本文關(guān)鍵詞： 榆黃蘑 紅平菇 雙孢菇 α-半乳糖苷酶　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：α-半乳糖苷酶(a-galactosidase, EC 3.2.1.22)是一種催化移除低聚糖或多糖末端非還原性D-半乳糖的外切糖苷酶。α-半乳糖苷酶在食品和飼料工業(yè)、血型轉(zhuǎn)換、治療法布里氏病及器官移植等方面有著廣泛的應(yīng)用。尤其在飼料工業(yè)中,α-半乳糖苷酶是去除豆粕中α-半乳糖苷寡糖類抗?fàn)I養(yǎng)因子的有效方法。本研究從榆黃蘑、紅平菇、雙孢菇子實(shí)體中純化分離該酶,并對(duì)其理化性質(zhì)以及對(duì)棉籽糖家族的降解效果做了較深入全面的研究。以新鮮的榆黃蘑子實(shí)體為材料,結(jié)合使用陰陽離子交換層析和凝膠過濾層析,分離純化出—種酸性α-半乳糖苷酶PCGI,純化倍數(shù)為264倍,純化后酶的比活為7.92 U/mg。該酶是一種雙亞基蛋白,分子量為57 kDa,大亞基分子量為34 kDa,小亞基分子量為26 kDa。以pNPG為底物,該酶的最適pH和最適溫度分別為5.0和500℃。PCGI對(duì)酸性蛋白酶、中性蛋白酶、a-糜蛋白酶、胰蛋白酶具有顯著的抗性。SDS, Cd2+, Cu2+, Hg2+, Al3+, Fe3+和Ag+對(duì)其具有強(qiáng)烈的抑制作用。NBS顯著抑制該酶活性表明色氨酸殘基是酶活性中心的必需基團(tuán)。DEPC顯著提高該酶的活性表明組氨酸是該酶活性中心的必需基團(tuán)。底物多樣性和薄層色譜分析結(jié)果表明PCGI能夠高效并完全降解棉籽糖和水蘇糖。以新鮮的紅平菇子實(shí)體為材料,分離純化出一種酸性α-半乳糖苷酶PDGI,純化倍數(shù)為290倍,純化后酶的比活為52.18 U/mg。該酶是一種單亞基蛋白,分子量為60 kDa。以pNPG為底物,該酶的最適pH和最適溫度分別為5.0和500℃。該酶具有較寬的pH穩(wěn)定性和良好的溫度穩(wěn)定性,此外,該酶對(duì)酸性蛋白酶具有一定抗性。PDGI受K+,Cd2+,Cu2+,Hg2+,Al3+,Fe3+和Ag+的強(qiáng)烈抑制�；瘜W(xué)修飾劑DEPC.丁二酮(DIC)和TNBS對(duì)該酶具有顯著的激活作用,表明組氨酸殘基,賴氨酸殘基和精氨酸殘基參與了該酶的催化反應(yīng)。NBS和PCMB對(duì)酶活性具有強(qiáng)烈的抑制作用,表明色氨酸殘基和巰基是酶活性中心的必需基團(tuán)。底物多樣性和薄層色譜分析結(jié)果表明該酶能夠有效并完全降解棉籽糖和水蘇糖。以新鮮雙孢菇子實(shí)體為材料,分離純化出一種酸性α-半乳糖苷酶ABGI,純化倍數(shù)為3079倍,純化后的酶的比活為193.12 U/mg。該酶為單亞基蛋白,屬于GH27家族,分子量為43 kDa。以pNPG為底物,該酶的最適pH和最適溫度分別為4.0和60℃。該酶具有較寬范圍的pH穩(wěn)定性,并對(duì)中性蛋白酶和α-糜蛋白酶具有抗性。SDS, Cu2+, Hg2+, Fe3+和Ag+強(qiáng)烈抑制ABGI的活力�；瘜W(xué)修飾劑DEPC、DIC、TNBS對(duì)ABGI具有一定的激活作用,NBS、DTT(二硫蘇糖醇)和PCMB(對(duì)氯汞苯甲酸)則強(qiáng)烈抑制ABGI的活力。雙孢菇a-半乳糖苷酶能夠高效降解pNPG、棉籽糖、水蘇糖、瓜爾豆膠、槐樹豆膠和蜜二糖,降解率分別為100%、148.3%、41.5%、30.1%、20.0%和4.4%。以上結(jié)果表明,榆黃蘑、紅平菇、雙孢菇α-半乳糖苷酶具有良好的pH穩(wěn)定性和蛋白酶抗性,進(jìn)一步拓寬了優(yōu)良α-半乳糖苷酶的來源,同時(shí)對(duì)降解豆科植物中的容易引起脹氣和消化不良的棉籽糖家族具有良好的應(yīng)用前景。此外,還可以利用雙孢菇α-半乳糖苷酶有效降解瓜爾豆膠的活性,改良瓜爾豆膠的結(jié)構(gòu)和特性,提高其商業(yè)價(jià)值。
[Abstract]:偽 - Galactosidase ( EC 3.2 . 1.22 ) is a kind of enzyme that catalyzes the removal of 偽 - galactosidase from soybean meal . The enzyme is a kind of double subunit protein with molecular weight of 57 kDa , and the specific activity of purified enzyme is 7.92 U / mg . The enzyme is a kind of single subunit protein with molecular weight of 57 kDa , and the specific activity of purified enzyme is 5.0 and 500 鈩，

本文編號(hào)：1538463