本文關(guān)鍵詞：灰飛虱表皮蛋白CPR1參與水稻條紋病毒傳播的功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：水稻條紋病毒(Rice stripe virus, RSV)主要是依靠介體灰飛虱以持久增殖的方式在寄主植物間進(jìn)行傳播,并可經(jīng)卵傳遞給下一代灰飛虱。該病毒在介體灰飛虱內(nèi)的運(yùn)動(dòng)和復(fù)制除了需要自身的外殼蛋白(pc3)外還需通過與介體蛋白的互作克服介體內(nèi)的傳播障礙,最終進(jìn)入唾液腺并隨唾液的分泌到達(dá)新的寄主植物來完成傳播。本研究基于酵母雙雜交膜系統(tǒng)篩選到與RSV pc3互作的大量灰飛虱蛋白為基礎(chǔ),從中選取了一種灰飛虱表皮蛋白CPR1進(jìn)行了傳毒功能的深入研究。首先克隆了CPR1的全長(zhǎng)基因,并利用免疫共沉淀進(jìn)一步驗(yàn)證了CPR1與RSV pc3存在顯著的互作,然后通過酵母雙雜交和pull down技術(shù)明確了CPR1與RSV pc3互作的結(jié)構(gòu)域。qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CPR1在灰飛虱的血淋巴內(nèi)積累量最高,同時(shí)利用激光共聚焦顯微鏡觀察到CPR1與RSV在灰飛虱的血細(xì)胞內(nèi)完全共定位。為了進(jìn)一步明確CPR1的傳毒功能,本研究又運(yùn)用RNAi技術(shù)抑制了CPR1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)RSV含量在灰飛虱的血淋巴和唾液腺內(nèi)顯著下降,同時(shí)傳毒率也下降了50%以上。這表明CPR1與RSV的結(jié)合可能是幫助病毒逃避了寄主血淋巴的免疫作用從而保護(hù)病毒不被降解,傳毒率的下降進(jìn)一步說明病毒在沒有CPR1的結(jié)合下含量下降,從而運(yùn)輸?shù)酵僖合俚牧繙p少,所以導(dǎo)致傳播到水稻的病毒量下降。
【關(guān)鍵詞】：水稻條紋病毒 灰飛虱 表皮蛋白 蛋白質(zhì)互作 RNA干擾
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士后
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S435.11
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-9
• 1 引言9-31
• 1.1 植物病毒介體昆蟲傳播機(jī)制的研究進(jìn)展9-17
• 1.1.1 非持久和半持久性植物病毒的傳毒機(jī)制研究11-12
• 1.1.2 持久性植物病毒的傳毒機(jī)制研究12-17
• 1.2 水稻條紋病毒的研究進(jìn)展17-24
• 1.2.1 RSV的危害及基因組結(jié)構(gòu)17-20
• 1.2.2 RSV的傳播介體及其傳毒特點(diǎn)20-21
• 1.2.3 纖細(xì)病毒屬病毒的傳毒機(jī)制研究21-24
• 1.3 昆蟲表皮蛋白的研究概況24-29
• 1.3.1 CPR家族的研究進(jìn)展25-26
• 1.3.2 表皮蛋白的功能研究26-29
• 1.4 本研究的目的和意義29-31
• 2 CPR1全長(zhǎng)基因的擴(kuò)增及生物信息學(xué)分析31-39
• 2.1 材料與方法31-35
• 2.1.1 CPR1全長(zhǎng)基因的擴(kuò)增31-34
• 2.1.2 CPR1的生物信息學(xué)分析34-35
• 2.1.3 CPR1的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析35
• 2.2 結(jié)果與分析35-38
• 2.2.1 克隆CPR1全長(zhǎng)基因35
• 2.2.2 CPR1的生物信息學(xué)分析35-37
• 2.2.3 CPR1的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析37-38
• 2.3 小結(jié)與討論38-39
• 3 利用免疫共沉淀驗(yàn)證CPR1與RSV PC3的互作39-51
• 3.1 材料與方法39-46
• 3.1.1 RSV pc3和CPR1哺乳動(dòng)物表達(dá)載體的構(gòu)建39-42
• 3.1.2 RSV pc3和CPR1共轉(zhuǎn)染HEK293FT細(xì)胞42-43
• 3.1.3 HEK293FT細(xì)胞的裂解43-44
• 3.1.4 化學(xué)發(fā)光Co-IP檢測(cè)互作44-46
• 3.2 結(jié)果與分析46-49
• 3.2.1 RSV pc3和CPR1哺乳動(dòng)物表達(dá)載體的構(gòu)建46-47
• 3.2.2 RSV pc3和CPR1的表達(dá)檢測(cè)47-48
• 3.2.3 RSV pc3和CPR1的化學(xué)發(fā)光Co-IP檢測(cè)48-49
• 3.3 小結(jié)與討論49-51
• 4 CPR1不同結(jié)構(gòu)域與RSV PC3的互作檢測(cè)51-58
• 4.1 材料與方法51-55
• 4.1.1 重組表達(dá)載體的構(gòu)建51
• 4.1.2 CPR1不同結(jié)構(gòu)域與RSV pc3互作的酵母雙雜交檢測(cè)51-54
• 4.1.3 CPR1不同結(jié)構(gòu)域與RSV pc3互作的pulldown檢測(cè)54-55
• 4.2 結(jié)果與分析55-58
• 4.2.1 CPR1不同結(jié)構(gòu)域與RSV pc3互作的酵母雙雜交檢測(cè)55-58
• 5 CPR1與RSV在細(xì)胞和組織內(nèi)的共定位檢測(cè)58-73
• 5.1 材料與方法58-64
• 5.1.1 CPR1與RSV pc3在Sf9細(xì)胞內(nèi)的共定位檢測(cè)58-63
• 5.1.2 CPR1與RSV在灰飛虱細(xì)胞系內(nèi)的共定位檢測(cè)63
• 5.1.3 CPR1與RSV在灰飛虱不同組織的共定位檢測(cè)63-64
• 5.2 結(jié)果與分析64-71
• 5.2.1 CPR1與RSV pc3在Sf9細(xì)胞內(nèi)的共定位檢測(cè)64-67
• 5.2.2 CPR1與RSV在灰飛虱細(xì)胞系內(nèi)的共定位檢測(cè)67-68
• 5.2.3 CPR1與RSV在灰飛虱不同組織的共定位檢測(cè)68-71
• 5.3 小結(jié)與討論71-73
• 6 利用RNAI抑制CPR1表達(dá)后對(duì)RSV的影響73-83
• 6.1 材料與方法73-76
• 6.1.1 CPR1 dsRNA和GFP dsRNA的合成73-74
• 6.1.2 CPR1 dsRNA和GFP dsRNA顯微注射灰飛虱74-75
• 6.1.3 RNAi抑制CPR1表達(dá)后的傳毒實(shí)驗(yàn)75-76
• 6.2 結(jié)果與分析76-81
• 6.2.1 CPR1 dsRNA和GFP dsRNA的合成76
• 6.2.2 顯微注射dsRNA后CPR1和RSV的表達(dá)檢測(cè)76-81
• 6.2.3 RNAi抑制CPR1表達(dá)后對(duì)RSV傳毒的影響81
• 6.3 小結(jié)與討論81-83
• 7 全文總結(jié)83-84
• 參考文獻(xiàn)84-95
• 致謝95-96
• 博士生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文96-97
• 博士后期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文97-98
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷98-100

  本文關(guān)鍵詞：灰飛虱表皮蛋白CPR1參與水稻條紋病毒傳播的功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：300696