【目的】疾病的預(yù)防與控制是確保人和動(dòng)物健康的關(guān)鍵。病毒性傳染病的記載已有數(shù)千年,嚴(yán)重危害人類和動(dòng)物的生存與健康。分離和鑒定病毒以及確定病毒與疾病和宿主的關(guān)系是預(yù)防、診斷和治療病毒性傳染病的首要任務(wù)。下一代測(cè)序（NGS）技術(shù)以高通量、低成本和快速為主要特征,克服了傳統(tǒng)技術(shù)方法的局限性并滿足大規(guī)模測(cè)序任務(wù)的要求,是目前快速鑒定和發(fā)現(xiàn)未知病原體的最高效而準(zhǔn)確的技術(shù)。RNA病毒的快速檢測(cè),對(duì)于診斷、治療、控制和預(yù)防由RNA病毒引起人和動(dòng)物的感染性疾病至關(guān)重要。近年來,下一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,創(chuàng)新了RNA病毒檢測(cè)方法。NGS可以通過一些隨機(jī)模式揭示標(biāo)本內(nèi)大量的核酸序列（DNA或RNA）,并可同時(shí)檢測(cè)各種RNA病毒。這些RNA病毒基因組的檢測(cè),不僅廣泛應(yīng)用于感染性疾病的診斷,還廣泛應(yīng)用于新型病毒的鑒定和宿主與病毒關(guān)系的研究。在使用NGS技術(shù)進(jìn)行測(cè)序之前,RNA必須被逆轉(zhuǎn)錄,由于臨床標(biāo)本中的病毒RNA數(shù)量有限、容易發(fā)生降解,因此制備有效的測(cè)序文庫(kù)仍然是基于NGS技術(shù)檢測(cè)RNA病毒基因組的關(guān)鍵,但其方法仍然復(fù)雜,需要進(jìn)一步優(yōu)化。為了更好地鑒定RNA病毒,本研究嘗試設(shè)計(jì)一種操作簡(jiǎn)便、測(cè)序結(jié)果更為理想、花費(fèi)... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

種文庫(kù)構(gòu)建方法技術(shù)線路圖

圖 1-1 3 種文庫(kù)構(gòu)建方法技術(shù)線路圖Fig. 1-1 Technology roadmap of library construction bythree methods圖1-2 文庫(kù)制備方法1Fig.1-2 Method 1 for libraries preparation

2.2.2.2 使用方法 2 構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)該方法是自行發(fā)明的，經(jīng)過多次臨床應(yīng)用和修飾，總結(jié)出可靠的技術(shù)路線如圖1-3。（1）反轉(zhuǎn)錄：①在無(wú)核酸酶的 0.2mL 的PCR 管中加入 2μL 無(wú)核酸酶的水、1μL 引物A15N6（5'- GTGTCTCCGACTCAGNNNNNN -3'）和 8μL 的 RNA，充分混勻后，瞬時(shí)離心，72℃變性 5min，立即置冰上 3min，瞬時(shí)離心。②在上述反應(yīng)液中，加入下表（表 1-12）所示反轉(zhuǎn)錄混合液，共 20μL 反應(yīng)體系。③在熱循環(huán)儀中，設(shè)置反轉(zhuǎn)錄程序如下表（表 1-13）所示。圖1-3 文庫(kù)制備方法2Fig.1-3 Method 2 for libraries preparation表 1-12

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2011年德國(guó)腸出血性大腸桿菌O104:H4疫情流行病學(xué)調(diào)查及啟示[J]. 黃熙,盧玲玲,鄧小玲,黃瓊,梁駿華,張永慧,楊杏芬.  中華流行病學(xué)雜志. 2012 (01)
[2]青海省2004年人間鼠疫分離株基因分型及流行病學(xué)意義[J]. 祁芝珍,戴二黑,周冬生,楊永海,于守鴻,戴瑞霞,趙海紅,李敏,楊瑞馥.  中華流行病學(xué)雜志. 2006(04)



本文編號(hào)：3144468