在脊椎動物早期胚胎發(fā)育的過程中,其背腹體軸、前后體軸、左右體軸的建立是整個生物個體發(fā)育進程中的重大事件,涉及到很多信號轉(zhuǎn)導通路和相應的信號轉(zhuǎn)導因子的精密調(diào)控,例如Wnt信號通路、BMP信號通路、Nodal信號通路、FGF信號通路等等。其中,Wnt信號的活性在胚胎生成過程中所形成的活性梯度對于整個機體體軸的建立起到了至關(guān)重要的作用：母源的Wnt信號會特化胚胎背前部的形成；合子的Wnt信號主要負責胚胎后部腹部化的形成。Wnt/β-Catenin信號通路在調(diào)節(jié)胚胎的形成,腫瘤形成,機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài),機體再生以及胚胎干細胞的多能性等方面發(fā)揮了重要的作用。許多類型的癌癥和Wnt/β-Catenin信號活性的錯誤調(diào)控都是相互關(guān)聯(lián)的,同樣在在非洲爪蛙胚胎中母源的P-Catenin的缺失會使organizer和背部體軸都不能形成。β-Catenin穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)是調(diào)控Wnt/β-Catenin信號活性的一種主要機制,同時核內(nèi)高水平的β-Catenin也作為一些腫瘤的不良病狀預斷。在沒有Wnt蛋白激活的情況下,胞質(zhì)內(nèi)會形成由APC,GSK3,CK1和β-TrCP形成的降解復合體,其中CK1和GSK3會使β... 

【文章來源】：南京大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文名詞對照表
第一章 文章綜述
    1.1 前言
    1.2 非洲爪蛙早期胚胎的形成
        1.2.1 非洲爪蛙——一種經(jīng)典的動物模型
        1.2.2 非洲爪蛙胚胎的皮質(zhì)旋轉(zhuǎn)和母源的Wnt/β-Catenin信號
        1.2.3 中囊胚轉(zhuǎn)換
        1.2.4 組織者區(qū)和胚胎體軸的形成
        1.2.5 母源和合子Wnt/β-Catenin信號參與胚胎體軸形成
    1.3 Wnt/β-Catenin信號通路
        1.3.1 經(jīng)典的Wnt/β-Catenin信號轉(zhuǎn)導機制概述
            1.3.1.1 細胞膜上的Wnt/β-Catenin信號——受體復合體
            1.3.1.2 細胞質(zhì)中的β-Catenin降解復合體
            1.3.1.3 細胞核中的轉(zhuǎn)錄復合體
        1.3.2 β-Catenin的核質(zhì)轉(zhuǎn)運
        1.3.3 β-Catenin參與細胞之間的粘連
    1.4 賴氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b
        1.4.1 組蛋白賴氨酸甲基化和去甲基化修飾
        1.4.2 Kdm2a/Kdm2b的結(jié)構(gòu)和功能
        1.4.3 Kdm2a/Kdm2b相關(guān)的研究進展
    1.5 結(jié)語
    1.6 參考文獻
第二章 賴氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b調(diào)節(jié)早期胚胎體軸的形成
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 體外轉(zhuǎn)錄反義RNA探針及設(shè)計反義嗎啡啉
        2.2.3 非洲爪蛙胚胎的收集、培養(yǎng)以及顯微注射
        2.2.4 整體原位雜交
        2.2.5 非洲爪蛙胚胎的全胚胎蛋白的提取
        2.2.6 試劑配方
        2.2.7 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 賴氨酸去甲基化酶Kdm2a和Kdm2b是進化上保守的蛋白
        2.3.2 Kdm2a和Kdm2b具有相似的表達譜
        2.3.3 Kdm2a/Kdm2b參與非洲爪蛙胚胎前后體軸的形成
        2.3.4 敲降Kdm2a/Kdm2b會上調(diào)非洲爪蛙胚胎前部組織的標志基因
        2.3.5 敲降Kdm2a/Kdm2b會下調(diào)非洲爪蛙胚胎后部組織的標志基因
        2.3.6 Kdm2a和Kdm2b存在功能冗余和互補的作用
        2.3.7 Kdm2a和Kdm2b很有可能對胚胎的神經(jīng)發(fā)育過程也起到調(diào)節(jié)作用
    2.4 討論
    2.5 參考文獻
第三章 Kdm2a/Kdm2b調(diào)節(jié)細胞核內(nèi)β-Catenin的穩(wěn)定性
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 非洲爪蛙胚胎的收集、培養(yǎng)以及顯微注射
        3.2.3 整體原位雜交
        3.2.4 總RNA的提取
        3.2.5 cDNA的制備
        3.2.6 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應
        3.2.7 實時定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應
        3.2.8 紫外線照射胚胎
        3.2.9 動物帽解聚/重聚實驗
        3.2.10 細胞轉(zhuǎn)染
        3.2.11 細胞裂解液的提取
        3.2.12 熒光素酶分析
        3.2.13 免疫印跡
        3.2.14 免疫共沉淀
        3.2.15 抗體
        3.2.16 試劑配方
        3.2.17 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 在非洲爪蛙胚胎內(nèi)敲降Kdm2a/Kdm2b之后會激活母源和合子的Wnt/β-Catenin信號通路的靶基因
        3.3.2 Kdm2a/Kdm2b調(diào)控Wnt/β-Catenin信號的活性
        3.3.3 Kdm2a在翻譯水平上影響了β-Catenin的穩(wěn)定性
        3.3.4 Kdm2a/Kdm2b抑制由于過表達β-Catenin和ΔNβ-Cat所誘導的胚胎第二體軸的形成
        3.3.5 Kdm2a/Kdm2b作用于Tcf711的上游
        3.3.6 敲降Kdm2a/Kdm2b不能拯救由紫外線照射引起的胚胎腹部化表型
        3.3.7 Kdm2a/Kdm2b在細胞核內(nèi)抑制活化的β-Catenin活性且敲降Kdm2a/Kdm2b會增加原腸胚期β-Catenin的甲基化水平
        3.3.8 Kdm2a/Kdm2b調(diào)控β-Catenin活性并參與調(diào)節(jié)和前后體軸形成相關(guān)的基因表達
        3.3.9 Kdm2a/Kdm2b不直接參與調(diào)節(jié)細胞之間的粘連
    3.4 討論
    3.5 參考文獻
附錄1 相關(guān)試劑配制方法
附錄2 攻讀博士學位期間參與的工作及取得成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Wnt signaling in disease and in development[J]. Roel NUSSE.  Cell Research. 2005(01)



本文編號：3114418