本文關(guān)鍵詞：豬PML的抗病毒作用及偽狂犬病毒對其產(chǎn)生的拮抗機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

豬PML的抗病毒作用及偽狂犬病毒對其產(chǎn)生的拮抗機(jī)制研究

許傲天  

【摘要】：PML核體(PML-NBs)是哺乳動物細(xì)胞中普遍存在一種動態(tài)的亞細(xì)胞核結(jié)構(gòu)。PML是PML核體的主要組織者,參與多種生物學(xué)過程。PML核體具有天然的抗病毒作用,與病毒感染和致病性有著密切的關(guān)系。目前PML抗病毒的機(jī)制還不十分清楚,對PML生物學(xué)功能的研究也主要集中在人和小鼠,對其他動物PML功能研究很少,開展豬PML抗病毒作用的研究有助于深入理解PML抗病毒的機(jī)制。 為開展豬PML抗病毒作用研究,對豬PML基因進(jìn)行了克隆和特異性抗體制備；對豬PML核體的亞細(xì)胞定位、形態(tài)結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能進(jìn)行分析；并以豬偽狂犬病毒(PRV)感染為模型,探討了豬PML核體和病毒之間的相互作朋。 PRV感染可以干擾豬PML-NBs的形成,為了進(jìn)一步研究病毒哪些基因參與到這一過程,建立了一種基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建基因缺失PRV的方法,將PRV基因組和CRISPR/Cas9系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞,拯救出來的病毒幾乎100%是被CRISPR/Cas9編輯過的基因缺失病毒；還建立了一種不依賴同源重組機(jī)制向PRV基因組插入外源基因的方法,該方法僅需要構(gòu)建一個包含打靶序列和外源基因表達(dá)盒的供體質(zhì)粒,將供體質(zhì)粒、病毒基因組和CRISPR/Cas9系統(tǒng)共轉(zhuǎn)PK15細(xì)胞,拯救出來外源基因插入的重組病毒效率高達(dá)50%。穩(wěn)定表達(dá)豬PMLⅡ可以抑制野生型PRV增殖,而且對EP0缺失毒株的抑制能力更強(qiáng),顯示豬PML具有抗病毒作用。利用TALEN技術(shù)構(gòu)建豬PML敲除的PK15細(xì)胞系(SPML-/-PK15),在SPML+/+PK15細(xì)胞系上,豬IFNa對野生型及EP0缺失病毒均有較強(qiáng)抑制作用,且對EP0缺失病毒抑制作用強(qiáng)于野生型病毒;但在SPML-/-PK15細(xì)胞系上,豬IFNa對野生型及EP0缺失PRV抑制作用減弱,同時豬IFNa對兩種病毒抑制能力的差異減小,說明豬內(nèi)源性PML對豬IFNa介導(dǎo)抗病毒作用至關(guān)重要,提示豬PML參與到豬IFNα誘導(dǎo)的固有免疫中。在PRV感染早期,豬PML-NBs的形態(tài)結(jié)構(gòu)就遭到破壞,病毒早期蛋白EP0可以干擾豬內(nèi)源性和穩(wěn)定表達(dá)豬PMLⅡ形成的PML-NBs,而EP0缺失毒株干擾豬PML-NBs的能力顯著下降。野生型PRV感染引起穩(wěn)定表達(dá)的豬PMLⅡ降解,降解過程依賴蛋白酶體途徑,EP0缺失病毒對豬PML降解能力顯著降低,表明在感染早期對豬PML-NBs的破壞主要是由EP0介導(dǎo)的。 綜上所述,本文克隆、鑒定豬PML;證明了豬PML本身具有抗病毒作用以及參與IFNa介導(dǎo)的抗病毒防御；并初步探討PRV干擾豬PML-NBs形成及逃逸豬PML抗病毒的機(jī)制；建立了一種基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建基因缺失PRV的方法,為深入了解豬PML抗病毒及PRV逃逸宿主防御的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28
【目錄】：

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ZHANG LinLin;ZHOU Qi;;CRISPR/Cas technology:a revolutionary approach for genome engineering[J];Science China(Life Sciences);2014年06期

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 靳玉珠;王世山;向華;王曉虎;;TALEN靶向基因修飾新技術(shù)研究進(jìn)展[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年19期

2 Chi Man Tsang;Wen Deng;Yim Ling Yip;Mu-Sheng Zeng;Kwok Wai Lo;Sai Wah Tsao;;Epstein-Barr virus infection and persistence in nasopharyngeal epithelial cells[J];Chinese Journal of Cancer;2014年11期

3 Lili Li;Yuan Zhang;Bing-Bing Guo;Francis K.L.Chan;Qian Tao;;Oncogenic induction of cellular high CpG methylation by Epstein-Barr Barr virus in malignant epithelial cells[J];Chinese Journal of Cancer;2014年12期

4 阮婕;王然;李一忱;沈琦;薛京倫;陳金中;;D-box附近泛素化位點突變對Cdc20介導(dǎo)的Sp100蛋白降解的影響[J];復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版);2015年01期

5 馬春虎;許倩;沈榮飛;肖鑠洋;李冰清;任祎;;TRIM28對肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞生長的影響[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年01期

6 楊潤功;左坦坦;朱加亮;張宇鵬;任剛;侯樹勛;;低溫等離子射頻消融技術(shù)對豬感染創(chuàng)面的在體殺菌作用[J];中國骨與關(guān)節(jié)雜志;2013年12期

7 戴瑞卿;林麗鵬;蘇小玉;關(guān)雄;黃天培;;細(xì)菌生物被膜對細(xì)菌-昆蟲共生關(guān)系和昆蟲致病性的影響[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2015年04期

8 LI Jie;XU Ying;JIAO HuiKe;WANG Wei;MEI Zhu;CHEN GuoQiang;;Sumoylation of hypoxia inducible factor-1α and its significance in cancer[J];Science China(Life Sciences);2014年07期

9 張洪紅;劉鋒;申景嶺;;Daxx在細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2014年05期

10 梅潔;桂建芳;;魚類性別異形和性別決定的遺傳基礎(chǔ)及其生物技術(shù)操控[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2014年12期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 DongPing Rao;XueHui Meng;Qiu Zhang;MeiQin Fu;LiChao feng;Yue Liu;Feng Chen;SuMei Cao;MingHuang Hong;Qing Liu;;A cost effectiveness analysis for nasopharyngeal carcinoma screening[A];2012廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉東伯;塞來昔布抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 姚琪;蛋白質(zhì)翻譯后修飾及不同修飾間相互調(diào)控研究[D];武漢大學(xué);2011年

3 李公美;吉林白鵝α/γIFN原核表達(dá)、抗病毒活性及其核酸疫苗免疫佐劑作用的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 王建飛;惡性腫瘤的靶向治療及預(yù)后相關(guān)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 李德生;大熊貓源H1N1流感病毒的分離鑒定、全基因組序列分析、感染性克隆構(gòu)建及疫苗研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 王卓;REGγ及其調(diào)控蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制初探[D];華東師范大學(xué);2013年

7 王蓉;豬繁殖與呼吸綜合征病毒對Ⅰ型干擾素下游信號通路影響的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

8 紀(jì)光臻;豬誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞及端粒重編程研究[D];南開大學(xué);2013年

9 尹詩白;基于模糊集合理論的顆粒目標(biāo)分割和識別[D];長安大學(xué);2013年

10 李夏瑩;口蹄疫病毒VP1蛋白抑制細(xì)胞Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)理[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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1 喬紅秀;病毒及質(zhì)粒DNA刺激后小鼠肌細(xì)胞內(nèi)IFN-β與PD-L1的表達(dá)情況[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 師俊莉;VSD促進(jìn)豬腹部爆炸傷創(chuàng)面愈合的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

3 喬飛鴻;卡介菌多糖核酸體外抗病毒活性試驗研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 李玲;DAXX亞細(xì)胞定位對ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的影響[D];南華大學(xué);2013年

5 李耀林;Daxx-C抗體的制備及其在HPV16陽性宮頸癌細(xì)胞中的初步應(yīng)用[D];南華大學(xué);2013年

6 賴啟南;草魚IRF-2、IRF-3基因的克隆、鑒定及IRF-1的功能分析[D];南昌大學(xué);2013年

7 汪坤福;Δ4/Δ15脂肪酸去飽和酶在哺乳動物細(xì)胞的表達(dá)及功能研究[D];佳木斯大學(xué);2013年

8 張青占;變異豬偽狂犬病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

9 王飛;GGAT1基因敲除豬的制備及其功能驗證[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 母治平;豬體內(nèi)食物源性植物miRNAs的鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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1 嚴(yán)鵬科;汪江波;張慧;段才聞;李世煌;;巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞適配子PMl的特異性[A];共鑄醫(yī)藥學(xué)術(shù)新文明——2012年廣東省藥師周大會論文集[C];2012年

2 夏梅;張建瓊;沈宇清;許聯(lián)紅;繆鳳琴;謝維;;PML與HLA-I類分子在肝癌中協(xié)同表達(dá)的初步研究[A];江蘇省遺傳學(xué)會第七屆代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

3 張洪欣;呂英華;黃永明;;PML在三維柱坐標(biāo)系下的應(yīng)用及近場-遠(yuǎn)場轉(zhuǎn)換[A];第十二屆全國電磁兼容學(xué)術(shù)會議論文集[C];2002年

4 陳丙康;高本慶;;時變媒質(zhì)下FDTD的一種PML吸收邊界條件(ABC)[A];第17屆全國電磁兼容學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊麗莉;[N];中國有色金屬報;2013年

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1 許傲天;豬PML的抗病毒作用及偽狂犬病毒對其產(chǎn)生的拮抗機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 錢微微;一類帶PML聲波導(dǎo)中的共軛特征函數(shù)構(gòu)造及其應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2006年

2 孫運艷;三氧化二砷對Hut-78細(xì)胞株P(guān)ML、p53及survivin基因表達(dá)的影響及相關(guān)關(guān)系的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

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