發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 16:30

  本文選題：EIAV　切入點(diǎn)：進(jìn)化　出處：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：馬傳染性貧血病毒(Equine Infectious Anemia Virus,EIAV)與人獲得性免疫缺陷病毒(HIV-1)同屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬,是開展慢病毒致病和免疫機(jī)制研究的重要?jiǎng)游锊《灸Ｐ汀Ｂ《疽l(fā)的疾病,嚴(yán)重威脅動(dòng)物和人類健康,其中以HIV-1感染人引發(fā)的艾滋病最為嚴(yán)重和受到關(guān)注。疫苗是防控傳染病的重要手段,但慢病毒自身的抗原高度變異等特點(diǎn),使其疫苗研究舉步維艱。特別對(duì)于HIV-1疫苗的研究,盡管世界各國已投入巨大人力、物力,但仍未取得關(guān)鍵性突破。而在EIAV疫苗研究方面,二十世紀(jì)70年代,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所的科研人員,通過馬、驢體及體外細(xì)胞(驢白細(xì)胞、驢胎皮膚細(xì)胞)傳代將EIAV強(qiáng)毒株馴化,成功獲得EIAV弱毒株。實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)地應(yīng)用證明,該弱毒株免疫馬屬動(dòng)物后可誘導(dǎo)產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫保護(hù)力。以該弱毒株作為疫苗在中國進(jìn)行的大范圍馬屬動(dòng)物免疫接種,成功控制了EIA在中國的流行。而闡明該疫苗毒力弱化和誘導(dǎo)免疫保護(hù)的機(jī)制,有可能找到慢病毒誘導(dǎo)免疫保護(hù)的關(guān)鍵因素,為HIV疫苗研制提供參考。在探討EIAV疫苗弱化和誘導(dǎo)免疫保護(hù)機(jī)制的過程中,一個(gè)重要的科學(xué)問題是,為何通過異種動(dòng)物或者體外細(xì)胞傳代會(huì)導(dǎo)致病毒致弱?長(zhǎng)期以來科學(xué)界并未對(duì)該現(xiàn)象給出明確的機(jī)制闡述。已有研究表明,病毒侵入宿主會(huì)誘發(fā)宿主細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的先天性免疫反應(yīng)和繼發(fā)性免疫反應(yīng)。同時(shí),在宿主細(xì)胞內(nèi)存在著許多天然免疫因子,當(dāng)病毒入侵時(shí)它們可以迅速反應(yīng),直接或間接作用于病毒以抑制病毒的復(fù)制和傳播,進(jìn)而保護(hù)宿主抵御病毒感染。目前,研究比較廣泛的宿主天然免疫限制因子有APOBEC3家族、TRIM家族、Tetherin/BST2、SAMHD1、MOV10等。這些限制因子可在病毒復(fù)制過程中的各階段通過各種不同機(jī)制直接或間接作用于病毒,抑制病毒的復(fù)制和傳播。EIAV弱毒疫苗的毒力弱化,主要發(fā)生在體外細(xì)胞的傳代培養(yǎng)過程中。由于該過程缺少宿主特異性免疫應(yīng)答的作用,推測(cè)宿主天然免疫應(yīng)答特別是細(xì)胞天然免疫限制因子可能在病毒毒力減弱過程中發(fā)揮重要作用。為驗(yàn)證上述假設(shè),本研究選擇Tetherin和SAMHD1兩種限制因子,通過評(píng)價(jià)它們與EIAV的相互作用,尋找這兩種分子在EIAV致弱過程中的作用。本研究首先通過序列分析、蛋白結(jié)構(gòu)分析、細(xì)胞定位分析、蛋白表達(dá)分析、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、Western Blotting實(shí)驗(yàn)技術(shù)等方法比較了馬、驢Tetherin的基本生物學(xué)功能及抗病毒能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,馬Tetherin與驢Tetherin的氨基酸序列、分子拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、細(xì)胞定位及高級(jí)分子結(jié)構(gòu)都非常相似,但二者存在個(gè)別氨基酸位點(diǎn)的變異,且這些氨基酸變異導(dǎo)致驢Tetherin限制EIAV病毒出芽的能力稍強(qiáng)于馬Tetherin。進(jìn)而又通過蛋白-蛋白相互作用等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),評(píng)價(jià)了驢Tetherin與不同進(jìn)化程度的EIAV毒株的相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,驢Tetherin在限制不同進(jìn)化程度的EIAV毒株出芽的能力存在差異,病毒毒力越弱,Tetherin的限制作用越強(qiáng);EIAV強(qiáng)弱毒的Env基因具有一定的差異,但其均可拮抗驢Tetherin的限制作用,這種拮抗作用隨病毒的致弱而變?nèi)�。在此基礎(chǔ)上,本研究對(duì)SAMHD1與EIAV的相互作用進(jìn)行了研究。先將人、馬SAMHD1進(jìn)行對(duì)比分析,并通過建立能穩(wěn)定表達(dá)馬SAMHD1基因的U937細(xì)胞系作為感染模型,然后將三質(zhì)粒系統(tǒng)包裝的假病毒(HIV-1、SIV、EIAV)感染上述構(gòu)建成功的穩(wěn)定表達(dá)馬SAMHD1基因的U937細(xì)胞系,以評(píng)價(jià)馬SAMHD1的抗病毒能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,馬SAMHD1具有與人SAMHD1相似的氨基酸序列及結(jié)構(gòu),且具有廣譜抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的作用,而HD結(jié)構(gòu)域是其發(fā)揮抗病毒功能的主要功能域。最后,通過蛋白-蛋白相互作用等實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證了EIAV與馬SAMHD1的相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,EIAV可通過其自身編碼的Rev蛋白拮抗馬SAMHD1。且不同毒株的Rev拮抗馬SAMHD1的能力不同,即EIAV-Rev-LN拮抗馬SAMHD1的能力強(qiáng)于其他EIAV株Rev,提示EIAV-Rev拮抗馬SAMHD1的作用具有種屬差異,但EIAV-Rev拮抗馬SAMHD1的具體機(jī)制尚不清楚。本研究以中國EIAV弱毒系統(tǒng)為研究模型,首次對(duì)異體/頓感宿主感染傳代致弱病原的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行研究,從宿主天然免疫限制因子與病原相互作用角度,探討病原毒力弱化的原因。研究結(jié)果確證了我們提出的實(shí)驗(yàn)假設(shè)的科學(xué)性,其在深入挖掘天然免疫限制因子抗逆轉(zhuǎn)錄病毒作用機(jī)制和拓展其作用意義的基礎(chǔ)上,有助于闡明慢病毒的致病和免疫機(jī)制,促進(jìn)慢病毒免疫防治領(lǐng)域相關(guān)研究的開展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 韓凌霞;尹嵐嵐;李亞明;牛成明;高鵬飛;曲連東;;EIAV基因轉(zhuǎn)移載體包裝盒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年03期

2 ;Evolutionary Patterns of the Proviral gp90 V3 to V5 Regions of Equine Infectious Anemia Virus Associated with Immune Selection in Progressors and Nonprogressors[J];Agricultural Sciences in China;2011年01期

3 ;The Comparison of Genetic Variation in the Envelope Protein Between Various Immunodeficiency Viruses and Equine Infectious Anemia Virus[J];Virologica Sinica;2012年04期

4 尹嵐嵐;韓凌霞;李亞明;司昌德;于海波;徐佳;曲連東;冉多良;;EIAV基因轉(zhuǎn)移載體的優(yōu)化[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2008年03期

5 ;A conserved structural motif shared by EIAV gp90 and HIV gp120[J];Chinese Science Bulletin;2005年20期

6 溫建新;童光志;王金寶;仇華吉;涂亞斌;;EIAV標(biāo)記感染性克隆分子的構(gòu)建[J];萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年04期

7 童光志;;動(dòng)物慢病毒的研究進(jìn)展及尚待解決的問題[J];中國畜禽傳染病;1992年05期

8 王柳 ,楊志彪 ,王玫 ,童光志 ,仇華吉 ,劉紅全 ,孔憲剛;Proviral genomic sequence analysis of Chinese donkey leukocyte attenuated equine infectious anemia virus vaccine and its parental virus strain Liaoning[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2002年01期

9 王盈,魏麗麗,相文華,沈榮顯;EIAV與HIV分子生物學(xué)相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國生物工程雜志;2004年05期

10 童驍;沈_";梁華;孟慶來;鐘衛(wèi)洲;馬燕;魏麗麗;相文華;沈榮顯;徐建青;張曉燕;邵一鳴;;利用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CTL活性方法在EIAV免疫學(xué)中的應(yīng)用[J];中國病毒學(xué);2005年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 涂亞斌;王柳;劉紅全;仇華吉;童光志;;馬傳染性貧血病毒(EIAV)嵌合感染性分子克隆的體外構(gòu)建[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

2 趙薇薇;王雪峰;馬建;呂曉玲;趙玉軍;周建華;;EIAV驢白細(xì)胞弱毒疫苗株減毒過程第61代毒前病毒全基因組DNA的克隆與分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

3 韓凌霞;李亞明;曲連東;司昌德;姜騫;劉家森;;EIAV基因轉(zhuǎn)移載體啟動(dòng)子的比較[A];中國生物工程學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)暨全國生物反應(yīng)器學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

4 韓凌霞;李亞明;曲連東;司昌德;姜騫;劉家森;;EIAV[hlx1]基因轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件的優(yōu)化[A];中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第七屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

5 胡守萍;尹訓(xùn)南;付德霞;吳東來;;檢測(cè)組織中馬傳染性貧血病毒基因原位雜交方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

6 溫建新;童光志;王金寶;仇華吉;涂亞斌;;EIAV標(biāo)記感染性克隆分子的構(gòu)建[A];第三屆第八次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨動(dòng)物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集[C];2006年

7 溫建新;童光志;王金寶;仇華吉;涂亞斌;;EIAV標(biāo)記感染性克隆分子的構(gòu)建[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

8 杜建森;喬文濤;劉新奇;;馬傳貧病毒(EIAV)免疫毒株FX2 gp45的表達(dá)純化及初步晶體學(xué)研究[A];泛環(huán)渤海地區(qū)九省市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)——2011年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2011年

9 王雪峰;楊彬;王帥;林躍智;呂曉玲;趙立平;王鳳龍;周建華;;EIAV強(qiáng)毒株和弱毒疫苗株gp90基因差異與免疫原性關(guān)系研究[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

10 馬建;姜成剛;林躍智;郭亮;沈榮顯;邵一鳴;周建華;;免疫抑制對(duì)EIAV弱毒疫苗株在免疫馬體內(nèi)載量的影響[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉強(qiáng);馬傳染性貧血病毒在馬基因組上整合特征的分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 尹鑫;馬天然免疫限制因子tetherin對(duì)馬傳染性貧血病毒的限制作用及病毒拮抗機(jī)制研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 姚秋成;Tetherin和SAMHD1與馬傳染性貧血病毒相互作用的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 杜建森;HIV-1 CRF07-BC gp41和EIAV gp45的結(jié)構(gòu)和功能研究[D];南開大學(xué);2014年

5 馬建;EIAV中國弱毒疫苗株的抗原多態(tài)性及超感染抵制現(xiàn)象在其誘導(dǎo)保護(hù)性免疫中的作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

6 馬建;EIAV疫苗株gp90基因的多克隆構(gòu)成和體內(nèi)進(jìn)化與免疫保護(hù)的相關(guān)性[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

7 王柳;馬傳染性貧血病驢白細(xì)胞弱毒及其親本馬強(qiáng)毒（L株）基因組序列比較分析以及弱毒感染性分子克隆的構(gòu)建[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2001年

8 周濤;馬傳染性貧血病病毒的基因變異與生物學(xué)特性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 全滟平;中國馬傳染性貧血病毒LTR啟動(dòng)子活性及EIAV_（FDD）弱毒株生物學(xué)特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

10 徐青元;重組牛干擾素τ抗馬傳染性貧血病毒效果的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 尹嵐嵐;偽型EIAV病毒的制備[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

2 劉建東;EIAV誘導(dǎo)的特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答檢測(cè)方法的建立[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 常浩;馬傳染性貧血病毒p26蛋白抗原表位鑒定與AC-ELISA方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 周家喜;馬傳染性貧血病毒驢白細(xì)胞弱毒及其親本驢強(qiáng)毒轉(zhuǎn)錄調(diào)控的比較研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2001年

5 劉紅全;馬傳染性貧血病病毒L株前病毒全基因組克隆及序列分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

6 溫建新;帶有HIS標(biāo)簽的重組EIAV感染性分子克隆的構(gòu)建[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 王珊珊;EIAV中國疫苗株誘導(dǎo)的體外超感染抵制以及TLR3在其中作用的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

8 楊非;馬傳染性貧血病毒受體選擇性剪接異構(gòu)體研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

9 楊彬;馬傳貧病毒弱毒株前病毒gp90基因在馬體內(nèi)的變異分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

10 高華;馬傳貧病毒中國株S2基因原核表達(dá)及多克隆抗體制備[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1580061