【摘要】：近年來,由多種不同亞型的禽流感病毒引起的禽流感疫情在世界范圍內(nèi)禽鳥中持續(xù)不斷地爆發(fā),而且經(jīng)自然重組變異后一些禽流感病毒獲得了跨越種間屏障感染哺乳動(dòng)物和人的能力,常常導(dǎo)致哺乳動(dòng)物和人的發(fā)病甚至死亡。因此,禽流感已經(jīng)成為當(dāng)今直接影響和威脅動(dòng)物和人類健康的最為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。野鳥作為禽流感病毒的自然宿主,對(duì)病毒的持續(xù)存在、重組變異、及傳播擴(kuò)散具有重要的作用。因此,加強(qiáng)對(duì)野鳥禽流感病毒的主動(dòng)監(jiān)測(cè)研究,充分了解掌握它的生態(tài)分布、流行特征、遺傳演化規(guī)律,對(duì)禽流感疫情的預(yù)警和防控具有十分重要的意義。本研究在2014-2015年間的春冬兩季對(duì)安徽省野鳥進(jìn)行了流感病毒的病原學(xué)監(jiān)測(cè)研究,通過病毒的分離與鑒定和遺傳演化分析,了解掌握該地區(qū)野生鳥類的禽流感病毒的攜帶狀況；同時(shí)從小鼠的感染實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞感染方面評(píng)價(jià)了野鳥源禽流感病毒對(duì)人及哺乳動(dòng)物的潛在威脅；最后通過對(duì)代表毒株的先天性免疫分子的表達(dá)情況初步分析了野鳥源禽流感病毒引發(fā)雞和鴨免疫風(fēng)暴因子的差異性表達(dá)情況。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下：一、2014-2015年安徽省野鳥中禽流感病毒的感染攜帶狀況從4534份野鳥樣品中共分離鑒定出流感病毒38株,新城疫病毒13株,病毒分離率1.1%,自采樣品禽流感病毒的分離率為2.65%,送檢樣品的禽流感病毒分離率為0.21%。分離到的禽流感病毒包括HIN1、H1N2、H3N2、H3N3、H3N8、H6N1、 H6N2、H9N2和H11N9共計(jì)9個(gè)亞型組合,H6N2和H9N2為優(yōu)勢(shì)亞型。對(duì)38株禽流感病毒進(jìn)行全基因組序列測(cè)定,根據(jù)HA蛋白的氨基酸序列分析顯示這38株流感病毒均為低致病性禽流感病毒。2015年分離的兩株H9N2禽流感病毒雖然HA基因顯示為低致病性禽流感病毒特征,但其內(nèi)部基因PB2的627位為賴氨酸,該特征性氨基酸與增強(qiáng)病毒對(duì)哺乳動(dòng)物的致病性有關(guān),提示流感病毒在野鳥中可發(fā)生進(jìn)化向著毒力增強(qiáng)的趨勢(shì)發(fā)展,對(duì)哺乳動(dòng)物乃至人類具有潛在威脅。從內(nèi)部基因的遺傳演化分析可以看出,各個(gè)亞型之間存在復(fù)雜的基因重組,各個(gè)亞型之間基因的重排、重配明顯,尤其是部分毒株的N2基因、PA基因和NS基因來源十北美分支,為北美和歐業(yè)兩個(gè)分支的重組病毒,說明候鳥可攜帶禽流感病毒進(jìn)行長(zhǎng)距離的遷徙活動(dòng),以及野鳥在禽流感病毒的傳播與重組中發(fā)揮著重要的作川。二、代表性毒株的致病性評(píng)價(jià)為了解野鳥源禽流感病毒對(duì)哺乳動(dòng)物的潛在威脅,本研究以Babl/c小鼠作為研究流感病毒感染哺乳動(dòng)物的模型,評(píng)價(jià)野鳥源禽流感病毒對(duì)哺乳動(dòng)物的潛在危害。小鼠的感染性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,除個(gè)別毒株外,本研究中的大多數(shù)野鳥源禽流感病毒能夠感染小鼠,造成小鼠不同程度的體重減輕,但無其他臨床表現(xiàn)。病毒僅局限于在小鼠的呼吸道器官進(jìn)行復(fù)制,各個(gè)亞型、各個(gè)毒株之間呈現(xiàn)差異性復(fù)制。以上數(shù)據(jù)表明這些野鳥源禽流感病毒雖然對(duì)小鼠不具有致死性,但是可不經(jīng)過適應(yīng)直接感染小鼠,仍然對(duì)哺乳動(dòng)物具有潛在的威脅。鑒于病毒可在小鼠體內(nèi)進(jìn)行良好的復(fù)制,本論文進(jìn)一步以人肺泡癌上皮細(xì)胞作為靶細(xì)胞,以H6亞型的兩株病毒(一株為H6N1,一株為H6N2)作為研究對(duì)象,評(píng)價(jià)野鳥源禽流感病毒在人呼吸道靶細(xì)胞上的復(fù)制能力,進(jìn)而推斷這些病毒對(duì)人的潛在危害。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析得出,這兩株病毒均可在人肺泡癌上皮細(xì)胞上有良好的復(fù)制能力,因而表明野鳥源H6亞型禽流感病毒對(duì)人有一定的危害風(fēng)險(xiǎn)。三、代表毒株引發(fā)不同細(xì)胞表達(dá)先天性免疫風(fēng)暴因子的比較評(píng)價(jià)雞和鴨為流感病毒的兩大主要宿主,也是人類食用的主要畜產(chǎn)品。大量研究表明,這兩大宿主對(duì)禽流感病毒的抵抗有著明顯的差異,高致病性禽流感病毒往往導(dǎo)致雞群呈現(xiàn)明顯的疾病癥狀,大批量死亡;鴨群感染了高致病性流感病毒后只是呈現(xiàn)明顯的臨床癥狀,死亡率卻很低,鴨群感染了低致病流感病毒后,有些則沒有任何臨床癥狀,所以說鴨群對(duì)流感病毒的耐受力較雞群強(qiáng)。本論文以分離到的H6亞型AIV,且在小鼠上具有良好復(fù)制能力的4株病毒為研究對(duì)象,以雞胚成纖維細(xì)胞和鴨胚成纖維細(xì)胞作為靶細(xì)胞,通過分析比較野鳥源禽流感病毒對(duì)流感病毒的兩大自然宿主細(xì)胞的先天性免疫風(fēng)暴因子(前炎癥因子、抗炎癥因子、抗原識(shí)別受體TLR7和抗病毒因子)的表達(dá)水平評(píng)價(jià)野鳥源禽流感病毒引發(fā)的不同宿主先天性免疫情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,野鳥源AIV可激起雞和鴨的先天性反應(yīng),而且二者比較,雞的先天性免疫反應(yīng)較強(qiáng)烈,尤其是抗病毒因子IFN-α的表達(dá)呈高水平；而鴨的先天性免疫因子表達(dá)大多呈負(fù)調(diào)控,這與鴨感染AIV后病毒攜帶時(shí)間較長(zhǎng)、病毒滴度較低等觀點(diǎn)不謀而合。綜合分析安徽省的野鳥攜帶的禽流感病毒具有亞型組合多樣和基因重組現(xiàn)象明顯的特征,對(duì)人和哺乳動(dòng)物具有一定的威脅性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.9
，

本文編號(hào)：2399667