熱應激對小鼠卵巢卵泡閉鎖和顆粒細胞凋亡的影響及其機理研究
發(fā)布時間:2018-04-06 22:17
本文選題:熱應激 切入點:小鼠 出處:《中國農業(yè)大學》2016年博士論文
【摘要】:夏季雌性哺乳動物的繁殖性能普遍降低,這與熱應激改變卵巢卵泡發(fā)育和顆粒細胞功能有關。熱應激可分為急性和慢性兩種類型。盡管有研究報道熱應激損傷卵巢功能,但慢性熱應激影響卵泡閉鎖和顆粒細胞凋亡的研究未見報道。本研究以小鼠為模型,分別開展以下三部分實驗:第一部分:探討急性熱應激對中小卵泡發(fā)育的影響。實驗選擇20只7周齡的雌性CD-1小鼠,隨機分成2組。實驗開始前對小鼠進行同期超排處理,實驗期間,實驗組小鼠每天置于37℃,相對濕度50%~50%的生化培養(yǎng)箱中熱應激處理10h,其余時間和對照組一樣,置于25℃的鼠房中飼養(yǎng),熱應激處理持續(xù)6天。期間,每天檢測小鼠的肛溫和體重,第6天熱應激結束后對小鼠進行超排處理,收集卵母細胞和卵巢,觀察超排卵數(shù)及卵泡閉鎖情況。研究結果表明:急性熱應激可提高小鼠肛溫和超排卵母細胞數(shù)量,并降低體重。第二部分:探討慢性熱應激誘發(fā)卵泡閉鎖的機理。將48只體況相似的3周齡CD~1雌鼠隨機分成兩組,實驗組小鼠每天置于42℃,相對濕度50%~60%的生化培養(yǎng)箱中熱應激處理3h,其余時間和對照組小鼠飼養(yǎng)條件一致,記錄每天的采食量,實驗期為4周。分別在第7、14、21和28天熱應激結束后稱重,之后兩組各隨機選取6只小鼠,處死后收集血漿,測定雌二醇水平。同時摘取卵巢,一側卵巢用于分析卵泡閉鎖和顆粒細胞凋亡情況,另一側用于檢測熱應激相關蛋白表達水平。研究結果表明:慢性熱應激降低小鼠采食量、體重和血清雌二醇水平,增加卵巢組織熱休克蛋白HSP70的表達,持續(xù)21天的慢性熱應激增加有腔卵泡的閉鎖率及顆粒細胞凋亡水平。第三部分:探討熱應激影響卵泡顆粒細胞凋亡的機理。(1)分離小鼠有腔卵泡,37℃或42℃培養(yǎng)24h,之后收集卵泡檢測HSP70和芳香化酶蛋白的表達水平。(2)分離小鼠卵巢顆粒細胞,37℃或42℃無血清培養(yǎng)12h或24h,之后檢測細胞培養(yǎng)液中雌二醇水平和顆粒細胞HSP70、芳香化酶和Bim蛋白的表達水平。(3)分離小鼠卵巢,37℃或41℃處理2 h,分離顆粒細胞,一部分用于檢測HSP70、Bim、斷裂caspase-3和caspase-3蛋白的表達,另一部分進行有血清(24h)和無血清(6h)的培養(yǎng),觀察顆粒細胞表型變化,收集細胞分析相關蛋白表達水平。此外,有血清組還進行臺盼藍、Hochest和TUNEL分析。(4)分離小鼠卵巢,37℃或41℃處理2h,分離原始卵泡和生長卵泡繼續(xù)培養(yǎng)6h,然后收集卵泡分析HSP70的表達。研究結果表明:有腔卵泡熱應激誘導HSP70表達并抑制芳香化酶表達;顆粒細胞熱應激誘導HSP70表達,顯著提高芳香化酶水平,降低培養(yǎng)液中雌二醇含量;卵巢熱應激誘導分離培養(yǎng)顆粒細胞HSP70表達,增加有血清組顆粒細胞的凋亡及HSP70、Bim和斷裂Caspase-3蛋白的表達;卵巢熱應激后,原始卵泡HSP70表達水平顯著高于生長卵泡。綜上結果,可得如下結論:(1)37℃熱應激6天可增加小鼠超排卵母細胞數(shù)量,促進中小卵泡發(fā)育;(2)42℃熱應激21天可抑制小鼠顆粒細胞芳香化酶表達,降低血清雌二醇水平,提高有腔卵泡閉鎖率和顆粒細胞凋亡水平。(3)Bim和caspase-3參與了熱應激誘導的小鼠顆粒細胞凋亡。
[Abstract]:The effects of heat stress on the development of ovarian follicle and granular cell were studied . ( 3 ) The expression of HSP70 , Bim , cleaved caspase - 3 and caspase - 3 protein were isolated from mouse ovary , 37 鈩,
本文編號:1719150
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