發(fā)布時間：2021-07-31 08:18

　　哺乳動物卵母細(xì)胞質(zhì)量是確保受精和胚胎發(fā)育的基礎(chǔ),由環(huán)境污染和卵母細(xì)胞成熟過程中減數(shù)分裂分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)異常等原因造成的卵母細(xì)胞質(zhì)量下降,會嚴(yán)重影響哺乳動物早期胚胎發(fā)育,從而影響動物的繁殖能力。馬拉硫磷（Malathion,MAL）作為一種高效低毒的有機(jī)磷殺蟲劑在農(nóng)業(yè)防蟲害中被廣泛應(yīng)用,但是高濃度的馬拉硫磷會引起人類和動物急性中毒反應(yīng),長時間低濃度接觸馬拉硫磷則會在細(xì)胞水平引起染色體畸變,因此馬拉硫磷具有潛在的細(xì)胞毒性。有報道表明馬拉硫磷會影響動物卵母細(xì)胞成熟,但是關(guān)于其如何影響哺乳動物卵母細(xì)胞質(zhì)量仍不清楚。豬卵母細(xì)胞成熟要經(jīng)歷復(fù)雜而精細(xì)的減數(shù)分裂過程,其中染色體乘客蛋白復(fù)合物（Chromosomal Passenger Complex,CPC）在減數(shù)分裂過程中呈現(xiàn)高度動態(tài)分布,在減數(shù)分裂各個時期承擔(dān)相應(yīng)功能。SURVIVIN蛋白作為CPC亞基之一,對CPC在卵母細(xì)胞中的動態(tài)定位有一定作用,但是對CPC功能亞基AURORA B激酶的作用還未有研究。圍繞上述問題,本研究利用豬卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,研究馬拉硫磷對豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟的影響及其影響機(jī)制,同時還探究了SURVIVIN基因在卵母細(xì)胞... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

CPC在有絲分裂各時期定位及功能Fig4.2SubcellularlocationandfuctionofCPCinmitosis(Ruchaudetal,2007)

馬拉硫磷及SURVIVIN對豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的影響和調(diào)控機(jī)制研究45取30-50枚豬COC進(jìn)行體外培養(yǎng)，分別向培養(yǎng)基中添加不同濃度（0.25、0.5、0.75、1、1.5、2和4mmol/L）的馬拉硫磷培養(yǎng)44h，脫去卵丘細(xì)胞統(tǒng)計PBI的排出情況。結(jié)果顯示：與對照組相比（69.6%±0.06%），馬拉硫磷濃度達(dá)到0.25mmol/L（60.4%±0.09%）時，卵母細(xì)胞成熟率開始顯著降低；當(dāng)馬拉硫磷濃度達(dá)到0.75mmol/L（49.5%±0.06%）以及更高時時，卵母細(xì)胞成熟率開始急劇下降（圖1A、B）。斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)（R2=5.2074）表明馬拉硫磷濃度與卵母細(xì)胞成熟率的影響顯著相關(guān)。根據(jù)馬拉硫磷濃度梯度和成熟率繪制線性回歸方程，計算得到IM50為0.87mmol/L（圖1B）。因此我們選擇1mmol/L馬拉硫磷進(jìn)行后續(xù)實驗（圖1C）。圖1.馬拉硫磷對豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響Fig1.EffectsofmalathiononporcineoocytesmaturationinvitroA：不同濃度馬拉硫磷處理的豬卵母細(xì)胞體外成熟率；B：馬拉硫磷濃度與豬卵母細(xì)胞成熟率相關(guān)性極顯著，相關(guān)系數(shù)R2=0.94，其半數(shù)成熟率濃度為0.87mmol/L；C：添加1mmol/L馬拉硫磷組（MAL組）與對照組（CTR組）豬卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)44h照片，比例尺：100μm。A：IVMPorcineoocytematurationratesinthegroupstreatedwithdifferentconcentrationsofmalathion;B：Correlationbetweenmalathionconcentrationandinvitromaturationofporcineoocytes,ThepearsoncorrelationcoefficientR2=0.940andlinearregressionindicatedthatIMC50correspondsto0.87mmol/L。C：MicrographsofporcineoocytesinIVMwith1mmol/Lmalathiontreatment,Bar=100μm。

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2019屆博士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文463.2馬拉硫磷影響豬卵母細(xì)胞IVM過程中的核成熟與質(zhì)成熟3.2.1馬拉硫磷影響豬卵母細(xì)胞紡錘體和染色體的形態(tài)紡錘體和染色體形態(tài)是影響卵母細(xì)胞核成熟的關(guān)鍵指標(biāo)，因此我們觀察并統(tǒng)計了馬拉硫磷對MII期卵母細(xì)胞中染色體和紡錘體形態(tài)變化以及兩者相對位置的影響。取體外成熟培養(yǎng)44h的實驗組和對照組豬卵母細(xì)胞（各組細(xì)胞數(shù)目在25-55枚之間），使用DAPI和抗α-Tubulin抗體分別對染色體和紡錘體進(jìn)行免疫熒光染色，結(jié)果表明，正常卵母細(xì)胞染色體呈線型排列，紡錘體位于染色體兩側(cè)；在1mmol/L馬拉硫磷處理組（MAL）中，大部分卵母細(xì)胞的染色體呈團(tuán)狀分布，由紡錘絲形成紡錘體則非均勻地環(huán)繞于染色體四周（圖2A和B）。我們對染色體排布、紡錘體構(gòu)型以及兩者相對位置異常卵母細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果表明，MAL組染色體和紡錘體異常率顯著高于對照組（25.03%±1.69%對56.1%±2.30%，）圖2.馬拉硫磷對成熟卵母細(xì)胞內(nèi)染色體排布和紡錘體形態(tài)的影響Fig2.Effectsofmalathion-exposureonthemeioticprogressionmaturationandspindleassemblyinporcineoocytesA：馬拉硫磷處理的成熟卵母細(xì)胞內(nèi)染色體與紡錘體分布與形態(tài)（藍(lán)色：染色體；綠色：紡錘體，比例尺為5μm）。B：馬拉硫磷處理后紡錘體和染色體異常的豬卵母細(xì)胞比率。（**，P<0.01）。A:Effectsofmalathion-exposureonchromosomeandspindlemorphologyinmaturedoocytes.(blue：chromosome；green：spindle，Bar=5μm)B:Chromosomeandspindleabnormalratetreatedinmaturedoocytestreatedbymalathion.(**,P<0.01)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The IAP family: endogenous caspase inhibitors with multiple biological activities[J]. YANG YI LI, XIAO MING LI(Laboratory of Immune Cell Biology, Division of Basic Sciences, National Cancer Institute, National Institutes of Health, Bethesda, MD 20892, USA).  Cell Research. 2000(03)



本文編號：3313108