰＱ４３并追蹤了?ＧＦＰＱ４３的降解速率。??試驗結(jié)果顯示，Ｆｏｘｏｌ并沒有改變細(xì)胞總蛋白的降解速率（圖２－５，?ｃ，ｄ），說明??Ｆｏｘｏｌ的抗蛋白聚集作用是特異性的。試驗結(jié)果也同時顯示，ＧＦＰＱ４３的降解速率并??沒有因為Ｆｏｘｏｌ的介入而加快。由此可見，Ｆｏｘｏｌ抑制ｍＨｔｔ聚合的作用是不依賴于??任何蛋白降解途徑的。??３）?ｂ）?Ｃ〇ｆｉｔｒ〇ｌ－Ｋ３ＦＰＱ４３?Ｃ〇ｆｉＴｒ〇ｉ＊ＧＦＰ０４３??Ｃｏｎｔｆ〇ＫＧＦＰＱ４３?（ｈ＞?３．５－；?２?４?ａ?２１?Ｔｉｍｅ?（ｈｉ?ＣＳ?＊?２?二?ｅ?２１??Ｔ．ｒｗ｛ｔｉ）?０．５?１?２?４?８?２１?ＢＳＳＢ?Ｈ?ｒ?＞??ＧＦＰＮＨ＊?ｍＡ?ａ－ｔｕｂｕｌ：ｎ?＾?ａ－ｔｕｂｕｌｒ?一?一一—Ｈ??ｃ）?ｄ）??Ｒｅｌａｔｗｅ?ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ?ｏ？?ＧＦＰＣ（４?３?Ｒｅ?ｄｅｇｒａｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＷＣＥ??－？－Ｃｏｎｔｒｏｌ?‘?Ｃｏｎｔｒｏｌ??了?一■－?Ｆｏｏｌ??０?５－??０．０?Ｉ?１?ｋ?１?１?ｉ?０?０＂?１?１?｜?１?１??０?５?１０?１５?２０?２５?〇?５?１０

??第三章ＨｓｐＢ７防止ｍＨｔｔ聚集的機理???Ｎ－ｔｅｒｍｉｎｕｓ?Ａｌｐｈａ?ｃｒｙｓｔａＨｉｎ?Ｃ－ｔｅｒｍｉｎｕ？??１?Ｓｗｉｎｅｓｔｒｅｔｃｈ?ｎ?ｗ?ｔ７〇??Ｈｓｐ６７Ａ１６??Ｈｓｐ６７Ａ３１??Ｈｓｐ６７Ａ７３??ＨｓｐＢ７ＡＳ１７－２９?｜??圖３－１?Ｎ端缺失的ＨＳＰＢ７分子示意圖??基于野生型ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＩ７ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢ７，逐段敲除ＨｓｐＢ７的Ｎ端氨基酸序列的結(jié)構(gòu)示意圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｎ－ｔｅｒｍｉｎｕｓ?ｄｅｐｌｅｔｅｄ?ＨｓｐＢ７??Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｎ－ｔｅｒｍｉｎｕｓ?ｄｅｐｌｅｔｅｄ?ＨｓｐＢ７?ｍｕｔａｎｔｓ?ｗｅｒｅ?ｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｙ?ｓｉｔｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ?ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ?ｆｒｏｍ??ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢ７．??ＨｓｐＢ７Ｎ?端［１－７３］與?ｐｏｌｙＱ４３、ｐｏｌｙＱ７４、ＨｓｐＢｌ?和?ＨｓｐＢ５?的融合蛋白結(jié)構(gòu)如圖?３－２??和３－３所示。簡而言之，通過常規(guī)ＰＣＲ從ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢｌＷＴ和??ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢ５ＷＴ擴增出不含Ｎ端的野生型ＨｓｐＢｌ和ＨｓｐＢ５，同時向目??的片段其Ｎ端和Ｃ端分別插入Ｎｈｅｌ和Ｎｏｔｌ酶切位點。用同樣的方法獲取??Ｂａｍｆｆｌ－ＨｓｐＢ７［ｌ－７３］－ＮｈｅＩ片段，即ＨｓｐＢ７Ｎ端，并保留其Ｎ端的ｖ５ｔａｇ。分別用限制??性核酸內(nèi)切酶（＃Ｒ３１３６，?＃Ｒ３１３１，＃Ｒ３１８９，?ＮＥＢ，英國）從ＢａｍＨＩ和Ｎｏｔｌ處切開骨??架分子?ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／Ｔ０，ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－Ｑ４３－ｅｇｆｐ，或

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3389397