本文關鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征高致病性毒株的致弱評價與相關分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國農業(yè)大學》 2015年

豬繁殖與呼吸綜合征高致病性毒株的致弱評價與相關分子機制研究

劉燦  

【摘要】：為了有效防控PRRS以促進生豬養(yǎng)殖行業(yè)的健康發(fā)展,本研究從弱毒疫苗參考株的科學評價、PRRSV的體外致弱分子機制的探尋以及華北、華中與華南地區(qū)流行PRRSV的分子特征與遺傳進化規(guī)律的調查等三個方向進行了有益探索。 首先,為了科學評價高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV) BJ株與GD株的傳代致弱毒株BJ-F80、BJ-F150、GD-F80與GDr180的安全性與免疫保護性,對接種不同毒株的仔豬從臨床表現(xiàn)、增重、病毒血癥與抗體水平進行了細致觀察,在接種28天后使用強毒株進行了攻毒保護試驗,在進行臨床觀察的同時,定期剖殺各組仔豬觀察大體病變,采取肺臟組織制備病理切片以觀察顯微病理損傷,應用免疫組化染色技術與熒光定量PCR技術分別對肺臟與血清中的PRRSV進行半定量與定量檢測,應用ELISA方法檢測了不同時間段各組動物血清中抗體水平。結果顯示BJ-F80、GD-F80與BJ-F150接種仔豬仍存在不同程度的病理損傷,而GDr180接種仔豬與對照組仔豬均無明顯病理變化,免疫組化與熒光定量PCR檢測結果顯示BJ-F80、GD-F80與BJ-F150的體內增殖速度明顯快于GDr180,抗體檢測結果顯示GDr180在接種后28天以及攻毒后均能提供仔豬更高抗體水平且具備良好的保護效果。綜上所述,BJ-F80、GD-F80與BJ-F150的致弱效果并不理想,而GDr180的安全性與免疫保護性達到了理想水平。 其次,為了探索PRRSV的體外致弱分子機制,分別比對分析了PRRSV BJ株傳代至BJ-F150株的7個中間代次毒株與GD株傳代至GDr180株的8個中間代次毒株的全基因序列與各蛋白氨基酸序列,發(fā)現(xiàn)BJ株傳代過程中共出現(xiàn)了68個核苷酸變異,造成了37個氨基酸變異,GD株傳代過程中共出現(xiàn)了50個核苷酸變異,造成了33個氨基酸變異,但兩者的不同點在于BJ株的若干位點出現(xiàn)了反復變異的情況,而GD株的變異位點則顯得更為穩(wěn)定,推測基因變異之后的穩(wěn)定性與弱毒株的毒力返強風險存在較大關聯(lián)。然后,將BJ/BJ-F150、GD/GDr180與另外四對強毒株／疫苗株(VR-2332/RespPRRS MLV、JA142/Ingelvac ATP、CH-la/CH-lR與JXAl/JXAl-R)的全基因序列與各蛋白氨基酸序列進行了比對分析,總結歸納出強毒株向弱毒株演化的各個蛋白中的共同變異氨基酸位點共74個,推測其與PRRSV的致病性相關。此外,將上述6對強毒株／致弱株與1996-2014年間中國各地流行PRRSV進行遺傳進化分析,發(fā)現(xiàn)PRRSV的兩個主要分支都與弱毒疫苗株的同源性較高,推測PRRSV在中國的廣泛流行與高頻率演化與弱毒疫苗的不合理使用有關,應在臨床應用中引起重視。 最后,從華北、華中與華南地區(qū)的臨床病料中分離到3株PRRSV,分別為GD-2011株、HEB-2013株與HUN-2014株,這三株PRRSV均屬于北美型中的HP-PRRSV,具有NSP2中的1+29個氨基酸缺失這一基因標志,此外,GD-2011株的GP5中存在1個氨基酸插入為首次報道。將這三株新分離PRRSV與其各屬地區(qū)的歷年分離毒株進行全基因序列與氨基酸序列比對分析以及遺傳演化分析,結果表明華北與華南地區(qū)流行PRRSV的分子多樣性更為復雜,僅北美型毒株即可分為至少3-4個亞型,說明PRRSV在這些地區(qū)經(jīng)歷著高頻率的變異,而對變異位點的分析提示我們其與弱毒疫苗的過度使用可能相關,因此需引起我們對于合理使用疫苗的重視。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：中國農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

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本文編號：210303