本文選題：桃褐腐病 + 桃炭疽病��； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：Monilinia spp.和Colletotrichum spp.是危害桃樹健康生長的重要病原物,分別能引起桃褐腐病和桃炭疽病。本研究以這兩類桃樹主要病原菌為研究材料,探尋了其對(duì)包括DMI類殺菌劑在內(nèi)的幾種主要單作用位點(diǎn)殺菌劑的抗性現(xiàn)狀和抗性機(jī)理。在我國桃褐腐病菌優(yōu)勢(shì)種Monilinia fructicola中,系統(tǒng)調(diào)查了其對(duì)4種主要?dú)⒕鷦┑拿舾谢�及其對(duì)DMI類殺菌劑抗性產(chǎn)生的分子機(jī)理。并針對(duì)其抗性產(chǎn)生機(jī)理,設(shè)計(jì)了一款利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)方法進(jìn)行田間抗性菌株檢測(cè)的試劑盒。在Colletotrichum spp.中,明確了造成美國東南部桃炭疽病的病原菌,并調(diào)查了桃炭疽病菌對(duì)DMI類殺菌劑的敏感性,同時(shí)對(duì)桃炭疽病菌中產(chǎn)生DMI抗性的分子機(jī)理進(jìn)行了探尋。研究結(jié)果為綜合防治桃褐腐病和桃炭疽病提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。所獲得具體研究結(jié)果如下:(1)采集了80株來自我國5個(gè)主要產(chǎn)桃省份(市)的商用果園中的桃褐腐菌株,并測(cè)定了它們對(duì)MBC類殺菌劑多菌靈、QoI類嘧菌酯、DMI類戊唑醇和SDHI類啶酰菌胺的敏感性。其中,采自云南省的16株菌株中,15株對(duì)多菌靈產(chǎn)生了抗性。這些抗性菌株的抗性水平穩(wěn)定,不表現(xiàn)出適合度下降的現(xiàn)象,并且和乙霉威產(chǎn)生負(fù)交互抗性。離體接種試驗(yàn)表明,推薦濃度多菌靈無法有效控制抗性菌株在桃上產(chǎn)生的危害。分子水平研究表明,抗性的產(chǎn)生是由β-微管蛋白基因(TUB2)的E198A突變所致。采自福建的10株菌株中,3株具有對(duì)嘧菌酯的低等抗性。和多菌靈抗性菌株不同,這些菌株的抗性不穩(wěn)定,且伴隨著適合度下降的現(xiàn)象,在靶標(biāo)基因細(xì)胞色素b(Cyt b)上,未發(fā)現(xiàn)任何點(diǎn)突變。嘧菌酯敏感菌株的抑制中濃度(EC50)為0.02到1.94μg/mL,平均值為0.54μg/m L。所有測(cè)定菌株對(duì)戊唑醇均敏感,平均EC50為0.03μg/m L。啶酰菌胺對(duì)菌株的EC50在0.01到3.85μg/mL之間,平均值為1.02μg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)中國大部分地區(qū)的桃褐腐菌株而言,MBC類、QoI類、DMI類和SDHI類殺菌劑都能起到較好的防效,但MBC類殺菌劑的抗性菌株已經(jīng)出現(xiàn)。(2)前期已明確65bp的Mona元件和桃褐腐病菌DMI抗性產(chǎn)生相關(guān),本研究通過遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn),明確了Mona具有啟動(dòng)子活性,并通過一系列刪減轉(zhuǎn)化子,將Mona的活性區(qū)域進(jìn)一步縮小為20bp。(3)基于Mona元件及其側(cè)翼序列,開發(fā)了一款利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP),快速檢測(cè)田間DMI抗性桃褐腐菌株的試劑盒。利用此方法,可以特異地檢測(cè)出MfCYP51上游的Mona插入,在75min內(nèi),通過加入SYBR Green I染料,觀測(cè)結(jié)果。試驗(yàn)中利用該方法,成功檢測(cè)了51株桃褐腐菌株樣本對(duì)DMI殺菌劑的敏感性。該方法特異性強(qiáng),�；愿�,不會(huì)誤檢出其它6種桃樹上常見病原菌。同時(shí),該方法靈敏度高,可以檢測(cè)到10 fg的DNA模板,比普通PCR方法靈敏100倍。試驗(yàn)還開發(fā)了直接以菌絲為模板,檢測(cè)其抗性是否產(chǎn)生的方法。由于LAMP方法具備結(jié)果可靠、操作簡便、不需實(shí)驗(yàn)室昂貴儀器等特點(diǎn),適于DMI抗性菌株的田間檢測(cè)。(4)就桃炭疽病菌而言,試驗(yàn)從美國南卡羅來那州和佐治亞州的商用桃園中采集了Colletotrichum acutatum復(fù)合種菌株,整合分析其ITS、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(G3PDH)、β-微管蛋白(TUB2)基因序列,將這些復(fù)合種菌株細(xì)分成了Colletotrichum nymphaeae和Colletotrichum fioriniae 2個(gè)種。接著調(diào)查了這2個(gè)種,及另外3個(gè)采集自美國東南部的桃炭疽種(Colletotrichum fructicola,Colletotrichum siamense和Colletotrichum truncatum),對(duì)包括苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、葉菌唑、粉唑醇和腈苯唑在內(nèi)6種DMI類殺菌劑的敏感性。結(jié)果表明,C.truncatum對(duì)戊唑醇、葉菌唑、粉唑醇和腈苯唑產(chǎn)生了抗性,C.nymphaeae對(duì)粉唑醇和腈苯唑產(chǎn)生了抗性。C.fructicola和C.siamense對(duì)所有的6種DMI類殺菌劑都敏感(EC50值分別為0.2到13.1μg/mL)。C.fioriniae中的一個(gè)分支(命名為C.fioriniae亞群2)整體上比另一個(gè)分支(命名為C.fioriniae亞群1)對(duì)以上殺菌劑較為不敏感,其EC50值分別為0.5到16.2μg/m L,及0.03到2.1μg/mL。對(duì)所有測(cè)定的5個(gè)種而言,苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑都具有最好的防效(EC50值為0.2-2.7μg/m L),戊唑醇和葉菌唑?qū)Τ薈.truncatum以外的其它種有較好的防效。試驗(yàn)表明,苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑應(yīng)作為防治桃炭疽病的首選DMI類殺菌劑。(5)首次克隆了DMI類殺菌劑天然抗性種C.truncatum的CYP51A和CYP51B基因,并發(fā)現(xiàn)該抗性的產(chǎn)生可能是由CYP51B上H373N、M376L和S511T,或者CYP51A上L208Y、H238R、S302A、I366L點(diǎn)突變所造成。
[Abstract]:In this paper , the resistance of strains of peach brown rot and peach was studied . ( 3 ) Based on the Mona element and its flanking sequences , a kit using loop - mediated isothermal amplification ( LAMP ) was developed . The results showed that C . truncatum could be used as the first kind of bactericide for the control of E . truncatum . The EC50 values were 0.2 - 2.7 渭g / mL , 0.03 - 2.1 渭g / mL .
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S436.621

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1968115