本文關(guān)鍵詞：p-STAT1蛋白參與調(diào)節(jié)A型流感病毒的復(fù)制及炎性反應(yīng)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞內(nèi)某些磷酸化位點的激活對于病毒的復(fù)制過程是必須的,從而可能會成為抗病毒藥物的靶點。對H1N1、H5N1、H7N2三種亞型的流感病毒感染A549細(xì)胞2h后的細(xì)胞樣品進(jìn)行磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析,與對照組相比檢測到1326個在三種流感病毒感染樣品中共存在的磷酸化蛋白質(zhì),其中明顯上調(diào)的有34個,明顯下調(diào)的有17個。對這些變化明顯的蛋白質(zhì)進(jìn)行歸類分析,發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)的種類包括先天性免疫、凋亡、代謝和轉(zhuǎn)錄等,其中STAT1蛋白是轉(zhuǎn)錄因子中唯一明顯上調(diào)表達(dá)的蛋白。基于此我們想探索活化的STAT1蛋白是否參與病毒的復(fù)制及炎性反應(yīng),而不是僅僅作為IFN的下游效應(yīng)因子? 利用H5N1流感病毒感染A549細(xì)胞,感染劑量為1MOI,結(jié)果顯示STAT1蛋白在感染后2h明顯活化,在4-8h到達(dá)高峰,12h后明顯下降至消失。同時檢測攻毒后0-24h期間病毒復(fù)制及IFN-β表達(dá)情況,結(jié)果顯示病毒增殖和IFN-β的表達(dá)持續(xù)升高。推測STAT1的重要生物學(xué)作用出現(xiàn)在病毒感染前期(0-12h)。化學(xué)性藥物FLUD特異性抑制STAT1蛋白的活化后,病毒蛋白表達(dá)量降低,病毒粒子數(shù)目減少,說明病毒的復(fù)制受到了明顯的抑制,同時IL-6、TNF-α、 IFN-β、MCP-1和IP10等細(xì)胞因子的表達(dá)均明顯下降。藥物時相學(xué)的結(jié)果表明這種抑制作用發(fā)生在病毒復(fù)制的早期(≤3h),進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)p-STAT1參與的是病毒vRNA的合成。當(dāng)使用STAT1特異性的siRNA時,流感病毒的復(fù)制受到了抑制,與FLUD結(jié)果類似。這一系列的結(jié)果證明p-STAT1蛋白參與了流感病毒的早期復(fù)制過程及炎性反應(yīng),并參與調(diào)節(jié)vRNA的合成。將FLUD作用于H5N1流感病毒感染小鼠的體內(nèi),發(fā)現(xiàn)小鼠的大體存活率提高,且感染后3天和6天小鼠肺部的病毒含量以及炎性細(xì)胞因子的表達(dá)量都明顯降低。 將相同劑量的H1N1、H5N1、H7N2三株流感病毒經(jīng)滴鼻感染BALB/c小鼠,結(jié)果發(fā)現(xiàn)除呼吸系統(tǒng)典型損傷外三組小鼠小腸中均表現(xiàn)出不同程度的病理損傷。禽源毒株H5N1和H7N2感染組,小腸上皮細(xì)胞壞死,炎性細(xì)胞浸潤,掃描電鏡圖片顯示這兩個組的小腸微絨毛基本消失,人源毒株H1N1感染組小鼠僅有輕微的腸道損傷。小腸切片免疫組化和PCR結(jié)果顯示,僅在腸道中檢測到H5N1和H7N2流感病毒。SA受體染色顯示,小腸中大量分布α2,3型禽源病毒唾液酸受體,而微弱表達(dá)α.2,6型人源病毒的唾液酸受體。三個感染組中小腸內(nèi)的杯狀細(xì)胞及s1gA等粘膜免疫組分在感染后3d和6d都明顯上調(diào)。除H7N2感染組小腸中的CD8+T淋巴細(xì)胞上調(diào)外,其余感染組小鼠小腸內(nèi)CD4+, CD8+T淋巴細(xì)胞都明顯降低。這一些列的結(jié)果說明流感病毒感染可以引起小腸內(nèi)結(jié)構(gòu)損傷,并改變局部的免疫反應(yīng),從而可能會導(dǎo)致胃腸炎的癥狀。
【關(guān)鍵詞】：磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué) 流感病毒 STAT1 感冒性胃腸炎 粘膜免疫
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 縮略詞表11-13
• 第一章 A型流感病毒及機(jī)體免疫反應(yīng)13-30
• 1. A型流感病毒概述13-17
• 2. 流感病毒感染過程中激活的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路17-24
• 3. 流感病毒與磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)24-26
• 4. 流感病毒與腸道免疫26-27
• 5. 流感病毒的防控27-30
• 第二章 A型流感病毒感染A549細(xì)胞后磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究30-50
• 1. 引言30
• 2. 材料和方法30-41
• 3. 結(jié)果41-47
• 4. 討論47-49
• 5. 小結(jié)49-50
• 第三章 p-STAT1蛋白在流感病毒感染A549過程中對病毒復(fù)制和炎癥的調(diào)節(jié)作用50-71
• 1. 引言50
• 2. 材料和方法50-58
• 3. 結(jié)果58-68
• 4. 討論68-70
• 5. 小結(jié)70-71
• 第四章 p-STAT1蛋白在流感病毒感染小鼠模型中對病毒復(fù)制和炎癥的調(diào)節(jié)作用71-85
• 1. 引言71
• 2. 材料和方法71-76
• 3. 結(jié)果76-82
• 4. 討論82-84
• 5. 小結(jié)84-85
• 第五章 A型流感病毒感染小鼠后引起的腸炎癥狀的機(jī)制初探85-98
• 1. 引言85
• 2. 材料和方法85-90
• 3. 結(jié)果90-95
• 4. 討論95-97
• 5. 小結(jié)97-98
• 第六章 結(jié)論98-99
• 創(chuàng)新點99-101
• 參考文獻(xiàn)101-109
• 個人簡介109-111
• 致謝111

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：262567