本文關(guān)鍵詞： 母豬 乳腺 乳脂合成與分泌 長鏈脂肪酸 乳腺上皮細(xì)胞　出處：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：為了研究母豬乳腺乳脂合成的分子機(jī)制以及外源長鏈脂肪酸(LCFA)對乳脂合成的調(diào)控作用,本論文篩選了母豬乳腺組織中參與乳脂合成的關(guān)鍵基因,并進(jìn)一步以母豬乳腺上皮細(xì)胞(pMEC)為模型探討了外源添加不同類型LCFA(棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸)對乳脂合成的影響及其機(jī)制。本論文共開展了兩部分研究。1.為篩選出乳腺乳脂合成的關(guān)鍵基因,本試驗采集6頭4~6胎大白母豬妊娠后期(-17±2天)、泌乳初期(1天)及泌乳高峰期(17±2天)乳腺組織樣品,測定了乳腺組織和乳中的甘油三酯(TAG)含量、初乳和常乳的脂肪酸組成,檢測了70個乳脂合成與分泌相關(guān)基因的mRNA表達(dá)和關(guān)鍵基因的蛋白表達(dá)。結(jié)果如下:(1)相比妊娠后期,母豬泌乳初期和高峰期乳腺組織中TAG含量分別提高了2倍和2.5倍(P0.05)。(2)與初乳相比,常乳中TAG含量提高了67%(P0.05),且從頭合成的脂肪酸、飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸含量均顯著升高(P0.05)。(3)SLC27A3,ACSS2,ACSL3,FABP3,FADS1,ELOVL1,DGAT1,AGPAT1,LPIN1,PLIN2,SREBP1,INSIG1,INSIG2和PPARγ基因分別是其各家族基因在泌乳期母豬乳腺中表達(dá)量最高的成員,且其mRNA表達(dá)量均隨泌乳的進(jìn)行顯著上調(diào)(除PPARγ外)(P0.05)。(4)相比妊娠后期,母豬泌乳期乳腺中脂肪酸攝取(VLDLR,LPL,CD36),脂肪酸活化(ACSS2,ACSL3,ACSL6)和細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(FABP3),脂肪酸從頭合成(ACACA,FASN),脂肪酸延長(ELOVL1),脂肪酸脫飽和(SCD,FADS1),甘油三酯合成(GPAM,AGPAT1,LPIN1,DGAT1),脂滴形成(BTN2A1,XDH,PLIN2),轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(SREBP1,SCAP,INSIG1/2,PPARα)等基因表達(dá)量較高且豐度變化較大。(5)相比妊娠后期,母豬泌乳期乳腺中CD36,FABP3,ACACA,SCD,FASN,GPAM,AGPAT1,LPIN1,DGAT1,PLIN2,PPARα和SREBP1蛋白表達(dá)量均顯著升高(P0.05),而PPARγ蛋白表達(dá)量只在泌乳初期乳腺中顯著升高(P0.05)。2.為探討不同類型LCFA對pMEC內(nèi)TAG合成的影響及其分子機(jī)制,本試驗以pMEC為體外模型,分別添加不同濃度(0,25,50,100,200,400和600μM)的棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸處理細(xì)胞24h后,測定了pMEC中TAG含量及乳脂合成相關(guān)基因mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果如下:(1)不同類型LCFA對pMEC內(nèi)TAG含量的影響棕櫚酸、亞油酸及硬脂酸濃度在25~600μM時,pMEC內(nèi)TAG含量隨脂肪酸濃度增加而升高(P0.05);油酸濃度在50~600μM時,pMEC內(nèi)TAG含量隨油酸濃度增加而升高(P0.05)。(2)不同類型LCFA對pMEC中乳脂合成相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響(1)脂肪酸攝取(LPL,CD36),TAG合成(GPAM,AGPAT6,LPIN2,DGAT1),脂滴形成(PLIN2),轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(PPARγ)基因的mRNA表達(dá)隨LCFA(棕櫚酸、油酸、亞油酸、硬脂酸)濃度增加顯著上調(diào)(P0.05);(2)從頭合成(ACACA,FASN),轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(SREBP1,INSIG1)基因的mRNA表達(dá)隨LCFA(棕櫚酸、油酸、亞油酸、硬脂酸)濃度增加顯著下調(diào)(P0.05);(3)ACSL3(脂肪酸活化)和FABP3(細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運)基因的mRNA表達(dá)隨飽和脂肪酸(棕櫚酸和硬脂酸)濃度增加顯著上調(diào)(P0.05),但隨不飽和脂肪酸(油酸和亞油酸)濃度增加而顯著下調(diào)(P0.05)。(3)不同類型LCFA對pMEC中乳脂合成相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(1)pMEC中CD36(脂肪酸攝取)和DGAT1(TAG合成)蛋白表達(dá)水平隨LCFA濃度增加而升高(P0.05);(2)ACACA(脂肪酸從頭合成)蛋白表達(dá)隨棕櫚酸濃度增加而下降(P0.05);但在不同濃度油酸(400~600μM)、硬脂酸(200~600μM)條件下發(fā)生上調(diào),而其蛋白表達(dá)未受到亞油酸濃度的影響;(3)PPARγ(轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子)蛋白表達(dá)水平隨油酸、亞油酸及硬脂酸濃度增加而升高(P0.05);但未受到棕櫚酸濃度的影響;(4)SREBP1(轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子)蛋白表達(dá)水平隨不飽和脂肪酸(油酸、亞油酸)濃度增加而降低(P0.05),但未受到飽和脂肪酸(棕櫚酸和硬脂酸)濃度的影響。綜上試驗結(jié)果表明:隨著妊娠期向泌乳期轉(zhuǎn)變,脂肪合成與分泌各途徑的相關(guān)基因和蛋白受到激活,從而促進(jìn)了乳腺組織中TAG合成能力上升。外源添加棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸均不同程度地提高了pMEC攝取脂肪酸、合成TAG與形成脂滴的能力,但抑制了脂肪酸從頭合成途徑及其上游調(diào)控因子。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828

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本文編號：1479907