發(fā)布時(shí)間：2021-06-30 09:04

　　大豆因其營養(yǎng)豐富而成為人類和動(dòng)物優(yōu)質(zhì)的植物蛋白源。但是大豆產(chǎn)品中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子,會(huì)引起動(dòng)物產(chǎn)生不良生理反應(yīng),尤其是幼齡動(dòng)物。其中,β-伴大豆球蛋白的α亞基（GlymBd 60K）是主要的熱穩(wěn)定性大豆抗原蛋白,GlymBd28K是微量且免疫原性較強(qiáng)的大豆抗原蛋白,Kunitz型胰蛋白酶抑制因子是一種主要的熱不穩(wěn)定性大豆抗原蛋白。近幾十年來,科研工作者致力于研究通過不同的加工工藝來消除或降低大豆中的抗?fàn)I養(yǎng)因子,但由于技術(shù)水平和工藝參數(shù)等的不同,造成大豆產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊,由于受到檢測技術(shù)的限制,很難準(zhǔn)確評價(jià)其鈍化消除效果。因此,如何準(zhǔn)確測定大豆中的抗?fàn)I養(yǎng)因子水平已成為了大豆產(chǎn)品質(zhì)量評定以及加工工藝監(jiān)控等工作中必須解決的問題。因此,本研究旨在建立靈敏、準(zhǔn)確的檢測方法來測定GlymBd 60K、Glym Bd 28K和Kunitz型胰蛋白酶抑制因子,為評價(jià)不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中抗原蛋白的消除鈍化效果提供技術(shù)支撐。本研究分為四個(gè)試驗(yàn),試驗(yàn)一:利用高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（High performance liquid chromatography-tanden mass spectr... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－５不同的酶解方法（膜上酶解法和溶液酶解法）的比較??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｒｙｐｔｉｃ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｐａｔｔｅｒｎｓ?（ｏｎ－ｆｉｌｔｅｒ?ａｎｄ?ｉｎ－ｓｏｌｕｔｉｏｎ）?ｆｒｏｍ?ｔｈｅ?ｓｏｙｂｅａｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ??ｅｘｔｒａｃｔ??

保留時(shí)間（ｍｉｎ）??Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??圖２－７定置肋段在高分辨質(zhì)譜下的提取離子流色譜圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ?ｉｏｎ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｐｅｐｔｉｄｅ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｑ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ?ｈｉｇｈ?ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ?ｍａｓｓ??ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ??２．１．３．５質(zhì)譜條件的優(yōu)化??圖２－８?（Ａ）為目標(biāo)肽段標(biāo)準(zhǔn)品在全掃描模式下的質(zhì)譜圖。從圖中可以看出，目標(biāo)肽段帶兩個(gè)??正電荷，質(zhì)荷比為５２６．３，且質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)最高，因此，本試驗(yàn)選擇該離子作為母離子，并對傳??輸電壓進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明，當(dāng)傳輸電壓為１２０?Ｖ時(shí)，母離子的質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)最高（圖２－９（Ａ）），??因此，本試驗(yàn)將１２０?Ｖ確定為傳輸電壓。隨后，本試驗(yàn)對母離子碎裂產(chǎn)生的相應(yīng)子離子進(jìn)行分析，??結(jié)果如圖２－８?（Ｂ）所示，在Ｃ－端ｙ系列子離子中，ｙ５子離子（ｍ／ｚ?５８０．２＋１）的質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)最??高，而ｙ６子離子（ｍ／ｚ６９３＿３＋１）的質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度位居第二，且上述兩個(gè)子離子附近均無其他干擾??子離子，因此，本試驗(yàn)將ｙ５子離子和ｙ６子離子作為定性子離子，而前者作為定量子離子。為了??提高方法靈敏度

通常以線性范圍和定量限來評估方法的靈敏度。本方法中以各濃度下目標(biāo)肽段標(biāo)準(zhǔn)品定量子??離子的峰面積對濃度作線性回歸分析得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。將目標(biāo)肽段以起始流動(dòng)相稀釋，在１．６－５００??ｎｇ／ｍＬ范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（圖２－１１），相關(guān)系數(shù)為０．９９７３，目標(biāo)肽段的檢出限為０．５ｎｇ／ｍＬ，??目標(biāo)肽段的定量限為１．６ｎｇ／ｍＬ。??方法的準(zhǔn)確性和精確性主要通過樣品添加回收試驗(yàn)來評估。本試驗(yàn)選擇低Ｇｌｙｍ?Ｂｄ６０Ｋ含量??的發(fā)酵豆粕樣品中添加不同濃度的目標(biāo)肽段標(biāo)準(zhǔn)品，得到回收率。肽段的添加量的設(shè)定依據(jù)為５０??Ｈｇ生大豆蛋白完全酶解后，能夠產(chǎn)生定量肽段平均含量６０?ｆｍｏｌ的０．５倍、１倍和２倍�；厥章视赡�??３３??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Solid-state fermentation of corn-soybean meal mixed feed with Bacillus subtilis and Enterococcus faecium for degrading antinutritional factors and enhancing nutritional value[J]. Changyou Shi,Yu Zhang,Zeqing Lu,Yizhen Wang.  Journal of Animal Science and Biotechnology. 2017(04)
[2]單酶水解豆芽蛋白及其產(chǎn)物的潛在致敏性[J]. 楊秀芝,王艷,楊安樹,陳紅兵.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào). 2017(04)
[3]Fermented soybean meal improves the growth performance, nutrient digestibility, and microbial flora in piglets[J]. Lin Yuan,Juan Chang,Qingqiang Yin,Min Lu,Yuanran Di,Ping Wang,Zhixiang Wang,Erzhu Wang,Fushan Lu.  Animal Nutrition. 2017(01)
[4]大豆飼料產(chǎn)品中主要抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的檢測與分析[J]. 周天驕,譙仕彥,馬曦,賀平麗.  動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2015 (01)
[5]大豆胰蛋白酶抑制因子的分離純化[J]. 谷春梅,韓玲玲,曲洪生,宋鑫秀,趙琳琳,潘姝,秦貴信.  大豆科學(xué). 2013(01)
[6]發(fā)酵對豆粕中營養(yǎng)物質(zhì)和抗?fàn)I養(yǎng)因子的影響[J]. 姜丹,丁洪浩,張晶,沈景林,趙云.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(04)
[7]豆粕中胰蛋白酶抑制劑間接競爭酶聯(lián)免疫吸附檢測方法的研究[J]. 邢春芳,葛向陽.  飼料工業(yè). 2010(10)
[8]大豆中主要抗原蛋白的研究進(jìn)展[J]. 秦貴信,孫澤威,趙元,王濤.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(04)
[9]芯片實(shí)驗(yàn)室技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 劉曉為,張海峰,王蔚,田麗,王喜蓮.  測試技術(shù)學(xué)報(bào). 2006(06)
[10]蒸汽處理對純化大豆抗原含量及免疫原性的影響[J]. 孫鵬,秦貴信.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(05)

博士論文
[1]大豆球蛋白glycinin和β-conglycinin引發(fā)Balb/c小鼠過敏反應(yīng)及其機(jī)理的研究[D]. 劉欣.浙江大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3257456