信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與激活因子5（Signal transducer and activator 5,STAT5）是一類胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,由STAT5a和STAT5b基因編碼,在體內(nèi)受催乳素（Prolactin,PRL）誘導(dǎo)參與乳腺發(fā)育和泌乳過程。研究表明,STAT5a和STAT5b通過時(shí)空特異性表達(dá),在細(xì)胞內(nèi)募集特定因子參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,進(jìn)而影響乳腺細(xì)胞增殖和分化,但對(duì)其具體調(diào)控機(jī)制尚不清楚。目前有關(guān)STAT5基因功能的研究主要以人、小鼠等為材料,對(duì)其在水牛乳腺發(fā)育和泌乳過程中的作用尚未見報(bào)道。本研究首先分析水牛STAT5a和STAT5b基因表達(dá)模式,通過調(diào)控倆者基因表達(dá),研究其對(duì)乳腺上皮細(xì)胞增殖及乳蛋白相關(guān)基因表達(dá)的影響;然后通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法分析PRL作用下的乳腺上皮細(xì)胞差異表達(dá)基因,采用ChIP-PCR法分析STAT5a和STAT5b與靶基因相互作用;最后應(yīng)用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究不同發(fā)育時(shí)期水牛乳腺組織差異表達(dá)蛋白,并對(duì)重要差異表達(dá)蛋白進(jìn)行驗(yàn)證,以便為進(jìn)一步探索水牛乳腺發(fā)育及泌乳生理機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。研究取得如下結(jié)果:1.水牛STA和SaTAT5b基因及其啟動(dòng)子的克隆和分析克隆并分析了水牛S... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：190 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１乳腺腺泡基本結(jié)構(gòu)ｍ??Ｆｉｇ．１－１?Ｔｈｅ?ｂａｓｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ａｃｉｎａｒ??

圖１－２乳腺不同發(fā)育時(shí)期的模式??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄｓ??于雌性哺乳動(dòng)物的乳腺器官而言，早在胚胎時(shí)期，在乳腺脂肪組織內(nèi)就形管分支結(jié)構(gòu)，但這時(shí)期的發(fā)育還是和胚胎發(fā)育同步，直到新生兒時(shí)期。胚組織主要由上皮細(xì)胞以及圍繞周圍的基質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成，這一時(shí)期顯著的特點(diǎn)的細(xì)胞分化狀態(tài)，發(fā)生在胚胎發(fā)育的早期階段，乳線從外胚層細(xì)胞分化形脊?fàn)罱Y(jié)構(gòu)，并且隨著胚胎的不斷生長(zhǎng)，乳腺會(huì)逐漸延伸直到乳帶區(qū)的最邊不斷生長(zhǎng)，細(xì)胞分裂，形成球狀的乳蕾。胚胎發(fā)育至乳蕾階段，就標(biāo)志了分化階段，不同的物種呈現(xiàn)了不同的特征，如雌性和雄性乳蕾的差異，雌雄性則呈球形。這一階段己經(jīng)發(fā)現(xiàn)包括了?ＷｎｔｌＯｂ以及Ｗｎｔ信號(hào)通路在內(nèi)，另外，：基因的轉(zhuǎn)錄，以及ＦＧＦ信號(hào)分子等也是乳腺早期胚胎發(fā)育子ｔ２１，２２：！。??

采用Ｔｒｉｚｏｌ法抽提水牛乳腺組織總ＲＮＡ，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果可以看到，提取??的總ＲＮＡ具有完整的三條帶，２８ｓ和１８ｓ條帶清楚且亮度相比較在２倍左右，說明所提??取的ＲＮＡ質(zhì)量良好（圖２－１）。??Ｌ：?ｉ－??２８Ｓ—＿?ｆ：??１８Ｓ?—Ｖ??？ｓ??圖２－１水牛乳腺組織總ＲＮＡ提取結(jié)果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｂｕｆｆａｌｏ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄ?ｔｉｓｓｕｅ??２．２水牛？ＳＭｒＪａ和基因編碼區(qū)克隆及分析??２．２．１水牛５７＾７＾和５７＾７＾基因ＣＤＳ擴(kuò)增??設(shè)計(jì)基因特異性擴(kuò)增引物，以水牛乳腺組織ｃＤＮＡ為模板，擴(kuò)??増得到長(zhǎng)度分別在２５００ｂｐ大小左右的特異性擴(kuò)增條帶（圖２－２）。??３２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]奶山羊乳腺發(fā)育的超微結(jié)構(gòu)研究[J]. 曲波,王學(xué)東,崔琳,李慶章.  中國(guó)乳品工業(yè). 2008(11)
[2]奶牛乳腺上皮細(xì)胞系的建立及高溫對(duì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J]. 杜娟,狄和雙,王根林.  生物工程學(xué)報(bào). 2007(03)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)PRL基因小鼠模型的構(gòu)建與Stat5a的乳腺發(fā)育調(diào)控機(jī)理研究[D]. 任艷萍.廣西大學(xué) 2014
[2]水牛乳腺基因表達(dá)譜與生長(zhǎng)激素轉(zhuǎn)基因水牛的初步研究[D]. 王錦.廣西大學(xué) 2013

碩士論文
[1]GABRP對(duì)水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響[D]. 郝文艷.廣西大學(xué) 2016
[2]山羊STAT3和STAT5A基因SNPs、mRNA表達(dá)及甲基化對(duì)生產(chǎn)性能的影響[D]. 吳賢鋒.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[3]奶牛泌乳性狀相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化分析[D]. 鄭宜文.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3352732