發(fā)布時(shí)間：2018-10-29 16:14

【摘要】：免疫系統(tǒng)的增齡性老化,又稱作“免疫衰老”,具有以下兩個(gè)顯著的特征:免疫應(yīng)答力下降以及功能調(diào)節(jié)異常。這些變化與老年群體的發(fā)病率和死亡率上升相關(guān),也與自身免疫和癌癥相關(guān),還會(huì)導(dǎo)致許多疫苗不能有效促進(jìn)老年人產(chǎn)生保護(hù)性免疫。研究顯示,老年人體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答能力急劇下降,這雖然與B淋巴細(xì)胞的變化相關(guān),但是主要與T細(xì)胞的變化密切關(guān)聯(lián)。本文第一部分以CD8+T細(xì)胞亞群為主,主要綜述以下六方面對(duì)CD8表達(dá)量及CD8+T細(xì)胞功能的影響:胸腺的增齡性功能退化與萎縮、細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和壽命、細(xì)胞亞群變化、T淋巴細(xì)胞活化、細(xì)胞復(fù)制性衰老進(jìn)程和寡克隆增殖,CD4+T細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞的增齡性變化對(duì)CD8+T細(xì)胞活化和功能的影響,以及人類和小鼠不同的免疫衰老模式也被提及。第二部分以CD4+T細(xì)胞亞群為主,CD4+T細(xì)胞通過對(duì)B細(xì)胞的輔助功能,在體液免疫反應(yīng)發(fā)揮重要作用,這部分綜述了增齡導(dǎo)致的CD4表達(dá)定性和定量變化,也總結(jié)了有關(guān)增齡對(duì)CD4+T細(xì)胞功能的影響。綜上,了解增齡如何影響CD4及CD8蛋白表達(dá)量,及如何損傷CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞功能,能為適時(shí)免疫、致病機(jī)理和疾病防治等研究提供基礎(chǔ)資料,也對(duì)設(shè)計(jì)針對(duì)老年機(jī)體的新型免疫和治療策略至關(guān)重要。(1)胸腺是機(jī)體中樞淋巴器官,是T淋巴細(xì)胞發(fā)育及成熟的場(chǎng)所,本研究應(yīng)用透射電鏡技術(shù),對(duì)初生牦牛胸腺的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察。結(jié)果顯示:初生牦牛胸腺結(jié)構(gòu)已基本發(fā)育完善;上皮網(wǎng)狀細(xì)胞通過橋粒連接構(gòu)成網(wǎng)狀支架,網(wǎng)狀間隙里分布著淋巴細(xì)胞、樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及漿細(xì)胞等。皮質(zhì)淋巴細(xì)胞分裂相較常見,髓質(zhì)淋巴細(xì)胞形態(tài)多變,核切跡明顯,異染色質(zhì)周邊集聚。巨噬細(xì)胞含有溶酶體及吞噬碎片,樹突細(xì)胞核為不規(guī)則形,分支狀的細(xì)胞質(zhì)突起與周圍胸腺細(xì)胞胞質(zhì)突起呈復(fù)雜的手指交叉狀。本文還描述了漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。以上結(jié)果提示,牦牛胸腺與人類相似,初生時(shí)已基本發(fā)育完善;胸腺組織內(nèi)細(xì)胞成分復(fù)雜,以淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞為主,這為進(jìn)一步研究牦牛胸腺功能和T淋巴細(xì)胞發(fā)育提供了形態(tài)學(xué)依據(jù),也為比較組織學(xué)補(bǔ)充了資料。(2)CD4分子是輔助性T淋巴細(xì)胞表面的重要標(biāo)志,廣泛參與T細(xì)胞受體對(duì)主要組織相容性復(fù)合物II(major histocompatibility complex II,MHC II)分子遞呈抗原的識(shí)別和信號(hào)傳遞,與細(xì)胞免疫應(yīng)答和防御機(jī)制緊密相關(guān)。本研究采用rt-pcr方法克隆牦牛(bosgrunniens)cd4的開放閱讀框,通過實(shí)時(shí)定量pcr、westernblot及免疫組織化學(xué)技術(shù),檢測(cè)初生(7-9日齡;n=5)、半歲(5-7月齡;n=5)和成年(3-4歲;n=5)牦牛胸腺、脾、腸系膜淋巴結(jié)和血結(jié)內(nèi)cd4mrna和蛋白的表達(dá)情況。rt-pcr反應(yīng)擴(kuò)增得到牦牛cd4mrna序列編碼區(qū)長(zhǎng)為1188bp,編碼396個(gè)氨基酸,與黃牛(bostaurus)有較高的同源性。實(shí)時(shí)熒光定量rt-pcr和westernblot研究結(jié)果顯示,同一發(fā)育期牦牛各淋巴器官內(nèi)cd4mrna及蛋白表達(dá)存在差異,其在胸腺的表達(dá)量始終高于脾、腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié);另外,各淋巴器官內(nèi)cd4mrna和蛋白表達(dá)量隨著增齡下降,初生及半歲牦牛淋巴器官內(nèi)cd4表達(dá)量均高于成年牦牛水平(p0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,cd4+細(xì)胞在胸腺皮質(zhì)、髓質(zhì)均有分布;在脾主要分布在動(dòng)脈周圍淋巴鞘和紅髓;在腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié)內(nèi),則主要分布在淋巴小結(jié)周邊、髓索及竇。另外,少量陽性細(xì)胞分布在淋巴小結(jié)內(nèi)。結(jié)果提示,牦牛淋巴器官內(nèi)cd4表達(dá)量隨增齡下降;牦牛胸腺cd4表達(dá)量可能影響次級(jí)淋巴器官內(nèi)cd4含量;血結(jié)可能與淋巴結(jié)及脾臟一樣,在細(xì)胞及體液免疫發(fā)揮同等重要的作用。這些數(shù)據(jù)為進(jìn)一步理解cd4蛋白在牦牛細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用及機(jī)理提供了依據(jù),也能為牦牛免疫遺傳學(xué)和免疫生物學(xué)等相關(guān)研究奠定基礎(chǔ),同時(shí)還將為適時(shí)免疫、致病機(jī)理和疾病防治等研究提供新的資料。(3)cd8α是細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞重要的表面標(biāo)志,廣泛參與對(duì)mhc?分子遞呈抗原的識(shí)別和信號(hào)傳遞,對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答和防御機(jī)制至關(guān)重要。本研究采集初生(7-9日齡)、半歲(5-7月齡)和成年(3-4歲)雄性牦牛(bosgrunniens)的胸腺、脾、腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié),采用rt-pcr方法克隆牦牛cd8α的編碼區(qū),通過實(shí)時(shí)熒光定量pcr、westernblot及免疫組織化學(xué)法,檢測(cè)初生、半歲及成年牦牛各淋巴器官內(nèi)cd8αmrna及蛋白表達(dá)量和分布。rt-pcr反應(yīng)擴(kuò)增得到牦牛cd8αmrna序列編碼區(qū)長(zhǎng)為729bp,編碼243個(gè)氨基酸,與黃牛有較高的同源性。實(shí)時(shí)熒光定量pcr和westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示,cd8αmrna及蛋白在各淋巴器官內(nèi)均有表達(dá),且在胸腺的表達(dá)量始終高于腸系膜淋巴結(jié)、脾及血結(jié)(p0.05)。隨著發(fā)育,各淋巴器官內(nèi)cd8αmrna和蛋白表達(dá)量上升,即cd8αmrna及蛋白在初生牦牛各淋巴器官表達(dá)量較低,而半歲與成年牦牛各淋巴器官內(nèi)CD8α表達(dá)量上升,且二者均高于初生牦牛淋巴器官內(nèi)的表達(dá)水平(P0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,CD8α+T細(xì)胞在胸腺皮質(zhì)、髓質(zhì)均有分布;在脾主要分布在動(dòng)脈周圍淋巴鞘、紅髓髓索及髓竇;腸系膜淋巴結(jié)及血結(jié)內(nèi),CD8α+細(xì)胞主要分布在淋巴小結(jié)周邊、髓索及竇;少量陽性細(xì)胞分布在次級(jí)淋巴器官的小結(jié)中央。結(jié)果提示,牦牛淋巴器官內(nèi)CD8α表達(dá)量表現(xiàn)出增齡性上升;另外,牦牛胸腺的CD8α表達(dá)量可能影響次級(jí)淋巴器官內(nèi)其含量;CD8α+T細(xì)胞出現(xiàn)在小結(jié)內(nèi)部,可能與高原免疫適應(yīng)性相關(guān)。這些數(shù)據(jù)將為進(jìn)一步研究高原免疫適應(yīng)機(jī)制提供參考,也能為牦牛適時(shí)免疫、致病機(jī)理和疾病防治等研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S823.85

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本文編號(hào)：2298180