發(fā)布時間：2020-10-23 18:25

　　 豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是危害世界養(yǎng)豬業(yè)的重要病毒性傳染病之一。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為B類法定報告動物疫病,我國將其列為二類動物疫病。該病的病原是豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV),動脈炎病毒科成員。PRRSV是有囊膜的單股正鏈RNA病毒,具有廣泛的基因多樣性和高度的變異性。PRRSV感染后抑制機體的先天性免疫應答,并且誘導中和抗體的水平低,給該病的防控帶來了嚴峻的挑戰(zhàn)。目前PRRS預防主要依靠弱毒疫苗的免疫接種,但在現(xiàn)地,由于種種原因,免疫失敗時有發(fā)生,因而開發(fā)新的PRRS防治策略很有必要。本研究以PRRSV弱毒苗(CH-1R)感染性克隆為載體,首先構建不同Body TRS啟動表達EGFP的重組病毒,以此為模型比較不同Body TRS表達外源基因的效率;在此基礎上構建Body TRS6啟動表達豬粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(pGM-CSF)或/和豬白細胞介素-4(pIL-4)的重組PRRSV;在豬體內進行免疫保護攻毒實驗,比較重組病毒與親本毒株的免疫效率。取得的成果如下:1構建在PRRSV基因組N基因和3’-UTR之間由不同Body TRS啟動表達EGFP的重組感染性克隆,轉染Marc-145細胞后,可以拯救出病毒。病毒生物學特性分析表明,重組病毒的生長特性與親本毒株相似。初步比較不同Body TRS啟動表達EGFP的效率表明,Body TRS6的效率最高,其次為Body TRS2/5/7,Body TRS3/4啟動表達EGFP的效率最低。遺傳穩(wěn)定性結果顯示,重組病毒至少可以在Marc-145細胞上穩(wěn)定傳至5代以上。2構建在PRRSV基因組N基因和3’-UTR之間插入由Body TRS6啟動表達pGM-CSF或/和pIL-4的重組感染性克隆,轉染Marc-145細胞后,可以拯救出病毒。病毒生物學特性分析表明,重組病毒的生長特性與親本毒株相似。遺傳穩(wěn)定性分析表明,單獨表達pGM-CSF的重組病毒在Marc-145細胞上至少可以穩(wěn)定傳至10代以上,并且具有良好的刺激骨髓細胞增殖的能力。單獨表達pIL-4的重組病毒至少可以穩(wěn)定傳至15代以上,而同時表達這兩種細胞因子的重組病毒在傳至第3代或者第5代時,目的基因已經逐漸丟失。3運用免疫保護攻毒實驗研究重組病毒CH-1R/pGM-CSF的免疫效率,結果顯示CH-1R/pGM-CSF誘導豬體產生了與CH-1R相似的體液免疫水平。細胞免疫方面,與CH-1R相比,CH-1R/pGM-CSF在攻毒當天以及攻毒后第7天,在外周血中誘導出更高比例的CD4+CD8+T細胞以及高水平的IFN-γ,攻毒后21天的病毒血癥也明顯降低,同時體溫升高的幅度也低于CH-1R。以上結果表明,CH-1R/pGM-CSF可以誘導出比CH-1R更高的細胞免疫水平,同時可以降低HP-PRRSV在豬體內的持續(xù)性感染。4運用免疫保護攻毒實驗研究重組病毒CH-1R/pIL-4的免疫效率,結果顯示重組病毒具有與親本毒株CH-1R相似的誘導體液免疫應答的能力。細胞免疫方面,與CH-1R相比,CH-1R/pIL-4免疫組在攻毒后第3天和第7天在外周血中誘導出更高比例的CD4+CD8+T細胞,同時CH-1R/pIL-4免疫組在攻毒后第7天血清中IL-4的水平顯著高于CH-1R免疫組,但攻毒后這2個實驗組之間病毒血癥,體溫變化以及臨床表現(xiàn)都沒有顯著差異。以上結果表明,CH-1R/pIL-4沒有顯著提高疫苗的保護效率。
【學位單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：S852.65
【部分圖文】：

.1 吸附和進入PRRSV 在較低 PH 值條件下進入細胞，整個過程是通過標準的內吞方auwynck et al. 1999)。敲除網格蛋白（Clathrin）的重鏈抑制了 EAV 的感染，示動脈炎病毒顆粒都包含有一個被網格蛋白包裹的相對較小的結構(Nits08; Snijder et al. 1998)

leader TRS hairpin”(LTH)在轉錄中也發(fā)揮著重要角色(van den Born et al. 2004)。PRNA 合成示意圖見 1-2。

不同BodyTRS啟動EGFP表達的重組PRRSV感染性克隆結構示意圖
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本文編號：2853385