【摘要】：鹿茸是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一能夠再生的哺乳動(dòng)物器官。它能夠像腫瘤一樣割后再生并快速生長(zhǎng),但不發(fā)生癌變也沒(méi)有引起周圍組織癌變。該現(xiàn)象至今不能被解釋。c-myc基因是具有典型bHLHZIPDNA結(jié)合特征的轉(zhuǎn)錄因子,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化,和凋亡等多種功能。在維持正常細(xì)胞功能活動(dòng)中起著重要作用。研究原癌基因c-myc對(duì)鹿茸快速生長(zhǎng)和再生的影響,從分子水平揭示鹿茸干細(xì)胞的增殖分化特性,闡述原癌基因c-myc對(duì)鹿茸角快速生長(zhǎng)同時(shí)不發(fā)生癌變的調(diào)控影響機(jī)制；同時(shí)構(gòu)建鹿茸軟骨發(fā)生發(fā)育的體外模型能夠?yàn)楣堑男迯?fù)與再生研究提供基礎(chǔ)。研究以塔里木馬鹿茸為材料,利用分子克隆、定量表達(dá)、免疫組織化學(xué)、細(xì)胞體外培養(yǎng)及腺病毒轉(zhuǎn)染等技術(shù),對(duì)鹿茸c-myc基因結(jié)構(gòu),不同生長(zhǎng)期的馬鹿茸組織中基因的表達(dá)特性進(jìn)行了研究,同時(shí)建立鹿茸軟骨體外發(fā)育模型,通過(guò)抑制Wnt信號(hào)通路研究其下游基因c-myc對(duì)鹿茸MSCs軟骨分化的影響。結(jié)果表明：塔里木馬鹿茸c-myc基因cDNA全長(zhǎng)為1840bp序列,其DNA結(jié)合域由bHLHZIP結(jié)構(gòu)組成,共80個(gè)氨基酸殘基。除了bHLH區(qū)的第16和46位氨基酸與牛、羊、人和鼠的序列有差異外,其余結(jié)合位點(diǎn)的氨基酸都沒(méi)有變異。定量檢測(cè)第30d、40d、60d和70d生長(zhǎng)期鹿茸的茸皮、間充質(zhì)細(xì)胞層、成軟骨和軟骨組織c-myc基因的表達(dá),結(jié)果c-myc基因總表達(dá)量呈下調(diào)表達(dá)趨勢(shì)；以鹿耳組織代表體組織進(jìn)行比較,四個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)的茸組織基因表達(dá)量均不高于體組織。但在30d的鹿茸軟骨、40d的茸皮和60d的間充質(zhì)層三個(gè)組織中,c-myc基因的相對(duì)表達(dá)量最高；在四個(gè)組織中間充質(zhì)細(xì)胞層的表達(dá)量最高,而處于分化狀態(tài)的成軟骨組織表達(dá)量最低。c-myc蛋白表達(dá)主要位于鹿茸皮毛囊根鞘、真皮基底層和動(dòng)脈血管平滑肌以及鹿茸的間充質(zhì)層；和30d的鹿茸軟骨細(xì)胞層。初步說(shuō)明c-myc對(duì)鹿茸表皮干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞組織的增殖有重要作用,對(duì)早期軟骨細(xì)胞增殖、成熟有重要影響。利用外源TGFβ1成功誘導(dǎo)鹿茸間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)向軟骨分化,在軟骨分化過(guò)程中,c-myc基因表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05),在分化第28天軟骨階段c-myc基因上調(diào)表達(dá),阻止了軟骨分化的進(jìn)程,使細(xì)胞向骨變化。這一變化與體內(nèi)檢測(cè)生長(zhǎng)早期鹿茸軟骨的c-myc表達(dá)特性相一致。利用DKK1超表達(dá)阻止c-myc基因上游的Wnt信號(hào),結(jié)果證實(shí)在鹿茸發(fā)育過(guò)程c-myc基因通過(guò)Wnt/p-catenin經(jīng)典通路調(diào)控鹿茸MSCs向軟骨分化,過(guò)表達(dá)DKK1抑制c-myc的初始表達(dá)水平可誘導(dǎo)鹿茸MSCs進(jìn)入分化狀態(tài),但信號(hào)通路的抑制基因DKK1不抑制鹿茸MSCs c-myc基因總體表達(dá)水平,不影響鹿茸MSCs的增殖活動(dòng),鹿茸MSCs在任何c-myc水平的增殖活動(dòng)是馬鹿茸快速生長(zhǎng)的重要原因。綜上所述,c-myc基因在鹿茸快速生長(zhǎng)過(guò)程一直處于低表達(dá)水平(低于體組織)；c-myc可以通過(guò)wnt信號(hào)通路影響MSCs向軟骨分化�；蛳抡{(diào)表達(dá)可誘導(dǎo)軟骨分化活動(dòng),但不影響MSCs增殖；c-myc基因上調(diào)表達(dá)可促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖和成熟,但也對(duì)持續(xù)的分化活動(dòng)有抑制作用。鹿茸MSCs在任何c-myc水平的增殖活動(dòng)是馬鹿茸快速生長(zhǎng)的重要原因。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S825

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本文編號(hào)：2543839