【摘要】：免疫系統(tǒng)的增齡性老化,又稱作“免疫衰老”,具有以下兩個顯著的特征:免疫應答力下降以及功能調(diào)節(jié)異常。這些變化與老年群體的發(fā)病率和死亡率上升相關,也與自身免疫和癌癥相關,還會導致許多疫苗不能有效促進老年人產(chǎn)生保護性免疫。研究顯示,老年人體液免疫和細胞免疫應答能力急劇下降,這雖然與B淋巴細胞的變化相關,但是主要與T細胞的變化密切關聯(lián)。本文第一部分以CD8+T細胞亞群為主,主要綜述以下六方面對CD8表達量及CD8+T細胞功能的影響:胸腺的增齡性功能退化與萎縮、細胞的穩(wěn)態(tài)和壽命、細胞亞群變化、T淋巴細胞活化、細胞復制性衰老進程和寡克隆增殖,CD4+T細胞和抗原呈遞細胞的增齡性變化對CD8+T細胞活化和功能的影響,以及人類和小鼠不同的免疫衰老模式也被提及。第二部分以CD4+T細胞亞群為主,CD4+T細胞通過對B細胞的輔助功能,在體液免疫反應發(fā)揮重要作用,這部分綜述了增齡導致的CD4表達定性和定量變化,也總結(jié)了有關增齡對CD4+T細胞功能的影響。綜上,了解增齡如何影響CD4及CD8蛋白表達量,及如何損傷CD4+T細胞及CD8+T細胞功能,能為適時免疫、致病機理和疾病防治等研究提供基礎資料,也對設計針對老年機體的新型免疫和治療策略至關重要。(1)胸腺是機體中樞淋巴器官,是T淋巴細胞發(fā)育及成熟的場所,本研究應用透射電鏡技術,對初生牦牛胸腺的超微結(jié)構進行了觀察。結(jié)果顯示:初生牦牛胸腺結(jié)構已基本發(fā)育完善;上皮網(wǎng)狀細胞通過橋粒連接構成網(wǎng)狀支架,網(wǎng)狀間隙里分布著淋巴細胞、樹突細胞、巨噬細胞及漿細胞等。皮質(zhì)淋巴細胞分裂相較常見,髓質(zhì)淋巴細胞形態(tài)多變,核切跡明顯,異染色質(zhì)周邊集聚。巨噬細胞含有溶酶體及吞噬碎片,樹突細胞核為不規(guī)則形,分支狀的細胞質(zhì)突起與周圍胸腺細胞胞質(zhì)突起呈復雜的手指交叉狀。本文還描述了漿細胞、嗜酸性粒細胞及中性粒細胞超微結(jié)構。以上結(jié)果提示,牦牛胸腺與人類相似,初生時已基本發(fā)育完善;胸腺組織內(nèi)細胞成分復雜,以淋巴細胞和上皮細胞為主,這為進一步研究牦牛胸腺功能和T淋巴細胞發(fā)育提供了形態(tài)學依據(jù),也為比較組織學補充了資料。(2)CD4分子是輔助性T淋巴細胞表面的重要標志,廣泛參與T細胞受體對主要組織相容性復合物II(major histocompatibility complex II,MHC II)分子遞呈抗原的識別和信號傳遞,與細胞免疫應答和防御機制緊密相關。本研究采用rt-pcr方法克隆牦牛(bosgrunniens)cd4的開放閱讀框,通過實時定量pcr、westernblot及免疫組織化學技術,檢測初生(7-9日齡;n=5)、半歲(5-7月齡;n=5)和成年(3-4歲;n=5)牦牛胸腺、脾、腸系膜淋巴結(jié)和血結(jié)內(nèi)cd4mrna和蛋白的表達情況。rt-pcr反應擴增得到牦牛cd4mrna序列編碼區(qū)長為1188bp,編碼396個氨基酸,與黃牛(bostaurus)有較高的同源性。實時熒光定量rt-pcr和westernblot研究結(jié)果顯示,同一發(fā)育期牦牛各淋巴器官內(nèi)cd4mrna及蛋白表達存在差異,其在胸腺的表達量始終高于脾、腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié);另外,各淋巴器官內(nèi)cd4mrna和蛋白表達量隨著增齡下降,初生及半歲牦牛淋巴器官內(nèi)cd4表達量均高于成年牦牛水平(p0.05)。免疫組織化學結(jié)果顯示,cd4+細胞在胸腺皮質(zhì)、髓質(zhì)均有分布;在脾主要分布在動脈周圍淋巴鞘和紅髓;在腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié)內(nèi),則主要分布在淋巴小結(jié)周邊、髓索及竇。另外,少量陽性細胞分布在淋巴小結(jié)內(nèi)。結(jié)果提示,牦牛淋巴器官內(nèi)cd4表達量隨增齡下降;牦牛胸腺cd4表達量可能影響次級淋巴器官內(nèi)cd4含量;血結(jié)可能與淋巴結(jié)及脾臟一樣,在細胞及體液免疫發(fā)揮同等重要的作用。這些數(shù)據(jù)為進一步理解cd4蛋白在牦牛細胞免疫應答中的作用及機理提供了依據(jù),也能為牦牛免疫遺傳學和免疫生物學等相關研究奠定基礎,同時還將為適時免疫、致病機理和疾病防治等研究提供新的資料。(3)cd8α是細胞毒性t淋巴細胞重要的表面標志,廣泛參與對mhc?分子遞呈抗原的識別和信號傳遞,對細胞免疫應答和防御機制至關重要。本研究采集初生(7-9日齡)、半歲(5-7月齡)和成年(3-4歲)雄性牦牛(bosgrunniens)的胸腺、脾、腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié),采用rt-pcr方法克隆牦牛cd8α的編碼區(qū),通過實時熒光定量pcr、westernblot及免疫組織化學法,檢測初生、半歲及成年牦牛各淋巴器官內(nèi)cd8αmrna及蛋白表達量和分布。rt-pcr反應擴增得到牦牛cd8αmrna序列編碼區(qū)長為729bp,編碼243個氨基酸,與黃牛有較高的同源性。實時熒光定量pcr和westernblot檢測結(jié)果顯示,cd8αmrna及蛋白在各淋巴器官內(nèi)均有表達,且在胸腺的表達量始終高于腸系膜淋巴結(jié)、脾及血結(jié)(p0.05)。隨著發(fā)育,各淋巴器官內(nèi)cd8αmrna和蛋白表達量上升,即cd8αmrna及蛋白在初生牦牛各淋巴器官表達量較低,而半歲與成年牦牛各淋巴器官內(nèi)CD8α表達量上升,且二者均高于初生牦牛淋巴器官內(nèi)的表達水平(P0.05)。免疫組織化學結(jié)果顯示,CD8α+T細胞在胸腺皮質(zhì)、髓質(zhì)均有分布;在脾主要分布在動脈周圍淋巴鞘、紅髓髓索及髓竇;腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié)內(nèi),CD8α+細胞主要分布在淋巴小結(jié)周邊、髓索及竇;少量陽性細胞分布在次級淋巴器官的小結(jié)中央。結(jié)果提示,牦牛淋巴器官內(nèi)CD8α表達量表現(xiàn)出增齡性上升;另外,牦牛胸腺的CD8α表達量可能影響次級淋巴器官內(nèi)其含量;CD8α+T細胞出現(xiàn)在小結(jié)內(nèi)部,可能與高原免疫適應性相關。這些數(shù)據(jù)將為進一步研究高原免疫適應機制提供參考,也能為牦牛適時免疫、致病機理和疾病防治等研究奠定基礎。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S823.85

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本文編號：2298180