樹突狀細胞（Dendritic cell, DC）是宿主機體先天免疫系統(tǒng)中的一員,它是一種高效的抗原提呈細胞,可感知和捕獲外界刺激,決定宿主是否啟動免疫防御以及啟動何種免疫防御,DC對機體免疫反應的調(diào)節(jié)可通過一定的信號通路。調(diào)節(jié)性T細胞（Regulatory T cell, Treg ）是一種免疫抑制細胞,在平衡免疫反應和免疫耐受中發(fā)揮關鍵作用,其穩(wěn)態(tài)可以受到DC的調(diào)節(jié)。但具體通過怎樣的分子途徑仍然未知。本研究利用PKA調(diào)節(jié)亞單位R1αf/f小鼠模型和Cbl-b-/-C-cblf/f小鼠模型,構建了R1α和Cbl-b/C-cbl在DC細胞中條件性敲除小鼠,結果證實,DC中cAMP/PKA信號通路和Cbl信號通路均在其調(diào)節(jié)Treg穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮作用,并在此基礎上深入研究cAMP/PKA信號通路在DC中的作用,及其調(diào)節(jié)Treg穩(wěn)態(tài)的機制。1 cAMP/PKA和Cb1信號通路均參與樹突狀細胞對調(diào)節(jié)性T細胞穩(wěn)態(tài)的影響為研究DC影響Treg穩(wěn)態(tài)可以通過哪條信號通路,我們利用實驗室現(xiàn)有R1αf1f小鼠模型和Cbl-b-/C-cblf/f小鼠模型,構建了他們在DC細胞中的敲除小鼠。DC敲除R1α,PKA... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1 細菌毒力與宿主防御之間的關系
        1.1 影響細菌毒力的機制
        1.2 細菌與宿主間的互作
        1.3 豬鏈球菌與宿主間的互作
    2 G蛋白耦聯(lián)受體信號通路在病原菌引起的宿主免疫中的作用
        2.1 G蛋白耦聯(lián)受體信號通路
        2.2 第二信使cAMP/PKA系統(tǒng)在G蛋白傳遞信號中的作用
        2.3 G蛋白耦聯(lián)受體信號通路在病原菌感染宿主中的作用
    3 樹突狀細胞的G蛋白耦聯(lián)受體信號通路在宿主免疫中的作用
        3.1 樹突狀細胞在宿主免疫中的作用
        3.2 G蛋白耦聯(lián)受體信號通路在樹突狀細胞中的作用
    參考文獻
第二章 cAMP/PKA和Cb1信號通路均參與樹突狀細胞對調(diào)節(jié)性T細胞穩(wěn)態(tài)的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗動物
        2.2 抗體及試劑
        2.3 淋巴細胞的提取
        2.4 細胞表面染色
        2.5 細胞胞內(nèi)染色
        2.6 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 cbl-b~(-/-)C-cbl~(DCKO)和R1α~(DCKO)小鼠構建示意圖
        3.2 DC中敲除基因C-cbl和R1α對淋巴器官形態(tài)學方面的影響
        3.3 DC中敲除基因C-cbl和R1α對其自身細胞數(shù)量和分布的影響
        3.4 DC中敲除基因C-cbl和R1α對Treg穩(wěn)態(tài)的影響
    4 討論
    參考文獻
第三章 cAMP/PKA信號通路在樹突狀細胞中激活對其自身發(fā)育和功能的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗動物
        2.2 抗體與試劑
        2.3 骨髓細胞的分離
        2.4 骨髓移植
        2.5 BMDC FLT-3L體外培養(yǎng)
        2.6 體外培養(yǎng)DC體內(nèi)適應性轉(zhuǎn)移
        2.7 ER Cre R1α~(KO)小鼠骨髓移植及誘導
        2.8 皮膚細胞的分離
    3 結果
        3.1 R1α~(DCKO)小鼠表型是由細胞內(nèi)在變異引起
        3.2 R1α~(DCKO)小鼠表型是由cAMP/PKA信號通路激活引起
        3.3 R1α~(DCKO)小鼠骨髓中preDC發(fā)育正常
        3.4 R1α~(DCKO)小鼠體外培養(yǎng)BMDC發(fā)育正常
        3.5 R1α~(DCKO)小鼠體內(nèi)環(huán)境對外源DC表達MHCⅡ的影響
        3.6 R1α~(DCKO)小鼠皮膚DC減少
        3.7 R1α~(DCKO)小鼠脾臟DC增殖
        3.8 R1α~(DCKO)小鼠DC中趨化因子受體CCR7表達量升高
    4 討論
    參考文獻
第四章 R1α基因敲除小鼠的樹突狀細胞可通過cAMP/PKA信號通路影響調(diào)節(jié)性T細胞的穩(wěn)態(tài)
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗動物
        2.2 抗體與試劑
        2.3 qPCR測定IL-2 mRNA水平表達量
        2.4 IL-2體外刺激及胞內(nèi)染色
        2.5 體外DC抗原提呈能力實驗
        2.6 ELISA測定OTIICD4~+T細胞上清IL-2的分泌
        2.7 CD4~+T細胞體內(nèi)適應性轉(zhuǎn)移及體內(nèi)IL-2封閉
    3 結果
        3.1 R1α~(DCKO)小鼠對體內(nèi)適應性轉(zhuǎn)移Treg的影響
        3.2 R1α~(DCKO)小鼠脾臟增殖Treg的類型
        3.3 R1α~(DCKO)小鼠淋巴器官IL-2的表達
        3.4 R1α~(DCKO)小鼠脾臟增殖Treg與IL-2的關系
        3.5 R1α~(DCKO)小鼠體內(nèi)IL-2的主要分泌源的鑒定
        3.6 R1α~(DCKO)小鼠脾臟DC與IL-2分泌的關系
        3.7 R1α~(DCKO)小鼠S2DC的MHCⅡ在刺激IL-2分泌中的作用
    4 討論
    參考文獻
第五章 生理狀態(tài)下的樹突狀細胞可通過cAMP/PKA信號通路影響調(diào)節(jié)性T細胞的穩(wěn)態(tài)
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗動物
        2.2 抗體及試劑
        2.3 紫外線照射
        2.4 皮膚表皮FITC涂抹及腹部皮膚細胞分離
        2.5 體內(nèi)pGE2封閉實驗
    3 結果
        3.1 靜息狀態(tài)下淋巴結S2DC的形成
        3.2 紫外線照射對皮膚DC遷移的影響
        3.3 紫外線照射對皮膚引流淋巴結Treg穩(wěn)態(tài)的影響
        3.4 紫外線照射對體內(nèi)適應性轉(zhuǎn)移Treg穩(wěn)態(tài)的影響
        3.5 紫外線照射引起的Treg增殖與cAMP/PKA信通路的關系
    4 討論
    參考文獻
第六章 (國內(nèi)研究部分)豬鏈球菌2型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Tran功能的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 菌株及培養(yǎng)方法
        2.2 豬鏈球菌2型ZY05719菌株tran基因敲除株以及互補株的構建
        2.3 細菌生長特性研究
        2.4 基因芯片的構建和分析
        2.5 RNA的提取和熒光定量PCR的驗證
        2.6 細菌在葡萄糖缺陷培養(yǎng)基中的生長特性
        2.7 測定菌株對外界環(huán)境不同PH值和氧化的耐受
        2.8 HEp-2細胞粘附特性比較
        2.9 斑馬魚模型的毒力實驗
        2.10 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 豬鏈球菌2型ZY05719敲除株△tran和互補株C△tran的建立
        3.2 敲除株△tran生物學特性分析
        3.3 基因芯片分析受Tran調(diào)控的基因
        3.4 qPCR驗證基因芯片結果
        3.5 不同菌體對于葡萄糖缺陷和外界環(huán)境應激耐受能力的差異
        3.6 Tran敲除導致細菌毒力下降
    4 討論
    參考文獻
致謝
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【參考文獻】：
期刊論文
[1]Ultraviolet-induced alloantigen-specific immunosuppression in transplant immunity[J]. Tomohide Hori,Kagemasa Kuribayashi,Kanako Saito,Linan Wang,Mie Torii,Shinji Uemoto,Taku Iida,Shintaro Yagi,Takuma Kato.  World Journal of Transplantation. 2015(01)



本文編號：3385700