脂肪酸組成是影響牛肉營養(yǎng)、品質(zhì)和風(fēng)味的重要表型性狀。如何平衡脂肪酸組成,提高肉質(zhì)和營養(yǎng)水平,已成為育種工作新的研究方向。長連脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）是調(diào)控體內(nèi)脂肪酸組成總體平衡的關(guān)鍵基因,在脂肪酸延伸過程中發(fā)揮重要作用。已有研究報(bào)道過表達(dá)ELOVL6促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖,但關(guān)于ELOVL6能否調(diào)控前體脂肪細(xì)胞的增殖尚無明確報(bào)道。ELOVL6參與脂質(zhì)代謝,但關(guān)于ELOVL6參與脂質(zhì)代謝的下游基因和信號(hào)通路尚不完全明確,ELOVL6上游調(diào)控因子有待進(jìn)一步研究。基于此,本研究以西北農(nóng)林科技大學(xué)選育的秦川牛肉用新品系（以下簡稱“秦川肉�！保檠芯繉�(duì)象,研究了ELOVL6在前體脂肪細(xì)胞增殖、凋亡和脂質(zhì)代謝中的調(diào)控作用,旨在為秦川牛肉用遺傳改良和分子育種提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.ELOVL6基因在秦川肉牛不同組織中廣泛表達(dá),小腸中表達(dá)量最高,其次表達(dá)量較高的組織依次是網(wǎng)胃和脂肪,心臟、肌肉和脾臟中表達(dá)量較低。免疫熒光結(jié)果表明,ELOVL6蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。2.ELOVL6基因與牛前體脂肪細(xì)胞增殖呈正相關(guān)。干擾ELOVL6抑制了細(xì)胞增殖,阻滯了細(xì)胞由G2期進(jìn)入M期。ELOV... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 脂肪酸合成及分類
        1.1.1 脂肪酸的合成
        1.1.2 脂肪酸的主要分類
    1.2 脂肪細(xì)胞的增殖
    1.3 ELOVL蛋白家族
    1.4 ELOVL6基因結(jié)構(gòu)與功能概述
        1.4.1 ELOVL6對(duì)細(xì)胞增殖的作用
        1.4.2 ELOVL6對(duì)脂肪酸代謝的作用
        1.4.3 ELOVL6轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
        1.4.4 ELOVL6對(duì)疾病的作用
    1.5 本研究的目的與意義
    1.6 研究內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.6.1 研究內(nèi)容
        1.6.2 技術(shù)路線
第二章 秦川肉牛ELOVL6 CDS克隆及表達(dá)模式分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 ELOVL6基因序列分析
        2.2.2 牛ELOVL6 基因CDS區(qū)克隆與鑒定
        2.2.3 ELOVL6蛋白序列生物進(jìn)化與同源性分析
        2.2.4 ELOVL6組織表達(dá)譜分析及亞細(xì)胞定位
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 ELOVL6對(duì)秦川肉牛前體脂肪細(xì)胞增殖的作用機(jī)理研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 ELOVL6過表達(dá)腺病毒載體的構(gòu)建與重組腺病毒包裝
        3.2.2 ELOVL6干擾腺病毒載體的構(gòu)建與重組腺病毒包裝
        3.2.3 ELOVL6促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞的增殖
        3.2.4 ELOVL6干擾延長前體脂肪細(xì)胞增殖周期
        3.2.5 ELOVL6促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)
        3.2.6 ELOVL6 通過m TOR/p70S6K信號(hào)通路促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞增殖
        3.2.7 干擾ELOVL6促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞凋亡
    3.3 討論
        3.3.1 腺病毒載體系統(tǒng)介導(dǎo)ELOVL6的干擾與過表達(dá)
        3.3.2 ELOVL6促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞的增殖
        3.3.3 ELOVL6激活m TOR信號(hào)通路
        3.3.4 干擾ELOVL6促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞凋亡
    3.4 小結(jié)
第四章 ELOVL6對(duì)秦川肉牛脂肪細(xì)胞脂質(zhì)代謝的作用研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 ELOVL6隨脂肪細(xì)胞分化的表達(dá)譜分析
        4.2.2 ELOVL6過表達(dá)、干擾效率檢測
        4.2.3 脂滴染色
        4.2.4 ELOVL6影響脂肪細(xì)胞脂肪酸組成
        4.2.5 ELOVL6 影響ELOVLs家族其他基因表達(dá)量變化
        4.2.6 RNA-seq測序驗(yàn)證ELOVL6 基因?qū)χ炯?xì)胞脂質(zhì)代謝的作用
        4.2.7 q RT-PCR驗(yàn)證脂質(zhì)代謝相關(guān)差異表達(dá)基因
    4.3 討論
        4.3.1 ELOVL6影響秦川肉牛脂肪細(xì)胞脂肪酸組成
        4.3.2 ELOLV6調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)通路和基因的表達(dá)
    4.4 小結(jié)
第五章 轉(zhuǎn)錄因子PU.1、SREBP1和KLF6對(duì)ELOVL6 啟動(dòng)子活性的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 ELOVL6啟動(dòng)子區(qū)域擴(kuò)增
        5.2.2 ELOVL6 啟動(dòng)子序列分析及Cp G島預(yù)測
        5.2.3 ELOVL6逐段缺失片段擴(kuò)增
        5.2.4 重組質(zhì)粒p GL3-ELOVL6 Promoter的鑒定
        5.2.5 ELOVL6啟動(dòng)子逐段缺失片段活性檢測
        5.2.6 PU.1、KLF6和SREBP1 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)保守性預(yù)測
        5.2.7 PU.1、KLF6和SREBP1 結(jié)合位點(diǎn)突變影響ELOVL6 啟動(dòng)子活性
        5.2.8 EMSA驗(yàn)證PU.1、KLF6和SREBP1 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合ELOVL6 啟動(dòng)子
        5.2.9 Ch IP驗(yàn)證PU.1和SREBP1 體內(nèi)結(jié)合于ELOVL6 啟動(dòng)子
        5.2.10 干擾PU.1、KLF6和SREBP1 影響ELOVL6 啟動(dòng)子的活性
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
第六章 結(jié)論
    6.1 研究結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄A 主要試劑與設(shè)備
    附錄B 試驗(yàn)操作步驟
    附錄C ELOVL6 基因CDS和啟動(dòng)子序列
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]秦川牛肉用選育改良及產(chǎn)業(yè)化開發(fā)[J]. 昝林森,王洪程,梅楚剛.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2015(01)
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博士論文
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[2]基于多組學(xué)的秦川牛、黑毛和牛、安格斯牛與大額牛遺傳特性研究[D]. 梅楚剛.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
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碩士論文
[1]西農(nóng)薩能奶山羊超長鏈脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)理研究[D]. 赫秋亞.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]奶山羊乳腺上皮細(xì)胞超長鏈脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因的超表達(dá)與干擾研究[D]. 吳敏.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[3]胃癌和癌旁組織抑癌基因蛋白R(shí)unx3的表達(dá)及其與p21相關(guān)性研究[D]. 張湧.蘭州大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3167254