本文關鍵詞：p-STAT1蛋白參與調節(jié)A型流感病毒的復制及炎性反應的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究發(fā)現(xiàn),細胞內某些磷酸化位點的激活對于病毒的復制過程是必須的,從而可能會成為抗病毒藥物的靶點。對H1N1、H5N1、H7N2三種亞型的流感病毒感染A549細胞2h后的細胞樣品進行磷酸化蛋白質組學分析,與對照組相比檢測到1326個在三種流感病毒感染樣品中共存在的磷酸化蛋白質,其中明顯上調的有34個,明顯下調的有17個。對這些變化明顯的蛋白質進行歸類分析,發(fā)現(xiàn)這些蛋白質的種類包括先天性免疫、凋亡、代謝和轉錄等,其中STAT1蛋白是轉錄因子中唯一明顯上調表達的蛋白�；诖宋覀兿胩剿骰罨腟TAT1蛋白是否參與病毒的復制及炎性反應,而不是僅僅作為IFN的下游效應因子? 利用H5N1流感病毒感染A549細胞,感染劑量為1MOI,結果顯示STAT1蛋白在感染后2h明顯活化,在4-8h到達高峰,12h后明顯下降至消失。同時檢測攻毒后0-24h期間病毒復制及IFN-β表達情況,結果顯示病毒增殖和IFN-β的表達持續(xù)升高。推測STAT1的重要生物學作用出現(xiàn)在病毒感染前期(0-12h)�；瘜W性藥物FLUD特異性抑制STAT1蛋白的活化后,病毒蛋白表達量降低,病毒粒子數(shù)目減少,說明病毒的復制受到了明顯的抑制,同時IL-6、TNF-α、 IFN-β、MCP-1和IP10等細胞因子的表達均明顯下降。藥物時相學的結果表明這種抑制作用發(fā)生在病毒復制的早期(≤3h),進一步研究發(fā)現(xiàn)p-STAT1參與的是病毒vRNA的合成。當使用STAT1特異性的siRNA時,流感病毒的復制受到了抑制,與FLUD結果類似。這一系列的結果證明p-STAT1蛋白參與了流感病毒的早期復制過程及炎性反應,并參與調節(jié)vRNA的合成。將FLUD作用于H5N1流感病毒感染小鼠的體內,發(fā)現(xiàn)小鼠的大體存活率提高,且感染后3天和6天小鼠肺部的病毒含量以及炎性細胞因子的表達量都明顯降低。 將相同劑量的H1N1、H5N1、H7N2三株流感病毒經滴鼻感染BALB/c小鼠,結果發(fā)現(xiàn)除呼吸系統(tǒng)典型損傷外三組小鼠小腸中均表現(xiàn)出不同程度的病理損傷。禽源毒株H5N1和H7N2感染組,小腸上皮細胞壞死,炎性細胞浸潤,掃描電鏡圖片顯示這兩個組的小腸微絨毛基本消失,人源毒株H1N1感染組小鼠僅有輕微的腸道損傷。小腸切片免疫組化和PCR結果顯示,僅在腸道中檢測到H5N1和H7N2流感病毒。SA受體染色顯示,小腸中大量分布α2,3型禽源病毒唾液酸受體,而微弱表達α.2,6型人源病毒的唾液酸受體。三個感染組中小腸內的杯狀細胞及s1gA等粘膜免疫組分在感染后3d和6d都明顯上調。除H7N2感染組小腸中的CD8+T淋巴細胞上調外,其余感染組小鼠小腸內CD4+, CD8+T淋巴細胞都明顯降低。這一些列的結果說明流感病毒感染可以引起小腸內結構損傷,并改變局部的免疫反應,從而可能會導致胃腸炎的癥狀。
【關鍵詞】：磷酸化蛋白質組學 流感病毒 STAT1 感冒性胃腸炎 粘膜免疫
【學位授予單位】：中國農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 縮略詞表11-13
• 第一章 A型流感病毒及機體免疫反應13-30
• 1. A型流感病毒概述13-17
• 2. 流感病毒感染過程中激活的細胞信號轉導通路17-24
• 3. 流感病毒與磷酸化蛋白質組學24-26
• 4. 流感病毒與腸道免疫26-27
• 5. 流感病毒的防控27-30
• 第二章 A型流感病毒感染A549細胞后磷酸化蛋白質組學研究30-50
• 1. 引言30
• 2. 材料和方法30-41
• 3. 結果41-47
• 4. 討論47-49
• 5. 小結49-50
• 第三章 p-STAT1蛋白在流感病毒感染A549過程中對病毒復制和炎癥的調節(jié)作用50-71
• 1. 引言50
• 2. 材料和方法50-58
• 3. 結果58-68
• 4. 討論68-70
• 5. 小結70-71
• 第四章 p-STAT1蛋白在流感病毒感染小鼠模型中對病毒復制和炎癥的調節(jié)作用71-85
• 1. 引言71
• 2. 材料和方法71-76
• 3. 結果76-82
• 4. 討論82-84
• 5. 小結84-85
• 第五章 A型流感病毒感染小鼠后引起的腸炎癥狀的機制初探85-98
• 1. 引言85
• 2. 材料和方法85-90
• 3. 結果90-95
• 4. 討論95-97
• 5. 小結97-98
• 第六章 結論98-99
• 創(chuàng)新點99-101
• 參考文獻101-109
• 個人簡介109-111
• 致謝111

【共引文獻】

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本文編號：262567