【摘要】：由可可毛色二孢侵染桑樹引起的根腐病是我國(guó)桑樹生產(chǎn)上的一種新病害,為有效防控該桑樹根腐病,本文對(duì)該病的病原鑒定、病原菌遺傳多樣性、光照對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響、病害發(fā)生規(guī)律及防治等方面進(jìn)行了研究,得出如下主要結(jié)果：1、從發(fā)病地采集的870個(gè)桑樹病根組織塊中分離出12種真菌,分離率以菌株XY14為最高,達(dá)90%。根據(jù)致病性測(cè)定、致病菌形態(tài)特征觀察和基于rDNA-ITS和EF1-α序列測(cè)定分析等結(jié)果,將XY14鑒定為可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon Maubl.)。由可可毛色二孢菌引起的桑樹根腐病首次在中國(guó)發(fā)現(xiàn)。2、通過比較桑毛色二孢根腐病菌在光照和黑暗培養(yǎng)條件下的菌落生長(zhǎng)速度和分生孢子萌發(fā)情況,發(fā)現(xiàn)光照和黑暗對(duì)桑毛色二孢根腐病菌的菌絲生長(zhǎng)和分生孢子萌發(fā)沒有顯著影響。持續(xù)光照有利于L. theobromae分生孢子器和分生孢子的產(chǎn)生。光照培養(yǎng)兩天后,PDA平板上即出現(xiàn)子座芽點(diǎn),隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),子座逐漸增大增粗。3、本文利用RAPD和ISSR兩種分子標(biāo)記技術(shù)分析了不同地理和寄主來源的29個(gè)可可毛色二孢菌株的遺傳多樣性。其中23株菌株是來自廣西橫縣、宜州、鹿寨、象州的桑毛色二孢根腐病菌菌株,6株來自廣西武鳴縣劍麻葉斑病菌(Lasiodiplodia theobromae)菌株。兩種分子標(biāo)記結(jié)果顯示,參試菌株的平均多態(tài)率均在93%以上。RAPD分子標(biāo)記的菌株遺傳相似系數(shù)范圍為0.61.0.92,而ISSR分子標(biāo)記的菌株遺傳相似系數(shù)在0.69-0.99之間。利用NTSYSpc軟件(Version 2.10e)分別構(gòu)建RAPD標(biāo)記和ISSR標(biāo)記的UPGMA系統(tǒng)聚類圖。RAPD標(biāo)記的UPGMA聚類圖將29個(gè)菌株分為7個(gè)類群(遺傳相似系數(shù)為0.76時(shí))；ISSR標(biāo)記的UPGMA聚類圖將參試菌株劃分為5個(gè)類群(遺傳相似系數(shù)為0.746時(shí))。RAPD類群和ISSR類群均與菌株的地理來源有相關(guān)性。兩種分子標(biāo)記的結(jié)果均反映出不同居群間遺傳一致度較高,遺傳距離較短。4、病害調(diào)查結(jié)果顯示,桑毛色二孢根腐病的發(fā)病率和嚴(yán)重度與桑樹樹齡、根結(jié)線蟲為害及桑樹品種有關(guān)。不論是幼年桑樹,還是成年桑樹,均可發(fā)生根腐病,但樹齡越大,發(fā)病越嚴(yán)重。幾乎所有根腐病為害的桑樹根部均有根結(jié)線蟲的癭瘤(根結(jié))存在,但是部分有根結(jié)線蟲為害的桑樹,沒有表現(xiàn)根腐病癥狀。本研究調(diào)查了廣西橫縣、宜州市、象州縣和鹿寨縣共11個(gè)桑樹品種4-6年樹齡的桑毛色二孢根腐病發(fā)生情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)品種沙2×109的發(fā)病率最高,品種抗青283的發(fā)病率最低。5、研究了哈茨木霉(Trichoderma harzianum) GZ-5、深綠木霉(T. atroviride)ST-1、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) B11、解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens) YZ14-3和一株寡雄腐霉(Pythium oligandrum)對(duì)L. theobromae的拮抗作用。結(jié)果表明,五種生防菌株均能有效抑制L. theobromae的菌絲生長(zhǎng)。其中,P. oligandrum、B11和YZ14-3對(duì)L. theobromae菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別為88.89%、75%和73.3%。兩株木霉菌株對(duì)L. theobromae菌絲生長(zhǎng)的拮抗系數(shù)級(jí)別均為Ⅲ級(jí)。顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),P. oligandrum和木霉菌絲緊緊纏繞L. theobromae菌絲并致使L. theobromae菌絲畸形、膨大：兩株芽孢桿菌可引起L. theobromae菌絲內(nèi)含物泡狀化、菌絲畸形膨大、易斷裂。L. theobromae的分生孢子在P. oligandrum、深綠木霉和哈茨木霉培養(yǎng)液中的萌發(fā)率低,分別為6%、20.4%和12.2%；在兩株芽孢桿菌的培養(yǎng)液中不僅不能萌發(fā),而且分生孢子因細(xì)胞壁降解而解體。6、研究了9個(gè)劍麻品種的新鮮葉汁、腐熟葉汁、煮沸葉汁和滅菌葉汁對(duì)L.theobromae菌絲生長(zhǎng)和分生孢子萌發(fā)的影響。結(jié)果表明,參試各劍麻品種的葉片汁液均能不同程度地抑制L. theobromae的菌絲生長(zhǎng),抑菌率范圍為63.4.100%,抑菌率因劍麻品種和處理方式而有差異。參試的九個(gè)品種中,以76416麻和無刺番麻葉汁的抑菌效果最好,76416麻和無刺番麻能完全抑制L. theobromae菌絲生長(zhǎng),其抑菌率均為100%；其次為藍(lán)劍麻,其四種處理的抑菌率為97.6%。其余6個(gè)劍麻品種的新鮮葉汁經(jīng)過腐熟、煮沸和滅菌后,其抑菌活性有所下降。顯微鏡下觀察各葉汁處理下的菌絲形態(tài),發(fā)現(xiàn)L. theobromae菌絲畸形膨大、斷裂并發(fā)生原生質(zhì)滲漏。孢子萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果表明,除藍(lán)劍麻、H.11648和假菠蘿麻外,其余6個(gè)品種四種處理的葉汁均能完全抑制L. theobromae分生孢子萌發(fā)。L. theobromae分生孢子在藍(lán)劍麻、H.11648和假菠蘿麻四種處理葉汁中的平均萌發(fā)率分別為72.4%、16.6%和13%。7、50%多菌靈WP、70%甲基托布津WP、根腐寧WP、10%世高水分散粒劑和80%代森錳鋅WP對(duì)L. theobromae菌絲生長(zhǎng)的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明,5種藥劑的EC5o值分別為：0.079μg/mL、0.789μg/mL、0.156μg/mL、0.165μg/mL和42.463μg/mL。L. theobromae的分生孢子在以上5種藥劑ECso下的萌發(fā)率分別為：17%、37.8%、6.8%、86%和28%。8、選用哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、寡雄腐霉(Pythium oligandrum)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)、H.11648麻新鮮葉汁、世高、50%多菌靈WP、70%甲基托布津WP、根腐寧WP、80%代森錳鋅WP等進(jìn)行大田防治試驗(yàn)。結(jié)果表明,參試的五種化學(xué)殺菌劑中,以根腐寧WP的防治效果最好(83.02%),其次為50%多菌靈WP,其防治效果為80.9%。參試的四種生防菌劑中,以T. harzianum GZ-5的防治效果最好(75.62%),其次為H.11648麻新鮮葉汁,防治效果為74.02%,防治效果顯著高于70%甲基托布津WP、80%代森錳鋅WP和世高等化學(xué)藥劑。因此,生產(chǎn)上可利用根腐寧WP 600倍液、50%多菌靈WP200倍液、T. harzianum制劑和H.11648劍麻水淋蔸防治桑毛色二孢根腐病。
【圖文】：

致病菌株在ＰＤＡ培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度快，２８°Ｃ培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約兩天，其菌絲即可逡逑布滿整個(gè)ＰＤＡ平板（直徑約９０ｍｍ）。菌絲灰白色，起初緊貼培養(yǎng)基生長(zhǎng)，平板邊逡逑緣的菌絲顯得比較蓬松（圖２．２邋Ａ）。初生菌絲灰白色，用解剖針挑取菌絲放在顯微逡逑鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)分隔及分支較少；成熟的菌絲褐色，分隔較多，銳角或近直角分支逡逑（圖２．２邋Ｆ）。隨著培養(yǎng)時(shí)間X棾�，菌丝蛀[ケ湮躺蚧液諫�，直至褐G�。长期辶x嚇嘌�，可见菌聺〉a娌罅孔幼ㄍ跡玻插澹攏�。子座吃嚥球椎A(chǔ)⒐靼糇�，大小为辶x希玻�？９．�(dān)兀玻�？３．�(dān)恚懟Ｗ幼ザ順７置謨型該?dān)X嚎次鎦省Ｗ幼諛謨卸喔齜稚ё渝義掀鰨稚ё悠韉拇笮∥保埃�？（哇E玻插澹牛�。分生抱子器恼E罅糠稚у義獻(xiàn)�。幼嫩的分生抱讑湿詺埼或諊尹球形，单细胞，色淡，大小为辶x希保玻擔(dān)�？１６．２�(dān)玻埃埃�？２８．ＡP到校鑠澹ㄍ跡玻插澹茫�。硥剶棠分生抱子深褐色，，n

本文編號(hào)：2628164