本文關(guān)鍵詞：WN10蛋白生物學(xué)功能的研究及旋毛蟲病免疫學(xué)檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《吉林大學(xué)》 2015年

WN10蛋白生物學(xué)功能的研究及旋毛蟲病免疫學(xué)檢測方法的建立

唐斌  

【摘要】：旋毛蟲病是由人與動物生食或半生食寄生有旋毛蟲的肉類而引起的一種人獸共患寄生蟲病,對公共衛(wèi)生和畜牧業(yè)都構(gòu)成極大的威脅。2012年WHO/FAO食源性寄生蟲病委員會依據(jù)疾病對人體的危害程度及經(jīng)濟(jì)損失進(jìn)行排名,旋毛蟲病在所有的食源性寄生蟲病中位居榜首。 旋毛蟲的發(fā)育時(shí)期包括肌幼蟲期,成蟲期、新生幼蟲期,而肌幼蟲侵入腸壁后至發(fā)育為成蟲前亦被稱為腸道感染性幼蟲。由于旋毛蟲在不同發(fā)育時(shí)期其抗原表達(dá)存在明顯差異,因而僅以單一時(shí)期單個(gè)抗原蛋白作為診斷抗原特異敏感地檢測旋毛蟲病難以實(shí)現(xiàn)。目前市售的旋毛蟲ELISA檢測試劑盒主要采用的診斷抗原為肌幼蟲的排泄分泌(excretory/secretory, ES)產(chǎn)物,僅能于旋毛蟲感染3-4周后檢測到抗體,而旋毛蟲新生幼蟲于感染第14-16天即可發(fā)育為具有感染性的肌幼蟲,故存在明顯的診斷盲區(qū),這也導(dǎo)致以旋毛蟲肌幼蟲ES產(chǎn)物作為診斷抗原的免疫學(xué)檢測方法至今無法應(yīng)用于屠宰動物檢驗(yàn)與臨床診斷,而只能采用相對更為費(fèi)時(shí)費(fèi)力的鏡檢法和集樣消化法,在臨床診斷上也僅能作為輔助檢測。 本研究中,課題組根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的旋毛蟲不同發(fā)育時(shí)期的cDNA文庫的免疫篩選結(jié)果,分別從每個(gè)發(fā)育時(shí)期選取了一個(gè)高豐度強(qiáng)反應(yīng)原性的抗原蛋白,分別是肌幼蟲的Ts-serpin、腸道感染性幼蟲的WN10、成蟲的Ts-Adsp和新生幼蟲的Ts-NBLsp。利用pET-28a質(zhì)粒構(gòu)建了WN10、Ts-Serpin和Ts-Adsp的原核表達(dá)載體,并表達(dá)、純化獲得了相應(yīng)的重組蛋白。此外,采用overlapping方法對旋毛蟲Ts-NBLsp抗原蛋白進(jìn)行了抗原表位篩選,從構(gòu)建的13條十肽中,成功地篩選到了兩個(gè)強(qiáng)反應(yīng)原性小肽NBLsp4和NBLsp12。 通過聯(lián)合應(yīng)用WN10、Ts-Adsp、Ts-serpin重組蛋白和BSA偶聯(lián)的強(qiáng)反應(yīng)原性小肽NBLsp4、NBLsp12,建立并優(yōu)化了旋毛蟲病無診斷盲區(qū)ELISA檢測方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所建立的ELISA檢測方法無論在高感染劑量還是低感染劑量旋毛蟲感染模型中,均能于感染后第15天成功檢測到抗體,較以肌幼蟲ES產(chǎn)物作為診斷抗原的ELISA方法提前至少8天檢測到抗體,不僅解決了旋毛蟲ES產(chǎn)物作為抗原所導(dǎo)致的診斷盲區(qū)問題,而且克服了ES產(chǎn)物制備生產(chǎn)周期長、成本高和二次污染風(fēng)險(xiǎn)等缺點(diǎn)。 在對WN10進(jìn)行序列分析時(shí),發(fā)現(xiàn)其具有半胱氨酸蛋白酶抑制劑結(jié)構(gòu)域。半胱氨酸蛋白酶抑制劑除具有酶抑制活性之外,還可在寄生蟲逃避宿主的免疫應(yīng)答及在宿主體內(nèi)營寄生生活中發(fā)揮重要作用,因此將半胱氨酸蛋白酶抑制劑作為免疫調(diào)節(jié)劑可能會有良好的應(yīng)用前景。對WN10序列與其他寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶比較,發(fā)現(xiàn)其活性位點(diǎn)發(fā)生了突變,并沒有典型的Q×V×G基序,通過azo-casein活性檢測和反向酶譜實(shí)驗(yàn)證明WN10蛋白在體外無半胱氨酸蛋白酶抑制劑活性。通過體外實(shí)驗(yàn)證明了重組WN10蛋白能夠在體外誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞NO水平上調(diào)。此外,WN10蛋白能夠誘導(dǎo)LPS活化的腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α和IL-10,而且也能夠單獨(dú)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-a和IL-10,從而表明WN10蛋白可能調(diào)節(jié)宿主免疫向Th2極化,從而為旋毛蟲營寄生生活創(chuàng)造有利條件。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S855.9
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 S.S. Salum Mchenga;;Inhibitory Effect of Recombinant IL-25 on the Development of Dextran Sulfate Sodium-Induced Experimental Colitis in Mice[J];Cellular & Molecular Immunology;2008年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 付愛坤;胡勝蘭;杜威;史艷云;李衛(wèi)芬;;益生菌對巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[J];動物營養(yǎng)學(xué)報(bào);2013年12期

2 邵小娟;張艷梅;魏艷玲;樊麗琳;劉卉;楊均;邢寒陽;崔紅莉;顏綦先;唐雯;孫文靜;陳東風(fēng);;NASH患者脂肪組織巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化[J];實(shí)用肝臟病雜志;2013年06期

3 羅卉;張?jiān)?肖明洋;饒永庚;張莉;;大蒜汁對旋毛蟲幼蟲殺滅效果研究[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2014年07期

4 陶象男;宋傳旺;;肥大細(xì)胞在免疫反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用[J];安徽醫(yī)藥;2014年07期

5 閻慧;盤如剛;姚莎莎;楊志蓉;;TGF-β1和HSP-47在翼狀胬肉中的表達(dá)及其意義[J];國際眼科雜志;2014年07期

6 劉灝;吳小翎;王山梅;田洪軍;昝利萍;;再極化腫瘤巨噬細(xì)胞對胃癌的抑制作用[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年05期

7 林明靜;譚建新;陳興月;林虹;;缺氧誘導(dǎo)絲裂因子在炎癥相關(guān)的低氧性肺動脈高壓中作用的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2014年20期

8 Di Zhao;Hui Liu;;Adipose tissue dysfunction and the pathogenesis of metabolic syndrome[J];World Journal of Hypertension;2013年03期

9 陳濤;朱萱;;白細(xì)胞介素-25在炎癥性腸病中作用的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2014年23期

10 鄭得亮;毛偉征;馬貴亮;;IKKβ-RNAi腺病毒構(gòu)建及其HEK293T細(xì)胞表達(dá)[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 章必成;高建飛;;腫瘤治療的新靶點(diǎn)——M2巨噬細(xì)胞[A];第四屆湖北省抗癌協(xié)會青年委員會學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 羅曉;不同來源細(xì)胞外基質(zhì)外科補(bǔ)片的生物學(xué)性質(zhì)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 艾熙;非Smad通路在小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中的作用[D];華中科技大學(xué);2012年

3 趙殿元;DC上表達(dá)的LSECtin對輔助性T細(xì)胞亞群分化的影響及其機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

4 高昆;轉(zhuǎn)基因過表達(dá)白細(xì)胞介素33（IL-33）對小鼠腫瘤生長和肺轉(zhuǎn)移作用的研究及機(jī)制探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 陽喬;單核/巨噬細(xì)胞在肝衰竭中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

6 武陽;瞬時(shí)受體電位通道和神經(jīng)肽表達(dá)上調(diào)在甲醛誘導(dǎo)型支氣管哮喘小鼠模型中的作用[D];華中師范大學(xué);2013年

7 張馨予;鹽敏感高血壓干預(yù)新靶標(biāo)的探索性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 唐帥;Eppin優(yōu)勢表位自組裝納米避孕疫苗的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 羅悅晨;電壓門控型鈉通道中介的單核/巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)在心肌缺血再灌注損傷中的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

10 倪敏;鈣網(wǎng)織蛋白抑制TRAIL誘導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡的作用與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李軍建;廣州管圓線蟲疫源地調(diào)查及單克隆抗12D5保護(hù)性效果的研究[D];汕頭大學(xué);2011年

2 徐冬梅;青海與河南部分地區(qū)豬旋毛蟲病流行病學(xué)調(diào)查及蟲種鑒定[D];鄭州大學(xué);2010年

3 林婧;精氨酸、色氨酸與ctDNA作用機(jī)理的研究[D];山東大學(xué);2013年

4 徐榮偉;TGF-β1、VEGF表達(dá)與大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系[D];山東大學(xué);2013年

5 王曉龍;miR-146a，miR-155在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2013年

6 陳新濤;食管鱗癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與VEGF，MMP-9，MVD表達(dá)的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2013年

7 楊曉瑋;Tfh細(xì)胞促進(jìn)血吸蟲感染小鼠肝臟蟲卵肉芽腫形成的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

8 侯燕;沙苑子總黃酮對博萊霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

9 劉黎;CVB3誘導(dǎo)不同性別BALB/c小鼠巨噬細(xì)胞差異性極化的機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2013年

10 胡道川;鹽皮質(zhì)激素受體在博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龐鳳姝,崔中月;豬旋毛蟲病的預(yù)防[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問;2003年03期

2 蘇舉鵬;;旋毛蟲病的防治[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2009年06期

3 楊錫林;旋毛蟲病研究的國際動向[J];獸醫(yī)科技資料;1978年04期

4 王書彤,王光華,華修國;人獸共通病——旋毛蟲病[J];貴州農(nóng)業(yè)科學(xué);1982年06期

5 楊錫林;旋毛蟲病研究的國際動向[J];獸醫(yī)科技雜志;1983年07期

6 龔廣學(xué);關(guān)于豬旋毛蟲病的初步調(diào)查報(bào)告[J];中國獸醫(yī)雜志;1983年06期

7 楊錫林;;旋毛蟲病研究的新成就[J];國外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1983年02期

8 牛炳亨,潘光武,何惟,竇蘭清;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷豬旋毛蟲病的研究[J];中國獸醫(yī)科技;1985年02期

9 叢恕增;旋毛蟲病綜述[J];中國獸醫(yī)雜志;1985年06期

10 于長江;貉惡性旋毛蟲病一例[J];中國獸醫(yī)科技;1986年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔晶;王中全;;我國旋毛蟲病的流行趨勢及防制對策[A];全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

2 詹艷愛;朱振勤;嚴(yán)自助;;旋毛蟲病診斷方法的進(jìn)展[A];動物學(xué)專輯——上海市動物學(xué)會1997年年會論文集[C];1997年

3 葉建君;陳思禮;宋小東;張紹清;;湖北省人體旋毛蟲病流行及防治研究[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會首屆學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2002年

4 楊森淋;;旋毛蟲病的診斷探討[A];第十一次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

5 張斌;程軍;胡建新;汪維;張璐璐;張勇;;淺談人畜共患旋毛蟲病的診治方法與預(yù)防[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 張?jiān)倥d;李雨春;孫院紅;杜尊偉;;我國人旋毛蟲病防治歷程及未來應(yīng)對策略[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 溫艷;張?jiān)虑?司樹暉;趙燕平;;旋毛蟲病監(jiān)測方法的經(jīng)濟(jì)學(xué)評價(jià)研究[A];中國動物學(xué)會第六屆全國青年寄生蟲學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

8 王中全;崔晶;;人體旋毛蟲病新的傳染源與傳播方式[A];河南省預(yù)防醫(yī)學(xué)會人獸共患病專業(yè)委員會首屆學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

9 劉明遠(yuǎn);;我國的旋毛蟲病及中歐合作研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

10 杜軍;李樹清;;淺談旋毛蟲病[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會成立大會暨第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 莊新茂;[N];中國畜牧報(bào);2005年

2 李澆紅;[N];湖北科技報(bào);2003年

3 李曉紅;[N];山東科技報(bào);2003年

4 記者邱爽;[N];保健時(shí)報(bào);2009年

5 嚴(yán)斯剛;[N];中國畜牧報(bào);2002年

6 消毒殺蟲科;[N];云南日報(bào);2005年

7 記者 付雪暉　通訊員 和樹芳;[N];云南日報(bào);2009年

8 故城縣里老中心醫(yī)院 張亞利;[N];河北科技報(bào);2002年

9 記者 曾繁玉;[N];健康報(bào);2001年

10 王修增;[N];保健時(shí)報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 于申業(yè);高質(zhì)量基因重組蛋白在屠宰動物旋毛蟲病診斷中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2009年

2 唐斌;WN10蛋白生物學(xué)功能的研究及旋毛蟲病免疫學(xué)檢測方法的建立[D];吉林大學(xué);2015年

3 馮爽;旋毛蟲不同發(fā)育時(shí)期基因重組蛋白的免疫原性分析及保護(hù)性研究[D];吉林大學(xué);2013年

4 王莉;免疫蛋白組學(xué)對旋毛蟲診斷抗原的篩選與鑒定及初步應(yīng)用[D];鄭州大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 韓化敏;先天性旋毛蟲病的研究[D];鄭州大學(xué);2004年

2 徐冬梅;青海與河南部分地區(qū)豬旋毛蟲病流行病學(xué)調(diào)查及蟲種鑒定[D];鄭州大學(xué);2010年

3 任科研;應(yīng)用免疫膠體金技術(shù)對豬旋毛蟲病診斷方法的研究[D];吉林大學(xué);2012年

4 楊秀麗;旋毛蟲早期抗原基因診斷方法的建立[D];吉林大學(xué);2012年

5 金宏懷;廣西柳州市豬旋毛蟲病流行情況調(diào)查及其防治[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 楊俊興;豬旋毛蟲病快速診斷試紙條的制備及應(yīng)用研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

7 易岑;真菌提取物對旋毛蟲病治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：WN10蛋白生物學(xué)功能的研究及旋毛蟲病免疫學(xué)檢測方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：230347