本文關鍵詞：灰飛虱表皮蛋白CPR1參與水稻條紋病毒傳播的功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：水稻條紋病毒(Rice stripe virus, RSV)主要是依靠介體灰飛虱以持久增殖的方式在寄主植物間進行傳播,并可經卵傳遞給下一代灰飛虱。該病毒在介體灰飛虱內的運動和復制除了需要自身的外殼蛋白(pc3)外還需通過與介體蛋白的互作克服介體內的傳播障礙,最終進入唾液腺并隨唾液的分泌到達新的寄主植物來完成傳播。本研究基于酵母雙雜交膜系統(tǒng)篩選到與RSV pc3互作的大量灰飛虱蛋白為基礎,從中選取了一種灰飛虱表皮蛋白CPR1進行了傳毒功能的深入研究。首先克隆了CPR1的全長基因,并利用免疫共沉淀進一步驗證了CPR1與RSV pc3存在顯著的互作,然后通過酵母雙雜交和pull down技術明確了CPR1與RSV pc3互作的結構域。qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)CPR1在灰飛虱的血淋巴內積累量最高,同時利用激光共聚焦顯微鏡觀察到CPR1與RSV在灰飛虱的血細胞內完全共定位。為了進一步明確CPR1的傳毒功能,本研究又運用RNAi技術抑制了CPR1的表達,發(fā)現(xiàn)RSV含量在灰飛虱的血淋巴和唾液腺內顯著下降,同時傳毒率也下降了50%以上。這表明CPR1與RSV的結合可能是幫助病毒逃避了寄主血淋巴的免疫作用從而保護病毒不被降解,傳毒率的下降進一步說明病毒在沒有CPR1的結合下含量下降,從而運輸?shù)酵僖合俚牧繙p少,所以導致傳播到水稻的病毒量下降。
【關鍵詞】：水稻條紋病毒 灰飛虱 表皮蛋白 蛋白質互作 RNA干擾
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：博士后
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S435.11
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-9
• 1 引言9-31
• 1.1 植物病毒介體昆蟲傳播機制的研究進展9-17
• 1.1.1 非持久和半持久性植物病毒的傳毒機制研究11-12
• 1.1.2 持久性植物病毒的傳毒機制研究12-17
• 1.2 水稻條紋病毒的研究進展17-24
• 1.2.1 RSV的危害及基因組結構17-20
• 1.2.2 RSV的傳播介體及其傳毒特點20-21
• 1.2.3 纖細病毒屬病毒的傳毒機制研究21-24
• 1.3 昆蟲表皮蛋白的研究概況24-29
• 1.3.1 CPR家族的研究進展25-26
• 1.3.2 表皮蛋白的功能研究26-29
• 1.4 本研究的目的和意義29-31
• 2 CPR1全長基因的擴增及生物信息學分析31-39
• 2.1 材料與方法31-35
• 2.1.1 CPR1全長基因的擴增31-34
• 2.1.2 CPR1的生物信息學分析34-35
• 2.1.3 CPR1的系統(tǒng)進化樹分析35
• 2.2 結果與分析35-38
• 2.2.1 克隆CPR1全長基因35
• 2.2.2 CPR1的生物信息學分析35-37
• 2.2.3 CPR1的系統(tǒng)進化樹分析37-38
• 2.3 小結與討論38-39
• 3 利用免疫共沉淀驗證CPR1與RSV PC3的互作39-51
• 3.1 材料與方法39-46
• 3.1.1 RSV pc3和CPR1哺乳動物表達載體的構建39-42
• 3.1.2 RSV pc3和CPR1共轉染HEK293FT細胞42-43
• 3.1.3 HEK293FT細胞的裂解43-44
• 3.1.4 化學發(fā)光Co-IP檢測互作44-46
• 3.2 結果與分析46-49
• 3.2.1 RSV pc3和CPR1哺乳動物表達載體的構建46-47
• 3.2.2 RSV pc3和CPR1的表達檢測47-48
• 3.2.3 RSV pc3和CPR1的化學發(fā)光Co-IP檢測48-49
• 3.3 小結與討論49-51
• 4 CPR1不同結構域與RSV PC3的互作檢測51-58
• 4.1 材料與方法51-55
• 4.1.1 重組表達載體的構建51
• 4.1.2 CPR1不同結構域與RSV pc3互作的酵母雙雜交檢測51-54
• 4.1.3 CPR1不同結構域與RSV pc3互作的pulldown檢測54-55
• 4.2 結果與分析55-58
• 4.2.1 CPR1不同結構域與RSV pc3互作的酵母雙雜交檢測55-58
• 5 CPR1與RSV在細胞和組織內的共定位檢測58-73
• 5.1 材料與方法58-64
• 5.1.1 CPR1與RSV pc3在Sf9細胞內的共定位檢測58-63
• 5.1.2 CPR1與RSV在灰飛虱細胞系內的共定位檢測63
• 5.1.3 CPR1與RSV在灰飛虱不同組織的共定位檢測63-64
• 5.2 結果與分析64-71
• 5.2.1 CPR1與RSV pc3在Sf9細胞內的共定位檢測64-67
• 5.2.2 CPR1與RSV在灰飛虱細胞系內的共定位檢測67-68
• 5.2.3 CPR1與RSV在灰飛虱不同組織的共定位檢測68-71
• 5.3 小結與討論71-73
• 6 利用RNAI抑制CPR1表達后對RSV的影響73-83
• 6.1 材料與方法73-76
• 6.1.1 CPR1 dsRNA和GFP dsRNA的合成73-74
• 6.1.2 CPR1 dsRNA和GFP dsRNA顯微注射灰飛虱74-75
• 6.1.3 RNAi抑制CPR1表達后的傳毒實驗75-76
• 6.2 結果與分析76-81
• 6.2.1 CPR1 dsRNA和GFP dsRNA的合成76
• 6.2.2 顯微注射dsRNA后CPR1和RSV的表達檢測76-81
• 6.2.3 RNAi抑制CPR1表達后對RSV傳毒的影響81
• 6.3 小結與討論81-83
• 7 全文總結83-84
• 參考文獻84-95
• 致謝95-96
• 博士生期間發(fā)表的學術論文96-97
• 博士后期間發(fā)表的學術論文97-98
• 個人簡歷98-100

  本文關鍵詞：灰飛虱表皮蛋白CPR1參與水稻條紋病毒傳播的功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：300696