發(fā)布時間：2018-02-16 11:15

  本文關鍵詞： 微膠囊 Saccharomyces boulardii Enterococcus faecium 肉雞 小鼠　出處：《東北農業(yè)大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：本研究采用乳化法發(fā)酵前包被布拉迪酵母菌(Saccharomyces boulardii)和糞腸球菌(Enterococcus faecium),利用500 L發(fā)酵罐中試生產微囊化益生菌,評價微囊化益生菌對體外不良環(huán)境的抵抗能力以及在動物體內的應用效果,為微囊化益生菌應用于畜牧業(yè)生產提供理論依據及應用參數。本研究共分為以下4個部分,具體如下:試驗一、微囊化益生菌的制備及體外特性評價采用乳化法制備S.boulardii和E.faecalis微膠囊,通過生物顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察微膠囊形態(tài)結構,激光粒度儀檢測微膠囊的粒徑分布;以菌粉為對照,在常溫貯存(5個月)、體外模擬胃腸液及高溫(110℃和130℃)的條件下,評價微囊化益生菌對不良環(huán)境的抵抗能力。試驗結果顯示,益生菌微膠囊大小均勻,成球性良好,菌體密度較大。S.boulardii和E.faecalis微膠囊的平均粒徑分別是549μm和590μm。與菌粉組相比,110℃和130℃高溫下,微囊化過程顯著提高益生菌的存活率,尤其是E.faecalis的耐受性,差異顯著(P0.05);p H 3.0,胃蛋白酶處理180 min后,S.boulardii和E.faecalis微膠囊存活率分別提高57.76%和46.73%(P0.05);pH 6.8,膽鹽0.3%,胰蛋白酶處理180 min后,S.boulardii和E.faecalis微膠囊的存活率分別提高26.89%和19.27%(P0.05);常溫儲存第5個月,S.boulardii和E.faecalis微膠囊的存活率分別提高34.63%和19.46%(P0.05)。說明益生菌經過微囊化后,可顯著提高其在高溫、胃腸液和常溫貯存條件下的存活率。試驗二、微囊化S.boulardii對肉雞生產性能、免疫功能及盲腸微生物菌群的影響試驗選取1日齡健康愛拔益加(AA)肉仔雞公雛700只,隨機分為7個處理組,每個處理組5個重復,每重復20只。各處理組分別為:基礎飼糧組(CON),抗生素組(ANT),低劑量菌粉組(P1),高劑量菌粉組(P2),空膠囊組(CAP),低劑量微膠囊組(CAPP1),高劑量微膠囊組(CAPP2)。試驗肉雞在第21 d和42 d宰殺,取樣并進行相關指標分析。數據顯示:(1)微囊化S.boulardii組相對于菌粉組平均日增重有所提高,料重比有所降低,其中在試驗前期CAPP1組平均日增重顯著高于P2組(P0.05)(2)與菌粉組相比,CAPP2組21 d的過氧化氫酶(CAT)含量顯著提高(P0.05)。(3)與P1組相比,21 d時,CAPP1組血清抗原決定簇(CD4)含量顯著升高(P0.05),腫瘤壞死因子-?(TNF-?)含量顯著降低(P0.05);42 d時,CAPP1組和CAPP2組肉雞血清白細胞介素-6(IL-6)含量顯著升高(P0.05)。(4)21 d時,與P1組相比,CAPP1組空腸絨毛高度顯著升高(P0.05),CAPP2組十二指腸絨毛高度/隱窩深度(VH/CD)和空腸絨毛高度顯著升高(P0.05),42 d時,CAPP1組十二指腸VH/CD顯著高于P2組(P0.05)。CAPP1組和CAPP2組空腸與回腸的絨毛高度顯著高于菌粉組(P0.05)。(5)42 d時,CAPP1組和CAPP2組香濃指數(shannon)顯著高于CON組(P0.05)。21 d時,ANT組擬桿菌門(Bacteroidetes)相對比例顯著高于P1組、CAP組以及CAPP2組,42 d時CAPP1組乳酸菌屬(Lactobacillus)相對比例顯著高于其他各組(P0.05)。試驗三、微囊化E.faecalis對肉雞生產性能、免疫功能及盲腸微生物菌群的影響試驗選取1日齡健康愛拔益加(AA)肉仔雞公雛600只,隨機分為6個處理組,每個處理組5個重復,每重復20只。各處理組分別為:基礎飼糧組(CON),抗生素組(ANT),低劑量菌粉組(P1),高劑量菌粉組(P2),低劑量微囊化E.faecalis組(CAPP1),高劑量微囊化E.faecalis組(CAPP2)。試驗肉雞在第21 d和42 d宰殺,取樣并進行相關指標分析。數據顯示:(1)試驗前期,微囊化E.faecalis組平均日增重顯著高于P1組(P0.05),CAPP2組的料重比顯著低于P1組(P0.05)。(2)與菌粉組相比,CAPP2組21 d的總抗氧化能力(T-AOC)顯著升高(P0.05),21 d與42 d的丙二醛(MDA)含量顯著降低(P0.05)。(3)21 d時,CAPP1組和CAPP2組TNF-?含量顯著低于P2組(P0.05)。42 d時,CAPP1組和CAPP2組白細胞介素2(IL-2)含量顯著高于P1組和P2組(P0.05),CAPP1組IL-6含量顯著高于P1組(P0.05)。(4)21 d時,CAPP2組十二指腸VH/CD顯著高于P1和P2組(P0.05),CAPP1組和CAPP2組空腸VH/CD顯著高于P1組(P0.05)。42 d,CAPP1組和CAPP2組十二指腸絨毛高度顯著高于其他各組(P0.05),CAPP1組和CAPP2組空腸絨毛高度顯著高于P1組(P0.05),CAPP1組和CAPP2組回腸VH/CD顯著高于其他各組(P0.05)。(5)42 d時,CAPP1組和CAPP2組厚壁菌門(Firmicutes)和Lactobacillus的相對比例顯著高于其他各組(P0.05)。綜合試驗二和試驗三的結果,微囊化S.boulardii和E.faecalis可顯著改善肉雞生產性能、抗氧化性能、免疫功能、腸道黏膜形態(tài)以及盲腸微生物菌群結構,提示乳化法發(fā)酵前包被制備的S.boulardii和E.faecalis微膠囊相比未包被的菌粉具有更好的益生作用。試驗四、微囊化S.boulardii與E.faecalis對小鼠急性潰瘍性結腸炎的影響試驗采用3%葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導小鼠結腸炎模型,72只雄性C57BL/6小鼠,隨機分為6個處理組,每個處理組12只小鼠,各處理組分別為對照組、DSS組、E.faecalis菌粉組、微囊化E.faecalis組、S.boulardii菌粉組、微囊化S.boulardii組。預試期7 d,正式試驗期7 d。試驗期間每日觀察小鼠進食、飲水、活動等一般情況,試驗第7天,取血清、結腸腸段和結腸黏膜樣品進行相關指標的分析檢測。試驗結果顯示:與對照組相比,DSS組小鼠毛色干枯,精神萎靡,活動量明顯減少,體重下降趨勢較明顯;結腸明顯縮短,組織病理學評分和MPO活性顯著升高(P0.05)。經過E.faecalis和S.boulardii灌胃后,小鼠的一般情況和結腸組織病理狀態(tài)均有所改善;小鼠血清IL-6與TNF-α含量顯著低于DSS組(P0.05);S.boulardii菌粉組和微囊化S.boulardii組結腸緊密連接蛋白(Occludin與Claudin-1)的表達量顯著高于DSS組(P0.05)。綜上,E.faecalis和S.boulardii可以緩解UC模型小鼠結腸炎癥病變,其機制與E.faecalis和S.boulardii可以降低血清中細胞因子IL-6與TNF-α含量,升高腸道黏膜緊密連接蛋白(Occludin與Claudin-1)的蛋白表達量密切相關,經過微囊化后的E.faecalis和S.boulardii表現出更好的緩解小鼠急性潰瘍性結腸炎病癥效果。
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【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S816

【參考文獻】

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5 梁新曉;，

本文編號：1515384