雞球蟲病是家禽的腸道胞內(nèi)寄生原蟲病。該病嚴(yán)重影響飼料轉(zhuǎn)化效率,所以造成嚴(yán)重的損失。雞球蟲病目前基本通過使用化學(xué)藥物進(jìn)行預(yù)防治療,然而,隨著耐藥性的產(chǎn)生和食品安全問題日益突出,有效的疫苗預(yù)防措施備受關(guān)注。本研究選取了四種巨型艾美耳球蟲（Eimeria maxima）侵入過程相關(guān)的蛋白,進(jìn)行克隆、表達(dá)并評(píng)價(jià)其免疫保護(hù)力,旨在為發(fā)現(xiàn)新抗原以及評(píng)價(jià)其對(duì)宿主在抗巨型艾美耳球蟲感染過程中所產(chǎn)生的免疫保護(hù)力,提供新型疫苗候選保護(hù)性抗原。1.巨型艾美耳球蟲表面蛋白基因的分子特性研究及免疫保護(hù)性研究評(píng)估本章研究成功擴(kuò)增了E.maxima表面蛋白（EmSAG）的開放閱讀框（ORF）,序列分析后發(fā)現(xiàn)該基因由645對(duì)堿基所組成,編碼214個(gè)氨基酸。隨后,將EmSAG基因全長分別亞克隆到pET-32a（+）和pVAX1中。RT-PCR和免疫印跡分析證實(shí)靶基因成功轉(zhuǎn)錄并在雛雞體內(nèi)表達(dá)。激光共聚焦試驗(yàn)結(jié)果證實(shí),EmSAG在巨型艾美耳球蟲的子孢子表面分布,試驗(yàn)結(jié)果同時(shí)發(fā)現(xiàn)EmSAG也存在于裂殖子的表面。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),rEmSAG和pVAX1-SAG都可以明顯減輕空腸病變,提高相對(duì)增重率。EmSAG疫苗可減少雛雞的卵囊... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１艾美耳球蟲生活史（引自Ｔａｒｅｋ，?２０１６）??Ｆｉｇ．?１－１?ｌｉｆｅ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?Ｅｉｍｅｒｉａ??

ＰＥ單克隆抗體進(jìn)行孵育，后轉(zhuǎn)入流式管后上機(jī)檢測。??１．２．１７數(shù)據(jù)分析??使用統(tǒng)計(jì)軟件ｆｆｉＭ?ＳＰＳＳ?（ｖｅｒｓｉｏｎ?２２．０?ｆｏｒ?ｗｉｎｄｏｗｓ）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。組間差異顯??著性分析使用ｏｎｅ－ｗａｙ?ＡＮＯＶＡ方法進(jìn)行比較，組間Ｐ＜０．０５時(shí)被認(rèn)為差異顯著。??２結(jié)果??２．１?ＥｍＳＡＧ基因的生物信息學(xué)分析??通過ＤＮＡＳＴＡＲ軟件分析結(jié)果顯示ＳＡＧ蛋白理論分子量２４．７３?ｋＤ，等電點(diǎn)４．８０８。??使用Ｍｅｇａ?６軟件構(gòu)建進(jìn)化樹，以分析ＥｍＳＡＧ基因的同源性（圖３－２），結(jié)果顯示??ＥｍＳＡＧ與凡紀(jì)ＴＡ４和Ｅ?的ＮＡ４基因、ＳＡＧ基因的親源關(guān)系較近，與??其他種的ＳＡＧ基因的親源關(guān)系較遠(yuǎn)（圖３－２）。ＳｉｇｎａｌＰ?４．１在線軟件預(yù)測該蛋白第１－２１??個(gè)氨基酸為信號(hào)肽（圖３－４）。ＮｅｔＯＧｌｙｃ?４．０?Ｓｅｒｖｅｒ軟件預(yù)測ＥｍＳＡＧ基因中可能包含??３個(gè)糖基化位點(diǎn)（圖３－５）?；?ＮｅｔＰｈｏｓ?ｓｅｒｖｅｒ預(yù)測ＥｍＳＡＧ基因中包含２３個(gè)可能的磷酸??化位點(diǎn)（圖３－６）。??Ｐｕｔａｔｉｖｅ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎｓ?ｈａｖｅ?ｂｅｅｎ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ，?ｃｌｉｃｋ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｉｍａｇｅ?ｂｅｌｏｗ?ｆｏｒ?ｄｅｔａｉｌｅｄ?ｒｅｓｕｌｔｓ，??１?２５?５０?７５?１０９?１２５?１５０?１７５?２Ｕ?２２５?２３５??Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?里?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｌ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ??Ｑｕｅｒｙ?ｓｅｑ．??Ｓｕｐｅｒ?ｆ?ａｎｉｌ

Ｅｉｍｅｒｉａ?ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ???ＸＰ?０１３３３７４６５．１?ＳＡＧ?ｆａｍｉｌｙ?ｍｅｍｂｅｒ?Ｅｉｍｅｒｉａ?ｍａｘｉｍａ???ＸＰ?０１３４４０５２０．１?ＳＡＧ?ｆａｍｉｌｙ?ｍｅｍｂｅｒ?ＬＶｗｍａ?ｎｅｃａｔｒｉｘ??１００?？??９９?ＡＡＡ２９０７５．１?ＴＡ４?ａｎｔｉｇｅｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｐａｒｔｉａｌ?ｌｉｉｍｅｒｉａ?ｔｃｎｃｌｌａ???ＡＣＡ８１５３３．１?ＮＡ４?ａｎｔｉｇｅｎ?Ｅｉｍｅｒｉａ?ｎｅｃａｔｒｉｘ??Ｉ?１??０．１??圖３－２?ＭＥＧＡ?６．０分析構(gòu)建ＥｍＳＡＧ同源基因進(jìn)化樹??Ｆｉｇ．?３－２?Ｔｈｅ?ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｒｅｅ?ｏｆ?ＥｍＳＡＧ?ａｎｄ?ｔｈｏｓｅ?ｏｆ?ＳＡＧ?ｆｒｏｍ?ｏｔｈｅｒ?ｓｐｅｃｉｅｓ?ｗａｓ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ?ｕｓｉｎｇ??ｔｈｅ?ＭＥＧＡ?６．０?ｐｒｏｇｒａｍ．??ＴＭＨＭＭ?ｒｅｓｕｌｔ??ＨＥＬＰ?＼＼Ｔｔｈ?ｏｕｔｐｕｔ?ｆｏｒｍａｔｓ??＊?ＫＥＢＳＥＱＵＥＮＣＥ?Ｌｅｎｇｔｈ：?２３５??＊?ＫＥＢＳＥＱＵＥ．ＮＣ！：?Ｈｕｆｆｉｅｒ?ｏｆ?ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ?ＩＭＨａ：?０??？?ＫＥＢＳＥＱＵＥＮＣＥ?Ｅｘｐ?ｎｕｒｆｃｅｒ?ｏＺ?ＡＡａ?ｉｎ?ＴＫＨｓ：?７．９３３Ｓ５??４?ＫＥＢＳＥＣＵＥＨＣｔ?Ｅｘｐ?ｎｕｉｔｏｅｒ，?ｆｉｒｓｔ?６０?ＡＡａ：?１．２５０Ｓ９??＊?ＷＥＳＳＥＯＵＥＮＣＥ?Ｔｏｔａｌ?ｐｒｅｂ?ｏｆ?Ｎ－ｉｎ：?０．０７４７５??ＫＥＳＳＣＯＴＥＨＣＳ?ＴＭ３ＫＫ２．０?ｏｕｔｓｉｄｅ?１?２３５??ＴＭＨＭＭ?ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]巨型艾美耳球蟲四種微線蛋白的免疫保護(hù)性及與雞腸上皮細(xì)胞的結(jié)合能力[D]. 黃經(jīng)緯.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]堆型艾美耳球蟲新抗原基因鑒定與分子特性研究[D]. 朱惠麗.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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碩士論文
[1]柔嫩艾美耳球蟲表面抗原SAG21和SAG23的免疫原性研究[D]. 廖玉聲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[2]雞毒害艾美耳球蟲NA4基因免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫保護(hù)性研究[D]. 張娜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3120453