脂肪酸組成是影響牛肉營養(yǎng)、品質和風味的重要表型性狀。如何平衡脂肪酸組成,提高肉質和營養(yǎng)水平,已成為育種工作新的研究方向。長連脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）是調控體內(nèi)脂肪酸組成總體平衡的關鍵基因,在脂肪酸延伸過程中發(fā)揮重要作用。已有研究報道過表達ELOVL6促進血管平滑肌細胞的增殖,但關于ELOVL6能否調控前體脂肪細胞的增殖尚無明確報道。ELOVL6參與脂質代謝,但關于ELOVL6參與脂質代謝的下游基因和信號通路尚不完全明確,ELOVL6上游調控因子有待進一步研究�；诖�,本研究以西北農(nóng)林科技大學選育的秦川牛肉用新品系（以下簡稱“秦川肉�！保檠芯繉ο�,研究了ELOVL6在前體脂肪細胞增殖、凋亡和脂質代謝中的調控作用,旨在為秦川牛肉用遺傳改良和分子育種提供理論依據(jù)。主要研究結果如下:1.ELOVL6基因在秦川肉牛不同組織中廣泛表達,小腸中表達量最高,其次表達量較高的組織依次是網(wǎng)胃和脂肪,心臟、肌肉和脾臟中表達量較低。免疫熒光結果表明,ELOVL6蛋白主要在細胞質中表達。2.ELOVL6基因與牛前體脂肪細胞增殖呈正相關。干擾ELOVL6抑制了細胞增殖,阻滯了細胞由G2期進入M期。ELOV... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號對照表
第一章 文獻綜述
    1.1 脂肪酸合成及分類
        1.1.1 脂肪酸的合成
        1.1.2 脂肪酸的主要分類
    1.2 脂肪細胞的增殖
    1.3 ELOVL蛋白家族
    1.4 ELOVL6基因結構與功能概述
        1.4.1 ELOVL6對細胞增殖的作用
        1.4.2 ELOVL6對脂肪酸代謝的作用
        1.4.3 ELOVL6轉錄調控研究
        1.4.4 ELOVL6對疾病的作用
    1.5 本研究的目的與意義
    1.6 研究內(nèi)容及技術路線
        1.6.1 研究內(nèi)容
        1.6.2 技術路線
第二章 秦川肉牛ELOVL6 CDS克隆及表達模式分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗方法
    2.2 結果與分析
        2.2.1 ELOVL6基因序列分析
        2.2.2 牛ELOVL6 基因CDS區(qū)克隆與鑒定
        2.2.3 ELOVL6蛋白序列生物進化與同源性分析
        2.2.4 ELOVL6組織表達譜分析及亞細胞定位
    2.3 討論
    2.4 小結
第三章 ELOVL6對秦川肉牛前體脂肪細胞增殖的作用機理研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗方法
    3.2 結果與分析
        3.2.1 ELOVL6過表達腺病毒載體的構建與重組腺病毒包裝
        3.2.2 ELOVL6干擾腺病毒載體的構建與重組腺病毒包裝
        3.2.3 ELOVL6促進前體脂肪細胞的增殖
        3.2.4 ELOVL6干擾延長前體脂肪細胞增殖周期
        3.2.5 ELOVL6促進細胞增殖相關基因的表達
        3.2.6 ELOVL6 通過m TOR/p70S6K信號通路促進前體脂肪細胞增殖
        3.2.7 干擾ELOVL6促進前體脂肪細胞凋亡
    3.3 討論
        3.3.1 腺病毒載體系統(tǒng)介導ELOVL6的干擾與過表達
        3.3.2 ELOVL6促進前體脂肪細胞的增殖
        3.3.3 ELOVL6激活m TOR信號通路
        3.3.4 干擾ELOVL6促進前體脂肪細胞凋亡
    3.4 小結
第四章 ELOVL6對秦川肉牛脂肪細胞脂質代謝的作用研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗方法
    4.2 結果與分析
        4.2.1 ELOVL6隨脂肪細胞分化的表達譜分析
        4.2.2 ELOVL6過表達、干擾效率檢測
        4.2.3 脂滴染色
        4.2.4 ELOVL6影響脂肪細胞脂肪酸組成
        4.2.5 ELOVL6 影響ELOVLs家族其他基因表達量變化
        4.2.6 RNA-seq測序驗證ELOVL6 基因對脂肪細胞脂質代謝的作用
        4.2.7 q RT-PCR驗證脂質代謝相關差異表達基因
    4.3 討論
        4.3.1 ELOVL6影響秦川肉牛脂肪細胞脂肪酸組成
        4.3.2 ELOLV6調控脂質代謝相關通路和基因的表達
    4.4 小結
第五章 轉錄因子PU.1、SREBP1和KLF6對ELOVL6 啟動子活性的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 試驗方法
    5.2 結果與分析
        5.2.1 ELOVL6啟動子區(qū)域擴增
        5.2.2 ELOVL6 啟動子序列分析及Cp G島預測
        5.2.3 ELOVL6逐段缺失片段擴增
        5.2.4 重組質粒p GL3-ELOVL6 Promoter的鑒定
        5.2.5 ELOVL6啟動子逐段缺失片段活性檢測
        5.2.6 PU.1、KLF6和SREBP1 轉錄因子結合位點保守性預測
        5.2.7 PU.1、KLF6和SREBP1 結合位點突變影響ELOVL6 啟動子活性
        5.2.8 EMSA驗證PU.1、KLF6和SREBP1 轉錄因子結合ELOVL6 啟動子
        5.2.9 Ch IP驗證PU.1和SREBP1 體內(nèi)結合于ELOVL6 啟動子
        5.2.10 干擾PU.1、KLF6和SREBP1 影響ELOVL6 啟動子的活性
    5.3 討論
    5.4 小結
第六章 結論
    6.1 研究結論
    6.2 創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
    附錄A 主要試劑與設備
    附錄B 試驗操作步驟
    附錄C ELOVL6 基因CDS和啟動子序列
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[5]miR-664下調靶基因FOXO4促進骨肉瘤細胞惡性增殖及機制研究[D]. 陳斌.南方醫(yī)科大學 2016
[6]miR-224、miR-146b、miR-215和miR-135a 對脂肪細胞分化和脂質代謝的作用研究[D]. 彭永東.華中農(nóng)業(yè)大學 2014
[7]SREBPs調控牛前體脂肪細胞與成纖維細胞脂質代謝的研究[D]. 付常振.西北農(nóng)林科技大學 2014
[8]Hedgehog信號通路調控牛肌衛(wèi)星細胞增殖和分化的研究[D]. 劉揚.西北農(nóng)林科技大學 2014
[9]牛CCAAT增強子結合蛋白家族（C/EBPs）誘導細胞轉分化的研究[D]. 王虹.西北農(nóng)林科技大學 2013
[10]真核基因轉錄調控元件識別及轉錄調控關系構建[D]. 王進.南京大學 2011

碩士論文
[1]西農(nóng)薩能奶山羊超長鏈脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因啟動子轉錄調控機理研究[D]. 赫秋亞.西北農(nóng)林科技大學 2016
[2]奶山羊乳腺上皮細胞超長鏈脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）基因的超表達與干擾研究[D]. 吳敏.西北農(nóng)林科技大學 2014
[3]胃癌和癌旁組織抑癌基因蛋白Runx3的表達及其與p21相關性研究[D]. 張湧.蘭州大學 2007



本文編號：3167254