發(fā)布時間：2021-08-26 05:17

　　作為極為重要的細胞代謝和應激反應傳感器,Sirtuins（SIRT1-7）家族在繁殖上的功能日益受到研究者關注。已有證據(jù)表明SIRT2在體細胞的有絲分裂、能量代謝及衰老等方面具有重要作用,而有關SIRT2與卵母細胞成熟、老化的報道較少,其作用機制更是不明確�；诖�,本研究利用小分子抑制劑、si RNA干擾、免疫組織化學、細胞免疫熒光、ELISA、RT-q PCR、Western blot和免疫共沉淀等技術與方法,解析SIRT2在牛卵巢組織和卵母細胞亞細胞的定位,及其在卵子成熟、胚胎發(fā)育和老化過程中的表達規(guī)律;揭示SIRT2對牛卵母細胞核成熟、胞質(zhì)成熟和老化的作用;明確SIRT2對牛卵丘-卵母細胞間隙連接通訊和卵巢顆粒細胞類固醇激素合成的作用及其調(diào)節(jié)途徑。以期系統(tǒng)闡明SIRT2調(diào)控牛卵母細胞成熟、老化的分子機制,為提高牛卵母細胞質(zhì)量、延緩卵母細胞老化提供科學依據(jù)。本研究獲得以下主要研究結(jié)果和結(jié)論:1.SIRT1-7均在牛卵母細胞中表達,其中SIRT1和SIRT2的表達水平最高。除SIRT7之外,Sirtuins家族的m RNA表達水平在牛卵母細胞老化過程中以時間依賴的方式逐漸降低。特別是... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：164 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

卵子發(fā)生和卵泡發(fā)育的分子機制（FlorandJohan2012）

第一章文獻綜述3圖1-2哺乳動物卵母細胞減數(shù)分裂過程的示意圖(AdhikariandLiu2014)。在卵泡內(nèi)，卵母細胞停滯在前期I（prophaseI），并且染色體濃縮（紅色）；在生理水平下的LH峰的刺激或從卵泡中釋放進行體外培養(yǎng)，會使卵母細胞發(fā)生泡破裂（GVBD）；接著染色體開始濃縮，并形成紡錘體纖維（綠色）。隨后，卵母細胞進入MI時，染色體在雙極紡錘體的中期板上凝聚并排列。排出第一極體后，卵母細胞停滯在MII期直到受精。Figure1-2Schematicrepresentationofthemammalianoocytemeioticmaturationprocess(AdhikariandLiu2014).Withinthefollicle,oocytesremainarrestedatprophaseIandarecharacterizedbyagerminalvesicle(GV)inwhichthechromosomes(red)remaindecondensed.ApreovulatoryLHsurgeunderphysiologicalconditionsormechanicalreleaseoftheoocytefromfolliclefollowedbyinvitroculturecausesGVbreakdown(GVBD);chromosomesstarttocondense(red)andspindlefibresappear(green).Subsequently,chromosomes(red)condenseandalignatthemetaphasicplateofthebipolarspindle(green)whentheoocytereachesmetaphaseI.Afterextrudingapolarbodycontainingonesetofchromosomes,thematureoocyteremainsarrestedatmetaphaseIIuntilfertilization.1.1.2.1紡錘體組裝和染色體分離（卵母細胞減數(shù)分裂機制）與雄性減數(shù)分裂產(chǎn)生四個相同的單倍體配子不同，雌性減數(shù)分裂只產(chǎn)生一個支持受精的原核單倍體，并將四分之三的染色體排出形成極體。因此，卵母細胞的減數(shù)分裂比精子更復雜，其調(diào)節(jié)減數(shù)分裂過程需要面臨獨特的分子挑戰(zhàn)。特別在卵母細胞體外成熟過程中，不利環(huán)境因子誘導的應激作用容易導致紡錘體缺陷或染色體分離異常（Combellesetal.2009）。染色體的正常分?

第一章文獻綜述5圖1-3小鼠無中心體紡錘體形成機制(ShinandKim2018)。在小鼠成熟過程中，無中心體的MTOCs發(fā)生動態(tài)重構(gòu)。在GV期卵母細胞，MTOCs呈大簇狀存在，但在GVBD后裂解成小片段。雙極軸由微管為基礎的馬達重組蛋白（包括正負/負正定向馬達動力蛋白）構(gòu)成。小鼠卵母細胞可以從無中心體MTOCs或染色質(zhì)中產(chǎn)生微管。無中心體MTOCs是由PCNT,CEP192,CEP152,NEDD1，和TuRC等蛋白組成的復合體。調(diào)節(jié)細胞周期的幾種激酶，包括PLK1和CDK1，都參與了無中心體MTOCs的調(diào)控。RAN特異性GTP交換因子RCC1與染色質(zhì)結(jié)合并將RAN-GTP轉(zhuǎn)化為RAN-GDP梯度。RAN-GTP激活TPX2，TPX2反過來招募AURKA到紡錘體。AURKA激活NEDD1和TuRC，并啟動微管成核。染色體乘客復合體(CPC)介導的MCAK磷酸化或STMN1抑制微管的收縮，從而促進微管生長。Figure1-3Mechanismsofacentriolarspindleformationinmouseoocytes(ShinandKim2018)).Duringmouseoocytematuration,acentriolarMTOCsundergodynamicremodeling.InGVstageoocytes,MTOCsexistaslargeclusters,butarefragmentedafterGVBD.Bipolarspindlesarereorganizedbymicrotubule-basedmotorsincludingplus-to-minusdirectedmotordyneinandminus-to-plusdirectedkinesins.MouseoocytescangeneratemicrotubulesfromacentriolarMTOCsorchromatin.AcentriolarMTOCscontainseveralcomponentsinthepericentriolarmaterialofsomaticcellsincludingPCNT,CEP192,CEP152,NEDD1,andTuRC.Severalkinasesthatregulatethecellcycle,includingPLK1andCDK1,areinvolvedintheregulationofacentriolarMTOCs(detailsinFigure2).RAN-specificGTPexchangefactor,RCC1,bindstochromatinandconvertsRAN-GTPtoRAN-GDPgradienttowardschromatin.RAN-GTPactivatesTP

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Resveratrol compares with melatonin in improving in vitro porcine oocyte maturation under heat stress[J]. Yu Li,Jing Wang,Zhenzhen Zhang,Jinyun Yi,Changjiu He,Feng Wang,Xiuzhi Tian,Minghui Yang,Yukun Song,Pingli He,Guoshi Liu.  Journal of Animal Science and Biotechnology. 2017(01)

碩士論文
[1]C型鈉肽調(diào)節(jié)小鼠卵母細胞減數(shù)分裂紡錘體形態(tài)的作用及分子機制研究[D]. 馬馳原.西北農(nóng)林科技大學 2019



本文編號：3363624