本文關(guān)鍵詞：花鱸繁殖相關(guān)基因的克隆及其在雄性個(gè)體中的表達(dá)調(diào)控分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本文以山東近海網(wǎng)箱養(yǎng)殖的雄性花鱸(Lateolabrax maculatus)為研究對(duì)象,采用組織學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)和分子生物學(xué)等方法,研究花鱸精巢發(fā)育特定時(shí)期給予激素和鹽度處理后其繁殖生理功能的變化規(guī)律及分子機(jī)制等。研究結(jié)果和結(jié)論如下：1.花鱸繁殖相關(guān)基因的克隆采用RACE技術(shù),利用5’和3’特異引物獲得基因全長(zhǎng)cDNA序列�？寺〉玫交|繁殖相關(guān)的全長(zhǎng)基因共12個(gè),分別為(GTHa亞基、FSHβ亞基、LHβ亞基、StAR、 AMH,、FTZ-Fla、FTZ-Flb、CYP171、3β-HSD、vasa、cGnRH-Ⅱ和PRL),以及非全長(zhǎng)基因6個(gè)(CYP17-Ⅱ、FSHR、PRLR、GR、AR、SOX9)。通過(guò)Clustal W進(jìn)行多序列比對(duì)并利用MEGA 5.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,結(jié)果顯示所獲得的基因在進(jìn)化上具有高的保守性且都與鱸形目相應(yīng)物種的親緣關(guān)系最近。2.花鱸繁殖相關(guān)基因的周期和空間表達(dá)對(duì)花鱸繁殖相關(guān)基因(GTHs亞基、StAR、AMH、FTZ-F1、CYP171、3β-HSD和AR)在繁殖周期內(nèi)的表達(dá)情況進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)所檢測(cè)基因的表達(dá)量在繁殖周期內(nèi)都發(fā)生了顯著變化,暗示了它們參與了花鱸精巢發(fā)育和繁殖過(guò)程。對(duì)于這些基因的空間表達(dá)模式研究發(fā)現(xiàn),它們都在類固醇生成相關(guān)組織如精巢、腦、垂體、肝臟、頭腎等中表達(dá)量高,但在其他組織中也可以檢測(cè)到基因表達(dá)信息。采用原位雜交技術(shù)檢測(cè)精巢內(nèi)CYP17　I和3β-HSD基因的定位,發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)基因都在精巢間質(zhì)區(qū)域檢測(cè)到陽(yáng)性信號(hào)。同時(shí)結(jié)合組織學(xué)和激素水平的研究,從而對(duì)花鱸繁殖相關(guān)基因的功能進(jìn)行更深入的探索。3.雄性花鱸在激素處理后的組織學(xué)、睪酮水平及繁殖相關(guān)基因表達(dá)量的變化給予雄性花鱸注射hCG/GnRHa后,發(fā)現(xiàn)精巢生殖細(xì)胞發(fā)育程度提高,血清中睪酮含量升高。外源激素對(duì)腦、垂體和精巢內(nèi)GTHs亞基基因,精巢中的StAR、FTZ-F1、 CYP171、3β-HSD以及腦中的AR基因的表達(dá)具有促進(jìn)作用,而對(duì)于精巢內(nèi)的AMH和AR基因的mRNA表達(dá)有抑制作用。依據(jù)這些結(jié)果推測(cè)外源激素可以促進(jìn)雄性花鱸精巢細(xì)胞的發(fā)育,而且所檢測(cè)的基因都受到促性腺激素和促性腺激素釋放激素的調(diào)控。4.雄性花鱸在鹽度處理后滲透壓水平、精巢組織學(xué)、激素水平及繁殖相關(guān)基因表達(dá)量的變化經(jīng)過(guò)半咸水和淡水處理1-8d后,發(fā)現(xiàn)花鱸血清滲透壓水平顯著降低,這與血清中睪酮水平(1-6d)以及精巢組織學(xué)變化情況一致。淡水組中,血清FSH和LH濃度降低,而在半咸水組和淡水組鹽度適應(yīng)的前兩天,垂體中的GTHα、FSHβ和LHβ亞基的轉(zhuǎn)錄水平明顯增加。半咸水組和淡水組,尤其是淡水組內(nèi)的花鱸精巢內(nèi)3β-HSD、CYP17Ⅰ以及AMH基因mRNA表達(dá)量呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)。而半咸水組下4-8d內(nèi)AR基因mRNA的表達(dá)量卻逐步升高。這些結(jié)果暗示了劇烈的鹽度波動(dòng)可能對(duì)花鱸精巢的發(fā)育產(chǎn)生抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：花鱸 精子發(fā)生 類固醇生成 hCG和GnRHa激素 鹽度
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 前言12-14
• 第1章 文獻(xiàn)綜述14-25
• 1 花鱸綜述14-17
• 1.1.花鱸生物學(xué)特征14
• 1.2. 花鱸國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀14-17
• 2 影響硬骨魚類繁殖內(nèi)分泌的內(nèi)源因子17-19
• 3 硬骨魚類類固醇生成途徑及繁殖相關(guān)基因的研究進(jìn)展19-24
• 4.本研究的目的和意義24-25
• 第2章 花鱸繁殖相關(guān)基因的克隆和進(jìn)化分析25-52
• 1. 材料和方法25-29
• 2. 結(jié)果29-48
• 2.1. 花鱸GTHs亞基基因的氨基酸序列以及進(jìn)化分析29-34
• 2.2. 花鱸StAR基因的氨基酸序列及進(jìn)化分析34-36
• 2.3. 花鱸AMH基因的氨基酸序列及進(jìn)化分析36-38
• 2.4. 花鱸FTZ-F1a和FTZ-F1b基因的氨基酸序列及進(jìn)化分析38-40
• 2.5. 花鱸CYP17Ⅰ基因的氨基酸序列及進(jìn)化分析40-42
• 2.6. 花鱸3 β-HSD基因的氨基酸序列及進(jìn)化分析42-45
• 2.7. 花鱸AR基因的氨基酸序列及進(jìn)化分析45-47
• 2.11 其他基因的獲得47-48
• 3 討論48-52
• 第3章 花鱸繁殖相關(guān)基因的周期和空間表達(dá)52-69
• 1 材料和方法52-55
• 2 結(jié)果55-63
• 2.1 花鱸精巢發(fā)育周期的組織學(xué)鑒定55-57
• 2.2 花鱸精巢GSI變化57
• 2.3. 花鱸精巢發(fā)育周期內(nèi)睪酮含量的變化57-58
• 2.4. 花鱸繁殖周期內(nèi)繁殖相關(guān)基因的表達(dá)量變化58-61
• 2.4.1 花鱸繁殖周期內(nèi)GTHs亞基基因表達(dá)的變化58-59
• 2.4.2 花鱸繁殖周期內(nèi)StAR、AMH和FTZ-F1基因表達(dá)的變化59-60
• 2.4.3 花鱸繁殖周期內(nèi)CYP17Ⅰ、3β-HSD和AR基因表達(dá)的變化60-61
• 2.5 花鱸繁殖相關(guān)基因的組織表達(dá)模式61-63
• 2.5.1 花鱸GTHs亞基基因的組織表達(dá)情況61-62
• 2.5.2 花鱸StAR、AMH和FTZ-F1基因的組織表達(dá)情況62
• 2.5.3 花鱸CYP17Ⅰ、3β-HSD和AR基因的組織表達(dá)情況62-63
• 3 討論63-69
• 第4章 雄性花鱸在外源激素處理后的繁殖生理機(jī)能變化及分子機(jī)制69-86
• 1. 材料和方法69-70
• 2. 結(jié)果70-81
• 2.1 雄性花鱸在激素處理后性腺發(fā)育情況的變化71-72
• 2.2 雄性花鱸在激素處理后精巢GSI的變化72
• 2.3 雄性花鱸在激素處理后血清中睪酮含量的變化72-73
• 2.4 雄性花鱸在激素處理后腦、垂體以及精巢內(nèi)GTHs亞基表達(dá)量的變化73-77
• 2.4.1 雄性花鱸在激素處理后腦中GTHs亞基表達(dá)量的變化73-74
• 2.4.2 雄性花鱸在激素處理后垂體中GTHs亞基表達(dá)量的變化74-76
• 2.4.3 雄性花鱸在激素處理后精巢中GTHs亞基表達(dá)量的變化76-77
• 2.5 雄性花鱸在激素處理后精巢內(nèi)StAR，AMH和FTZ-F1基因表達(dá)量的變化77-79
• 2.6 雄性花鱸在激素處理后精巢內(nèi)CYP17Ⅰ,3β-HSD和AR基因表達(dá)量的變化79-80
• 2.7 雄性花鱸在激素處理后腦中AR基因表達(dá)量的變化80-81
• 3 討論81-86
• 第5章 雄性花鱸在鹽度處理后的繁殖生理功能變化及分子機(jī)制86-104
• 1 材料和方法87-88
• 2 結(jié)果88-99
• 2.1 雄性花鱸血清滲透壓在鹽度處理后的變化88-89
• 2.2 雄性花鱸精巢發(fā)育狀態(tài)在鹽度處理后的變化89
• 2.3 雄性花鱸血清中激素含量在鹽度處理后的變化89-91
• 2.3.1 雄性花鱸血清中T、FSH和LH激素含量在鹽度處理后的變化89-91
• 2.3.2 雄性花鱸皮質(zhì)醇激素含量在鹽度處理后的變化91
• 2.4 雄性花鱸垂體中GTHs亞基基因表達(dá)量在鹽度處理后的變化91-93
• 2.5 雄性花鱸垂體中催乳素基因表達(dá)量在鹽度處理后的變化93
• 2.6 雄性花鱸精巢中StAR、AMH和FTZ-F1基因表達(dá)量在鹽度處理后的變化93-95
• 2.7 雄性花鱸精巢中CYP17Ⅰ、3β-HSD和AR基因表達(dá)量在鹽度處理后的變化95-98
• 2.8 雄性花鱸精巢中GR和PRLR基因表達(dá)量在鹽度處理后的變化98-99
• 3 討論99-104
• 第6章 花鱸CYP17Ⅰ和3β-HSD基因在精巢內(nèi)的定位表達(dá)104-116
• 1 材料和方法104-109
• 2 結(jié)果109-113
• 2.1. 探針合成過(guò)程中的檢測(cè)結(jié)果109-110
• 2.2 斑點(diǎn)檢測(cè)RNA探針的濃度的結(jié)果110-111
• 2.3 原位雜交結(jié)果111-113
• 2.3.1 花鱸精巢CYP17Ⅰ基因mRNA的原位雜交結(jié)果111-112
• 2.3.2 花鱸精巢3β-HSD基因mRNA的原位雜交結(jié)果112-113
• 3 討論113-116
• 附錄116-120
• 中英文縮略詞表116-117
• 原位雜交實(shí)驗(yàn)中相關(guān)試劑的配置117-120
• 參考文獻(xiàn)120-147
• 致謝147-148
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷148

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