天然免疫反應是機體抵御病原微生物入侵的第一道防線。宿主細胞通過模式識別受體識別病原微生物的核酸,誘導I型干擾素、炎性因子以及抗病原微生物效應蛋白的表達。RNA病毒感染機體后,其產(chǎn)生的核酸被位于胞漿的RIG-I（retinoic acid-inducible gene I）和MDA5（melanoma differentiation-associated gene 5）識別。RIG-I和MDA5與病毒RNA結合以后,其構象發(fā)生變化,然后被招募到天然免疫接頭分子VISA上。之后,VISA發(fā)生類朊病毒樣聚集,并通過它的TRAF結合基序來招募下游的TRAF2/3/5/6。TRAF家族蛋白進一步招募TBK1以及I（42）（42）復合物并磷酸化IRF3以及I?B?,最終導致IRF3以及NF-?B的激活以及下游抗病毒應答的產(chǎn)生。R（45）（32）病毒入侵機體后,機體內的RIG-I樣受體是誘導天然免疫反應的關鍵蛋白,但是作為RLRs成員的RIG-I和MDA5是如何識別病毒核酸需要進一步研究。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)過表達人源G3BP1（Ras GTPase-activating protein-SH3 do... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 天然免疫概況
        1.1.1 天然免疫基本介紹
        1.1.2 抗病毒天然免疫及模式識別受體
    1.2 抗病毒天然免疫信號轉導及其調節(jié)機制
        1.2.1 TLRs介導的天然免疫信號轉導
        1.2.2 RLRs介導的天然免疫信號轉導機制
    1.3 RNA結合蛋白家族在抗病毒天然免疫中的作用
        1.3.1 RNA結合蛋白家族種類與結構
        1.3.2 RNA結合蛋白調節(jié)天然免疫的抗病毒機制
    1.4 口蹄疫及口蹄疫病毒
        1.4.1 口蹄疫
        1.4.2 口蹄疫病毒
        1.4.3 口蹄疫病毒的結構與功能
    1.5 FMDV蛋白研究進展
        1.5.1 FMDV蛋白與宿主互作研究進展
        1.5.2 FMDV蛋白調節(jié)天然免疫研究進展
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 G3BP1 正調控RIG-I信號通路的機制研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 載體、細胞、病毒以及生化試劑
        2.1.2 儀器設備
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 質粒的構建
        2.1.5 細胞轉染
        2.1.6 免疫共沉淀和免疫印跡
        2.1.7 雙熒光素酶報告基因實驗
        2.1.8 VSV空斑實驗
        2.1.9 激光共聚焦顯微鏡實驗
        2.1.10 實時熒光定量PCR
        2.1.11 過表達,RNAi,敲除細胞系構建
        2.1.12 體外pull down實驗
    2.2 結果
        2.2.1 過表達G3BP1在RNA病毒誘導的I型干擾素信號通路中的作用
        2.2.2 沉默和敲除G3BP1對RNA病毒的調節(jié)作用
        2.2.3 G3BP1增強細胞的抗病毒應答
        2.2.4 G3BP1在VISA上游水平調節(jié)天然免疫信號通路
        2.2.5 G3BP1與RIG-I有相互作用
        2.2.6 G3BP1拮抗RNF125介導RIG-I的降解并促進RIG-I結合5′ppp-dsRNA
        2.2.7 G3BP1 增加RNF125 自身泛素化
    2.3 討論
第三章 口蹄疫病毒3A抑制G3BP1 介導的RIG-I信號通路機制研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 載體、細胞、病毒以及生化試劑
        3.1.2 儀器設備
        3.1.3 試劑配制
        3.1.4 質粒的構建
        3.1.5 病毒感染及病毒滴度測定
        3.1.6 病毒拷貝數(shù)測定
        3.1.7 實時熒光定量PCR
    3.2 實驗結果
        3.2.1 G3BP1 以及它的突變體對FMDV的影響
        3.2.2 豬源G3BP1 促進RLH介導的信號轉導
        3.2.3 FMDV3A與 G3BP1 相互作用
        3.2.4 FMDV3A增強FMDV復制和增殖
        3.2.5 FMDV3A抑制G3BP1 介導的RLH抗病毒信號
        3.2.6 口蹄疫病毒3A通過自噬途徑降解G3BP1
        3.2.7 口蹄疫病毒3A通過上調LRRC25的表達來降解G3BP1
        3.2.8 LRRC25 增加FMDV復制和增殖
        3.2.9 多種小RNA病毒的3A蛋白通過LRRC25 蛋白降解G3BP1
    3.3 討論
第四章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[5]雞傳染性法氏囊病毒VP4、VP5蛋白在感染中對宿主天然防御能力的影響研究[D]. 李雙潔.南京農(nóng)業(yè)大學 2016
[6]腺苷A2A受體激動劑緩解小鼠DSS結腸炎及機制研究[D]. 萬萍.南昌大學醫(yī)學院 2015
[7]子宮頸癌細胞增殖轉移與基因表達關系的實驗研究[D]. 秦杰.中南大學 2012



本文編號：3168429