本文關(guān)鍵詞：核受體LXRα抗奶牛乳腺炎作用及其激動劑篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：奶牛乳腺炎是造成奶牛養(yǎng)殖業(yè)重大經(jīng)濟損失的主要疾病之一，根據(jù)臨床有無明顯炎癥反應可分為臨床型乳腺炎和隱性乳腺炎。大腸桿菌等革蘭氏陰性菌感染主要引起臨床型乳腺炎，該類病原細胞壁中的LPS能夠激活奶牛組織細胞TLR4信號轉(zhuǎn)導通路，引起炎性細胞因子大量分泌，是導致乳腺劇烈炎癥反應的主要毒力因子，獸醫(yī)臨床處置中除給予必要的抗菌藥物之外，能否有效控制乳腺組織劇烈的炎癥反應，是決定奶牛臨床型乳腺炎治療最終轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，然而受乳中藥物殘留等食品安全因素的限制，在生產(chǎn)實踐中還缺乏安全有效的抗炎藥物，因此尋找新的抗炎靶點及藥物來控制乳腺炎癥反應，對乳腺炎的防治具有重要意義。傳統(tǒng)中草藥因藥物殘留較低，相對安全，在奶牛乳腺炎治療藥物開發(fā)中一直被寄予厚望。LXRα是核受體超家族的主要成員之一，與代謝、感染、免疫等眾多病理生理過程都有密切關(guān)系，在乳業(yè)研究領(lǐng)域內(nèi)由于LXRα被激活后不但能夠提高乳脂率，，還呈現(xiàn)出能夠降低組織炎癥反應的抗炎功能，可能是一種潛在的抗炎新靶點而備受關(guān)注。本論文以核受體LXRα作為研究對象，通過建立LPS刺激TLR4信號轉(zhuǎn)導通路的體內(nèi)小鼠乳腺炎模型和體外小鼠、奶牛乳腺上皮細胞等炎癥模型，利用已知人工合成的LXRα激動劑T0901317對LXRα進行激活，以驗證對乳腺炎癥的抗炎效果；然后采用LXRα報告基因等方法，對治療乳腺炎常見傳統(tǒng)中藥方劑所含有的五味子酯甲A、百里香酚、矢車菊素、甘草皂苷、柴胡皂苷、山姜素、大黃素、小檗堿、黃芩苷、黃芩素、連翹酯苷、姜黃素、綠原酸、紫云英苷和蒲公英甾醇等15種中藥單體成分進行檢驗，以篩選出LXRα天然激動劑并對其抗炎效果進行評價；最后對優(yōu)選出的抗炎效果較好的中藥單體成分進行抗乳腺炎作用及機制的進一步深入研究，為奶牛乳腺炎抗炎藥物的研發(fā)提供實驗依據(jù)及參考。 首先，建立LPS誘導的小鼠乳腺炎模型、LPS刺激的奶牛和小鼠乳腺上皮細胞炎癥模型，在上述模型中加入人工合成的LXRα激動劑T0901317，通過組織病理觀察；MPO活性檢測；TNF-α等炎性細胞因子水平分析；NF-κB和IRF3等TLR4信號轉(zhuǎn)導通路下游核轉(zhuǎn)錄因子變化檢測；以及LPS刺激的小鼠乳腺上皮細胞炎癥模型中脂筏膽固醇含量變化分析等，以驗證LXRα激活的抗乳腺炎效果，并初步探索其抗炎作用機制。研究結(jié)果表明，LXRα被激活后可以降低LPS誘導的小鼠乳腺組織炎性損傷；MPO活性及乳腺組織中炎性細胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表達水平；在LPS刺激的奶牛乳腺上皮細胞中， LXRα被激活后可以抑制LPS誘導的炎性細胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6基因表達；在LPS刺激的小鼠乳腺上皮細胞中，LXRα被激活后可以降低脂筏中膽固醇含量，干擾LPS誘導的TLR4分子向脂筏募集；抑制TLR4信號通路下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和IRF3磷酸化。以上結(jié)果證實，LXRα激活可降低LPS誘導的乳腺炎癥反應水平；LXRα可能是通過降低脂筏膽固醇含量，干擾TLR4向脂筏募集，從而抑制TLR4信號轉(zhuǎn)導通路而發(fā)揮其抗炎作用。 其次，建立LXRα報告基因檢測體系，在該實驗體系中分別加入五味子酯甲A等15種中藥單體成分，從中篩選LXRα天然激動劑；在LPS刺激的小鼠和奶牛乳腺上皮細胞炎癥模型中，確定篩選出的LXRα天然激動劑安全劑量范圍后，對比評價在各自安全劑量范圍內(nèi)對炎性細胞因子TNF-α的抑制效果，從而優(yōu)選出抗炎效果最強的LXRα天然結(jié)構(gòu)激動劑。結(jié)果顯示，矢車菊素、甘草皂苷、柴胡皂苷、蒲公英甾醇等4種中藥單體均可激活LXRα；在LPS刺激的小鼠和奶牛乳腺上皮細胞中，安全劑量范圍內(nèi)矢車菊素、甘草皂苷、柴胡皂苷、蒲公英甾醇等4種中藥單體均可抑制LPS誘導的TNF-α水平升高而呈現(xiàn)出抗炎效果，其中矢車菊素對TNF-α的抑制效果最強，其次為蒲公英甾醇、甘草皂苷和柴胡皂苷。以上結(jié)果證實，矢車菊素、甘草皂苷、柴胡皂苷、蒲公英甾醇等4種中藥單體均可作為LXRα天然激動劑，4種中藥單體激活LXRα后均呈現(xiàn)出抗乳腺炎活性，其中矢車菊素的抗炎作用效果最強。 最后，對矢車菊素的抗乳腺炎作用及機制展開深入研究，在LPS誘導的小鼠乳腺炎模型和小鼠乳腺上皮細胞上，通過觀察組織病理變化，檢測MPO活性及TNF-α等炎性細胞因子水平，進一步驗證矢車菊素的抗乳腺炎作用；通過檢測脂筏膽固醇含量，觀察TLR4向脂筏募集，分析TLR4通路下游核錄分子NF-κB和IRF3激活，以闡述矢車菊素激活LXRα的抗炎作用機制；最后通過敲低LXRα進行確證。結(jié)果表明，矢車菊素可以降低LPS誘導的小鼠乳腺組織炎性損傷，劑量依賴性地降低MPO活性及乳腺組織中TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性細胞因子表達；在LPS刺激的小鼠乳腺上皮細胞中，矢車菊素激活LXRα后，可上調(diào)ABCG1表達，降低脂筏中膽固醇含量，干擾TLR4向脂筏募集，抑制NF-κB和IRF3激活。敲低LXRα后，矢車菊素的抗炎作用消失。以上結(jié)果證實，矢車菊素可以降低LPS誘導的乳腺炎癥反應水平，具有確實的抗乳腺炎作用效果；矢車菊素通過激活LXRα-ABCG1，降低脂筏中膽固醇的含量，干擾TLR4向脂筏募集，抑制TLR4信號轉(zhuǎn)導通路的作用機制而發(fā)揮其抗乳腺炎作用。 通過上述研究，本論文證實了LXRα可以作為乳腺炎抗炎治療的潛在靶點，從15種中藥單體中篩選出矢車菊素、甘草皂苷、柴胡皂苷、蒲公英甾等4種LXRα天然激動劑，確定了矢車菊素抗炎效果最強，并初步證實矢車菊素通過激活LXRα-ABCG1，抑制TLR4信號通路而發(fā)揮其抗炎作用。以上結(jié)果可為基于LXRα為靶點的乳腺炎抗炎藥物研發(fā)提供初步的實驗數(shù)據(jù)和參考。
【關(guān)鍵詞】：LXRα TLR4 矢車菊素 細胞因子 脂筏 乳腺炎
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.23
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-13
• 英文縮寫表13-14
• 前言14-16
• 第一篇 文獻綜述16-50
• 第一章 奶牛乳腺炎的研究進展16-33
• 1 奶牛乳腺炎的危害16-18
• 2 引起乳腺炎的病原微生物18-20
• 3 奶牛乳腺炎的發(fā)病因素20-22
• 4 奶牛乳腺炎的分類22-24
• 5 奶牛乳腺炎的發(fā)病機制24-27
• 6 奶牛乳腺炎的診斷27-29
• 7 奶牛乳腺炎的防治29-33
• 第二章 核受體 LXRα研究進展33-50
• 1 核受體 LXR 概述33
• 2 核受體 LXR 功能33-38
• 3 核受體 LXRα相關(guān)疾病38-43
• 4 核受體 LXRα抗炎作用43-45
• 5 核受體 LXRα激動劑類型45-50
• 第二篇 研究內(nèi)容50-99
• 第一章 核受體 LXRα抗乳腺炎作用50-75
• 1 材料50-55
• 2 方法55-63
• 3 結(jié)果63-72
• 4 討論72-74
• 5 小結(jié)74-75
• 第二章 核受體 LXRα激動劑篩選及評價75-84
• 1 材料75-76
• 2 方法76-77
• 3 結(jié)果77-82
• 4 討論82-83
• 5 小結(jié)83-84
• 第三章 矢車菊素抗乳腺炎作用及機制研究84-99
• 1 材料84-85
• 2 方法85-87
• 3 結(jié)果87-95
• 4 討論95-98
• 5 小結(jié)98-99
• 結(jié)論99-100
• 參考文獻100-122
• 導師簡介122-123
• 作者簡介123-126
• 致謝126

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 羅金印;郁杰;李宏勝;李新圃;;我國部分地區(qū)個體奶牛場乳房炎發(fā)病率的調(diào)查研究[J];中國牛業(yè)科學;2009年05期

2 寨鴻瑞;田甜;朱偉;王開功;周碧君;文明;;奶牛乳房炎研究進展[J];貴州農(nóng)業(yè)科學;2009年08期

3 呂潤全;奶牛乳腺炎預防和治療的研究進展[J];南京農(nóng)專學報;2001年03期

4 高純一,祁永鋒,丁營兵;公英散加味治療奶牛乳房炎療效好[J];河北畜牧獸醫(yī);2000年07期

5 王文舉;李鴻鈞;孫茂盛;;脂筏與T細胞信號轉(zhuǎn)導[J];生命科學;2007年05期

6 方振華;高騰云;丁利;;奶牛乳腺炎的研究進展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2007年02期

7 劉青光,顧方明,宋濤;黃芩甙治療重癥急性胰腺炎肺損傷的實驗研究[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2005年04期

8 劉新勃;田國寧;;濰坊地區(qū)奶牛隱性乳腺炎感染率調(diào)查及防治效果考核[J];中國動物檢疫;2006年01期

9 舒相華;毛華明;宋春蓮;董鵬;張麗;;芐青霉素治療奶牛乳房炎的效果及在牛奶中殘留規(guī)律的研究[J];中國奶牛;2006年06期

10 鄭國衛(wèi);潘鴻飛;;牛奶質(zhì)量與體細胞數(shù)[J];中國奶牛;2006年12期

  本文關(guān)鍵詞：核受體LXRα抗奶牛乳腺炎作用及其激動劑篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：266456