生殖干細胞是一類具有自我更新能力,以及通過分化產(chǎn)生配子的生殖系干細胞,包括雄性動物中的精原干細胞,以及雌性動物中的雌性生殖干細胞（也叫卵原干細胞）。生殖干細胞的健康程度,以及自我更新和分化能力,直接決定著個體的生殖能力,但目前生殖干細胞自我更新和分化的分子機制尚不明確。本文從三個不同的方向分別討論了生殖干細胞的特性及在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,畜牧產(chǎn)業(yè)以及農(nóng)業(yè)經(jīng)濟中的關(guān)聯(lián)性與重要性,具體包括:以小鼠雌性生殖干細胞為研究對象,研究了小鼠雌性生殖干細胞命運調(diào)控的相關(guān)調(diào)控分子與信號通路;針對化療藥物白消安的生殖系毒副作用,探索了褪黑素在化療過程中對小鼠精原干細胞生殖力保護作用的機制;以及針對畜牧業(yè)中玉米赤霉烯酮對種公畜的生殖毒性影響,初步探索了褪黑素在緩解玉米赤霉烯酮引發(fā)的豬精原干細胞損傷中的效果。具體內(nèi)容和研究結(jié)果如下:在第一部分的研究里,我們發(fā)現(xiàn)鈣粘素蛋白CDH22是調(diào)控小鼠雌性生殖干細胞的重要膜蛋白。有報道證實大鼠CDH22能編碼長短兩種剪切型式,其中短型剪切體能通過PI3K-AKT,JAK-STAT通路促進精原干細胞的自我更新,但不存在與β-catenin的相互作用。但我們發(fā)現(xiàn)在小鼠雌性生殖干細... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
研究背景
    1.1 生殖干細胞
    1.2 原始生殖細胞
    1.3 雌性生殖干細胞
    1.4 精原干細胞
    1.5 生殖干細胞命運相關(guān)的關(guān)鍵分子
    1.6 生殖干細胞的自我更新研究進展
    1.7 化療藥物白消安及其生殖系毒副作用
    1.8 褪黑素
    1.9 凋亡促進因子P53
    1.10 玉米赤霉烯酮
第一章 CDH22對FGSCs命運的調(diào)控機制研究
    引言
    1.1 試驗材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 試驗儀器
        1.1.4 主要試劑配制
    1.2 試驗方法
        1.2.1 小鼠卵巢的固定與包埋
        1.2.2 免疫組織化學(xué)
        1.2.3 H.E.染色
        1.2.4 細胞免疫熒光
        1.2.5 BrdU熒光標(biāo)記
        1.2.6 免疫蛋白印跡
        1.2.7 RNA提取
        1.2.8 反轉(zhuǎn)錄及RT-PCR
        1.2.9 膠回收
        1.2.10 感受態(tài)的制備
        1.2.11 連接
        1.2.12 轉(zhuǎn)化
        1.2.13 篩選陽性克隆
        1.2.14 慢病毒的包裝
        1.2.15 STO細胞培養(yǎng)
        1.2.16 STO細胞的傳代
        1.2.17 STO細胞的換液
        1.2.18 STO細胞的凍存
        1.2.19 STO飼養(yǎng)層的制備
        1.2.20 雌性生殖干細胞的分離和純化
        1.2.21 雌性生殖干細胞的換液
        1.2.22 雌性生殖干細胞的傳代
        1.2.23 雌性生殖干細胞的凍存
        1.2.24 雌性生殖干細胞的解凍
        1.2.25 差異表達分析
        1.2.26 統(tǒng)計分析
    1.3 試驗結(jié)果
        1.3.1 CDH22在不同時期小鼠卵巢的表達特征分析
        1.3.2 小鼠雌性生殖干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定
        1.3.3 小鼠CDH22只編碼一種剪切型式的蛋白
        1.3.4 Cdh22 shRNA敲低效果的驗證
        1.3.5 CDH22對雌性生殖干細胞自我更新的影響
        1.3.6 CDH22對雌性生殖干細胞凋亡的影響
        1.3.7 在FGSCs中CDH22與JAK-STAT通路的相互作用
        1.3.8 在FGSCs中CDH22與β-catenin通路的相互作用
        1.3.9 CDH22在雌性生殖干細胞微環(huán)境中的調(diào)控
        1.3.10 雌性生殖干細胞生物信息學(xué)分析
        1.3.11 CDH22,AKT3,GFRα1,PI3K在雌性生殖千細胞中的表達及AKT3
        1.3.12 CDH22與PI3K-AKT通路的相互作用
        1.3.13 GDNF與PI3K-AKT通路對小鼠雌性生殖干細胞的影響
    1.4 討論
    1.5 本章小結(jié)
第二章 褪黑素挽救白消安誘導(dǎo)的精原干細胞凋亡及其生物學(xué)機制研究
    引言
    2.1 試驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試驗儀器
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 DNA提取及轉(zhuǎn)基因小鼠的基因型鑒定
        2.2.2 流式分選
        2.2.3 MEF細胞的分離
        2.2.4 MEF細胞的傳代
        2.2.5 MEF細胞的換液
        2.2.6 MEF細胞的凍存
        2.2.7 MEF飼養(yǎng)層的制備
        2.2.8 精原干細胞的分離和純化
        2.2.9 TUNEL凋亡檢測
        2.2.10 細胞內(nèi)活性氧檢測
        2.2.11 統(tǒng)計分析
    2.3 試驗結(jié)果
        2.3.1 通過體外試驗驗證不同激素緩解白消安的毒性效果
        2.3.2 檢測褪黑素受體在精原干細胞中的表達情況
        2.3.3 新注射方法的設(shè)計
        2.3.4 褪黑素對白消安注射的小鼠精原干細胞的體內(nèi)挽救作用
        2.3.5 褪黑素對白消安處理的小鼠精原干細胞的體外挽救作用
        2.3.6 褪黑素對白消安處理的K562細胞系的影響
        2.3.7 白消安對P53敲除小鼠的精原干細胞的影響
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 褪黑素挽救玉米赤霉烯酮對豬精原干細胞的毒性作用研究
    引言
    3.1 試驗材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 試驗儀器
        3.1.3 主要試劑配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 豬精原干細胞分離步驟
        3.2.2 豬睪丸組織的固定與包埋
        3.2.3 免疫組織化學(xué)
        3.2.4 H.E.染色
        3.2.5 細胞免疫熒光
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 豬精原干細胞體外分離培養(yǎng)
        3.3.2 豬精原干細胞鑒定
        3.3.3 玉米赤霉烯酮對豬精原干細胞的影響
        3.3.4 褪黑素對豬精原干細胞在玉米赤霉烯酮處理后的挽救作用
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
攻讀博士期間發(fā)表(或待發(fā)表)的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬精原干細胞體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 師如意,衛(wèi)恒習(xí),李莉,白銀山,張秀娟,吳珍芳,張守全.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2013(02)
[2]抽樣調(diào)查北京地區(qū)豬場飼料及飼料原料玉米赤霉烯酮污染狀況[J]. 雷元培,馬秋剛,謝實勇,趙麗紅,范彧,李笑櫻,王梁,譙仕彥,云鵬,計成.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2012(05)
[3]玉米赤霉烯酮的代謝、毒性及其預(yù)防措施[J]. 姜淑貞,楊維仁,楊在賓.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2011(02)
[4]豬精原干細胞研究進展[J]. 吳建英,趙爽,岳占碰,張學(xué)明.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2008(10)
[5]玉米赤霉烯酮毒性機理研究進展[J]. 鄧友田,袁慧.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2007(02)
[6]玉米赤霉烯酮對家畜繁殖性能和人體健康的影響[J]. 單妹,許梓榮,馮建蕾.  中國畜牧獸醫(yī). 2006(01)
[7]豬玉米赤霉烯酮中毒與繁殖障礙[J]. 肖治軍.  中國畜牧獸醫(yī). 2005(02)
[8]玉米赤霉烯酮毒性研究進展(綜述)[J]. 王怡凈,張立實.  中國食品衛(wèi)生雜志. 2002(05)

碩士論文
[1]豬精原干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定[D]. 寇小琴.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[2]五指山小型豬精原干細胞體外分離與培養(yǎng)方法的研究[D]. 賈映輝.遼寧師范大學(xué) 2009



本文編號：3187052