發(fā)布時(shí)間：2018-07-14 08:25

【摘要】：由禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)為主要病原所引起的小麥赤霉病是世界范圍內(nèi)小麥產(chǎn)區(qū)的主要病害之一。該病不但能造成小麥產(chǎn)量的巨大損失,還能在侵染致病過(guò)程中產(chǎn)生名為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)危害人畜的健康。前面的研究中已經(jīng)獲得96個(gè)禾谷鐮刀菌激酶基因缺失突變體,這些激酶中28個(gè)基因在釀酒酵母中無(wú)同源基因,其中12個(gè)沒(méi)有觀察到明顯的表型變化。這些沒(méi)有表型變化的基因推測(cè)可能在胞內(nèi)代謝通路上發(fā)生變化從而引起菌體代謝物。代謝組學(xué)的中心目的就是在特定的環(huán)境條件下分析由基因調(diào)控所引起的生物系統(tǒng)中代謝產(chǎn)物的變化,因此代謝組學(xué)可以將基因型和表型同代謝物聯(lián)系起來(lái)。在本研究中,我們通過(guò)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)分析93個(gè)激酶缺失突變體中代謝譜變化。在基本培養(yǎng)基(MM)和完全培養(yǎng)基(CM)中培養(yǎng)15天的所有突變體,通過(guò)濾布過(guò)濾菌絲后液氮研磨。研磨后樣品使用甲醇提取,代謝物通過(guò)氯甲酸甲酯(MCF)三甲基硅烷(TMS)和衍生化。與MM培養(yǎng)的菌絲相比,在CM中的菌絲產(chǎn)生更多的亞油酸、山梨醇和蔗糖,但是阿拉伯糖醇的產(chǎn)量降低。此外,MM培養(yǎng)基中無(wú)明顯的代謝譜變化的突變體在CM中也表現(xiàn)出巨大的代謝變化,表明培養(yǎng)條件和基因調(diào)控共同影響代謝物種類和含量。禾谷鐮刀菌中重要的三條MAPK通路在植物侵染和其他很多生物過(guò)程中扮演著重要的作用。FgHog1通路突變體在兩種培養(yǎng)基中相對(duì)于野生型PH-1都顯示出阿拉伯糖醇和山梨醇顯著降低并聚類在一起。FgMgv1通路缺失突變體在MM中和FgGpmk1通路缺失突變體聚類在一起。有趣的是,在CM中FgMgv1通路缺失突變體和其他11個(gè)基因缺失突變體相對(duì)于野生型表現(xiàn)出極其明顯的阿拉伯糖醇的升高和松二糖降低并聚類在一起。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)該通路缺失突變體影響了甘油脂類代謝、戊糖和葡萄糖醛酸酯轉(zhuǎn)變和半乳糖代謝。OPLS-DA分析發(fā)現(xiàn)有性生殖與野生型PH-1無(wú)明顯差異的突變體和不產(chǎn)生子囊殼的突變體之間有著明顯的區(qū)分,表明這兩個(gè)組別的突變體間有著相對(duì)明顯的代謝譜差異,進(jìn)一步鑒定出14個(gè)VIP值大于1的代謝產(chǎn)物對(duì)這兩組差異貢獻(xiàn)最大。對(duì)12個(gè)無(wú)明顯表型的基因突變體分析發(fā)現(xiàn)三個(gè)在代謝譜上有明顯的變化,此三個(gè)突變體主要影響碳代謝過(guò)程。準(zhǔn)確定義這三個(gè)基因在代謝中的功能需要更多的數(shù)據(jù)支持。單端孢霉烯毒素合成基因(TRI)的表達(dá)以及DON的產(chǎn)生受到環(huán)腺苷酸單磷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)通路和兩個(gè)通路特異轉(zhuǎn)錄因子(TRI6和TRI10)的調(diào)控。有趣的是,TRI6基因缺失突變體中cAMP通路多個(gè)組分表達(dá)下降,包括在禾谷鐮刀菌中還未報(bào)道的腺苷酸結(jié)合蛋白基因FgCAP1。在本研究中,我們證明了 FgCap1與腺苷酸環(huán)化酶(Fac1)互作,在缺失FgCAP1的時(shí)候細(xì)胞內(nèi)cAMP和PKA活性顯著下降。Fgcap1缺失突變體在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和致病力方面有著明顯的下降。同時(shí)突變體在DON產(chǎn)量和TRI基因的表達(dá)上也顯著下降,這一表型可以通過(guò)加入外源cAMP得到恢復(fù),這也表明FgCap1是依靠PKA調(diào)控DON合成。野生型在DON產(chǎn)毒誘導(dǎo)條件下cAMP和FgCAP1的表達(dá)升高但是在tri6突變體中則不然。此外,在FgCAP1的啟動(dòng)子區(qū)域含有一個(gè)可能的TRI6結(jié)合位點(diǎn),該位點(diǎn)對(duì)于DON合成有著重要的作用,但是這一位點(diǎn)對(duì)于菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和致病沒(méi)有影響。此外,FgCap1表現(xiàn)出和肌動(dòng)蛋白的定位相似位于菌絲生長(zhǎng)頂端。磷酸化蛋白組分析鑒定出FgCap1的磷酸化位點(diǎn)S353。FgCAP1的S353點(diǎn)突變獲得的突變體S353A在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和DON產(chǎn)生方面都沒(méi)有影響。但是,FgCAP1S353A等位基因的表達(dá)不能夠互補(bǔ)Fgcap1突變體在植物侵染中的作用,顯示出S353位點(diǎn)在致病力方面的重要作用�？傮w而言,我們的結(jié)果表明FgCAP1通過(guò)cAMP信號(hào)通路調(diào)節(jié)DON產(chǎn)生同時(shí)受到TRI6的反饋調(diào)節(jié)。但是FgCap1的磷酸化位點(diǎn)S353可能與cAMP-PKA通路無(wú)關(guān)只影響對(duì)植物的侵染。
[Abstract]:In this study , we found that the deletion mutant of FgMgv1 pathway and other 11 gene deletion mutants showed significant changes in metabolic products . In this study , we found that the deletion mutant of FgMgv1 pathway had a significant effect on the changes of metabolic products in Saccharomyces cerevisiae .
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S435.121.45

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 侯瑞;禾谷鐮刀菌AREA基因的功能研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2121055