信號轉導與激活因子5（Signal transducer and activator 5,STAT5）是一類胞內轉錄因子,由STAT5a和STAT5b基因編碼,在體內受催乳素（Prolactin,PRL）誘導參與乳腺發(fā)育和泌乳過程。研究表明,STAT5a和STAT5b通過時空特異性表達,在細胞內募集特定因子參與基因的轉錄調控,進而影響乳腺細胞增殖和分化,但對其具體調控機制尚不清楚。目前有關STAT5基因功能的研究主要以人、小鼠等為材料,對其在水牛乳腺發(fā)育和泌乳過程中的作用尚未見報道。本研究首先分析水牛STAT5a和STAT5b基因表達模式,通過調控倆者基因表達,研究其對乳腺上皮細胞增殖及乳蛋白相關基因表達的影響;然后通過轉錄組學方法分析PRL作用下的乳腺上皮細胞差異表達基因,采用ChIP-PCR法分析STAT5a和STAT5b與靶基因相互作用;最后應用定量蛋白質組學技術研究不同發(fā)育時期水牛乳腺組織差異表達蛋白,并對重要差異表達蛋白進行驗證,以便為進一步探索水牛乳腺發(fā)育及泌乳生理機制奠定理論基礎。研究取得如下結果:1.水牛STA和SaTAT5b基因及其啟動子的克隆和分析克隆并分析了水牛S... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：190 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１乳腺腺泡基本結構ｍ??Ｆｉｇ．１－１?Ｔｈｅ?ｂａｓｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ａｃｉｎａｒ??

圖１－２乳腺不同發(fā)育時期的模式??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄｓ??于雌性哺乳動物的乳腺器官而言，早在胚胎時期，在乳腺脂肪組織內就形管分支結構，但這時期的發(fā)育還是和胚胎發(fā)育同步，直到新生兒時期。胚組織主要由上皮細胞以及圍繞周圍的基質細胞構成，這一時期顯著的特點的細胞分化狀態(tài)，發(fā)生在胚胎發(fā)育的早期階段，乳線從外胚層細胞分化形脊狀結構，并且隨著胚胎的不斷生長，乳腺會逐漸延伸直到乳帶區(qū)的最邊不斷生長，細胞分裂，形成球狀的乳蕾。胚胎發(fā)育至乳蕾階段，就標志了分化階段，不同的物種呈現(xiàn)了不同的特征，如雌性和雄性乳蕾的差異，雌雄性則呈球形。這一階段己經發(fā)現(xiàn)包括了?ＷｎｔｌＯｂ以及Ｗｎｔ信號通路在內，另外，：基因的轉錄，以及ＦＧＦ信號分子等也是乳腺早期胚胎發(fā)育子ｔ２１，２２：！。??

采用Ｔｒｉｚｏｌ法抽提水牛乳腺組織總ＲＮＡ，瓊脂糖凝膠電泳檢測結果可以看到，提取??的總ＲＮＡ具有完整的三條帶，２８ｓ和１８ｓ條帶清楚且亮度相比較在２倍左右，說明所提??取的ＲＮＡ質量良好（圖２－１）。??Ｌ：?ｉ－??２８Ｓ—＿?ｆ：??１８Ｓ?—Ｖ??？ｓ??圖２－１水牛乳腺組織總ＲＮＡ提取結果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｂｕｆｆａｌｏ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄ?ｔｉｓｓｕｅ??２．２水牛？ＳＭｒＪａ和基因編碼區(qū)克隆及分析??２．２．１水牛５７＾７＾和５７＾７＾基因ＣＤＳ擴增??設計基因特異性擴增引物，以水牛乳腺組織ｃＤＮＡ為模板，擴??増得到長度分別在２５００ｂｐ大小左右的特異性擴增條帶（圖２－２）。??３２??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]奶山羊乳腺發(fā)育的超微結構研究[J]. 曲波,王學東,崔琳,李慶章.  中國乳品工業(yè). 2008(11)
[2]奶牛乳腺上皮細胞系的建立及高溫對細胞超微結構的影響[J]. 杜娟,狄和雙,王根林.  生物工程學報. 2007(03)

博士論文
[1]轉PRL基因小鼠模型的構建與Stat5a的乳腺發(fā)育調控機理研究[D]. 任艷萍.廣西大學 2014
[2]水牛乳腺基因表達譜與生長激素轉基因水牛的初步研究[D]. 王錦.廣西大學 2013

碩士論文
[1]GABRP對水牛乳腺上皮細胞增殖以及泌乳相關基因表達的影響[D]. 郝文艷.廣西大學 2016
[2]山羊STAT3和STAT5A基因SNPs、mRNA表達及甲基化對生產性能的影響[D]. 吳賢鋒.西北農林科技大學 2015
[3]奶牛泌乳性狀相關基因啟動子甲基化分析[D]. 鄭宜文.東北農業(yè)大學 2013



本文編號：3352732