“蟲(chóng)草”是廣義蟲(chóng)草屬（Cordyceps）真菌的總稱(chēng)。我國(guó)的蟲(chóng)草產(chǎn)業(yè)主要涉及自然資源較為匱乏的冬蟲(chóng)夏草（Cordyceps sinensis）、蛹蟲(chóng)草（C.militaris）等真菌。其中,蛹蟲(chóng)草的成分、藥理作用與冬蟲(chóng)夏草相似,尤其是CMPs-4多糖,具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于蛹蟲(chóng)草能夠人工培育,是解決野生蟲(chóng)草資源嚴(yán)重不足的有效手段;長(zhǎng)期以來(lái),一直是藥用真菌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。我國(guó)新疆豐富的水稻、小麥資源,為蛹蟲(chóng)草的人工培育提供了充足的物質(zhì)條件。菌種退化是制約蛹蟲(chóng)草人工培育技術(shù)發(fā)展的最突出問(wèn)題。本文對(duì)蛹蟲(chóng)草的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌種選育和培養(yǎng)液配方優(yōu)化開(kāi)展了研究,旨在為蛹蟲(chóng)草的規(guī)�；a(chǎn)提供理論和技術(shù)指導(dǎo)。同時(shí),本文還對(duì)蛹蟲(chóng)草多糖CMPs-4對(duì)人工食道癌細(xì)胞Eca109的增殖抑制作用、及其對(duì)Eca109細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響等問(wèn)題進(jìn)行了研究與討論,以期揭示CMPs-4的抗癌機(jī)制。本論文首先從野生蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中篩選了親本菌株,在此基礎(chǔ)上,培育子實(shí)體;利用單孢子分離技術(shù)分離單子囊孢子,并對(duì)其交配型進(jìn)行鑒定;從不同交配型單子囊孢子菌株雜交產(chǎn)生的子實(shí)體中分離菌種,篩選出子實(shí)體產(chǎn)量較高的F1代雜交菌株。其次... 

【文章來(lái)源】：東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

單子囊孢子分離Fig.2.1Isolationofsingle-ascosporesofCordycepsmilitaris

東北師范大學(xué)博士學(xué)位論文25火30s，72℃延伸60s，35個(gè)循環(huán)；72℃下延伸10min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1.6%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，根據(jù)電泳結(jié)果確定其交配型的類(lèi)型。分析不同群體的交配型分離率，得到交配型分離特征。最后通過(guò)卡方檢驗(yàn)群體是否符合理論交配型分離比。2.2.5營(yíng)養(yǎng)親和性試驗(yàn)將不同交配型的單孢子菌株的代表菌株，置于在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行對(duì)峙培養(yǎng)。以同一菌株的自配對(duì)為對(duì)照組，每個(gè)培養(yǎng)皿中上放兩對(duì)菌株，以便觀(guān)察交配型相同菌株與不同菌株之間的親和關(guān)系。將接種后的培養(yǎng)皿置于23℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)4天，在第5天進(jìn)行明/暗（16h/8h）交替培養(yǎng)。觀(guān)察并記錄氣生菌絲是否存在、菌落生長(zhǎng)狀況及菌落顏色等指標(biāo)；著重觀(guān)察第14天菌落結(jié)合親和力、原基形成及子實(shí)體發(fā)育的情況。參照李沛利等人的劃分方法，觀(guān)察菌株在28天內(nèi)組合配對(duì)結(jié)果的差異，并對(duì)菌株配對(duì)進(jìn)行分析。[176]2.2.6單子囊孢子菌株菌落特征和實(shí)體產(chǎn)生情況的觀(guān)察在OlympusIX71體式解剖鏡下對(duì)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體下進(jìn)行顯微觀(guān)察并照相。2.3結(jié)果與分析2.3.1菌株分離及培養(yǎng)結(jié)果從人工栽培的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體上分離得到10個(gè)菌株。10個(gè)菌株單獨(dú)培養(yǎng)進(jìn)行出草試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)大部分菌種都能夠出草（圖2.2）。圖2.2大米培養(yǎng)基出草試驗(yàn)Fig．2.2CordycepsmilitarisFruitingfigure通過(guò)對(duì)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體的形態(tài)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，野生蛹蟲(chóng)草子實(shí)體呈深棕黃色，棒狀，

東北師范大學(xué)博士學(xué)位論文26柄部光滑如圖2.3A。子實(shí)體上的子囊殼分布相對(duì)稀疏，子囊殼大部分埋生于子實(shí)體中，突出部分形成乳狀突（圖2.3B）。而人工栽培的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體顏色橙色深淺不一，子實(shí)體圓柱形諸多，也有部分頭部較尖（圖2.3C）。子實(shí)體上子囊殼排列比較緊密，子囊殼大部分外露、細(xì)長(zhǎng)（圖2.3D）。人工栽培的蛹蟲(chóng)草在產(chǎn)量和質(zhì)量上要比野生蛹蟲(chóng)草好（圖2.3E-F）。同時(shí)觀(guān)察到有些人工栽培的蛹蟲(chóng)草只產(chǎn)生原基沒(méi)有形成子實(shí)體，甚至有的沒(méi)有原基形成（圖2.3G-H）。圖2.3A和B：野生蛹蟲(chóng)草子實(shí)體及子囊殼的著生狀態(tài)；C和D人工栽培的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體及子囊殼著生狀態(tài)；E正在生長(zhǎng)的人工栽培蛹蟲(chóng)草子實(shí)體；F發(fā)育成熟的人工栽培蛹蟲(chóng)草子實(shí)體G、H沒(méi)有子實(shí)體的形成Fig．2.3AandB:Wildfruitbodyandperitheciagrowingonit;CandD:cultivatedfruitbodyandperitheciagrowingonit;E:thegrowingcultivatedfruitbody;F:thematurecultivatedfruitbody;GandH:nofruitbodyprodaction2.3.2單子囊孢子菌株分離結(jié)果及交配型鑒定從不同來(lái)源4個(gè)單子囊孢子群體分離得到60個(gè)單子囊孢子菌株。被測(cè)的60單子囊孢子菌株P(guān)CR鑒定結(jié)果顯示，37菌株擴(kuò)增出特異性片段，其中22個(gè)菌株擴(kuò)增出MAT1-1的-box片段，其特異性產(chǎn)物大小為233bp；其余的15株單子囊孢子菌株能擴(kuò)增MAT1-2的HMG-box片段，特異性產(chǎn)物大小為191bp。結(jié)果顯示，37株代表菌株只能擴(kuò)增MAT1-2或MAT1-1的一個(gè)，說(shuō)明MAT1-1和MAT1-2不能共存，是一個(gè)非常明顯的二極異配體系（圖2.4）。

【參考文獻(xiàn)】：
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