本文關(guān)鍵詞： ALV-J 腫瘤相關(guān)基因 致病性 比較病理學(xué)　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：我國(guó)早期流行的ALV-J主要致肉雞髓樣細(xì)胞瘤,其靶細(xì)胞主要為骨髓細(xì)胞。而后來(lái)流行的致蛋雞血管瘤型ALV-J則對(duì)髓細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等多種組織細(xì)胞有親嗜致瘤特性,引起多種組織腫瘤,常發(fā)生混合型腫瘤。致蛋雞血管瘤型ALV-J與早期致肉雞髓樣細(xì)胞瘤型ALV-J感染肉雞時(shí)是否表現(xiàn)相同的致病特性及致瘤機(jī)制?在感染肉雞雞胚成纖維細(xì)胞(R-CEF)時(shí),病毒增殖及細(xì)胞分子病理學(xué)反應(yīng)上有無(wú)明顯差異?有待于試驗(yàn)驗(yàn)證。本研究將分離于不同年代、不同品種、不同致瘤表型及基因結(jié)構(gòu)存在一定差異的兩株ALV-J(NX0101、HN10PY01)分別接種R-CEF建立細(xì)胞感染模型,比較研究病毒增殖及細(xì)胞腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的異同。再將兩株ALV-J分別人工接種AA父母代肉雞雞胚,建立動(dòng)物感染模型,定期剖殺試驗(yàn)雞,比較研究試驗(yàn)雞的病毒感染狀態(tài)、致病性及腫瘤相關(guān)基因表達(dá)情況。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,兩毒株分別感染R-CEF后,細(xì)胞培養(yǎng)上清中ALV群特異性抗原p27均呈陽(yáng)性,且HN10PY01感染組顯著高于NX0101感染組(P0.05)。HN10PY01感染組細(xì)胞培養(yǎng)上清中病毒TCID50顯著高于NX0101感染組(P0.05)。熒光定量結(jié)果表明,兩毒株感染R-CEF后,抑癌基因p53、p16 mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著升高,原癌基因c-myc、c-myb的表達(dá)均顯著升高,感染后期凋亡基因Bcl-2顯著高表達(dá)。兩毒株相比,感染后在第1、2、7d,NX0101感染組p53 mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于HN10PY01感染組(P0.05);感染前期,NX0101感染組p16 mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于HN10PY01感染組(P0.05),感染后期,HN10PY01感染組顯著高于NX0101感染組(P0.05);在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中,兩感染組c-myc、c-myb和Bcl-2基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異不顯著(P0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,兩感染組泄殖腔拭子p27陽(yáng)性率均為100%,NX0101感染組p27數(shù)值顯著高于HN10PY01感染組(P0.05);兩感染組病毒血癥均為陽(yáng)性,5W后,NX0101感染組病毒血癥數(shù)值顯著高于HN10PY01感染組(P0.05)。兩感染組血清ALV-J抗體陰性,感染雞免疫耐受。NX0101感染組死亡率30%,致瘤率45%,誘發(fā)髓樣細(xì)胞瘤4例,淋巴細(xì)胞瘤1例,髓樣細(xì)胞瘤與纖維肉瘤混合型腫瘤3例,髓樣細(xì)胞瘤、血管瘤和纖維肉瘤混合型腫瘤1例;HN10PY01感染組死亡率20%,致瘤率35%,誘發(fā)血管瘤3例,髓樣細(xì)胞瘤1例、髓樣細(xì)胞瘤和纖維肉瘤混合瘤、淋巴肉瘤和纖維肉瘤混合型腫瘤各1例。兩感染組ND和AIV-H9抗體水平顯著低于對(duì)照組(P0.05),兩感染組間差異不顯著(P0.05);感染雞平均體重、胸腺、法氏囊發(fā)育指數(shù)顯著低于對(duì)照組(P0.05),兩感染組相比,感染后期NX0101感染組顯著低于HN10PY01感染組(P0.05)。熒光定量結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,兩感染組雞只各器官組織中p53基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著升高(P0.05),兩感染組相比,感染后期NX0101感染組骨髓、肝臟、肺臟組織中p53 mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于HN10PY01感染組(P0.05),經(jīng)測(cè)序證實(shí)高表達(dá)的p53基因主要為突變型,多為點(diǎn)突變,感染后期血清p53蛋白及抗體水平顯著高于對(duì)照組(P0.05),兩感染組差異不顯著(P0.05);兩感染組雞只心臟p16基因低表達(dá)(P0.05),感染前期肝臟低表達(dá)后期失表達(dá),其他各器官組織失表達(dá);原癌基因c-myc顯著高表達(dá)(P0.05),感染后期NX0101感染組肝臟c-myc mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于HN10PY01感染組,在其他各器官組織中差異不顯著(P0.05);原癌基因c-myb未見(jiàn)明顯變化(P0.05);凋亡基因Bcl-2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著升高(P0.05),兩感染組差異不顯著(P0.05);兩感染組VEGF及其受體基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高表達(dá)(P0.05),兩感染組差異不顯著(P0.05);兩感染組HSP70基因顯著高表達(dá)(P0.05),兩感染組差異不顯著(P0.05)。血清中HSP60、HSP70抗體水平顯著高于對(duì)照組(P0.05),兩感染組相比,感染后期NX0101感染組顯著高于HN10PY01感染組(P0.05);感染前期,兩感染組血清HSP90抗體水平顯著高于對(duì)照組(P0.05),兩感染組差異不顯著(P0.05)。體外試驗(yàn)比較研究表明,兩毒株感染R-CEF后病毒的復(fù)制能力及毒力有明顯差異,腫瘤相關(guān)基因表達(dá)上有所不同,但基本表達(dá)一致;體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明兩毒株的感染狀態(tài)、致病性、致瘤表型及致瘤機(jī)制上也存在一定的差異。綜合評(píng)價(jià)HN10PY01毒株在R-CEF上的感染復(fù)制能力強(qiáng)于NX0101毒株,而AA父母代肉雞對(duì)NX0101毒株更為易感,NX0101感染組死亡率及致瘤率更高,以髓樣細(xì)胞瘤為主,而HN10PY01感染組以血管瘤為主。兩毒株體內(nèi)外感染復(fù)制能力不同,致瘤表型存在明顯差異,但腫瘤相關(guān)基因異常表達(dá)上基本一致。本研究為探討宿主遺傳背景對(duì)ALV-J感染致瘤作用的影響、ALV-J宿主范圍擴(kuò)大以及致瘤表型演變的分子病理學(xué)機(jī)制提供一定的理論價(jià)值。
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【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S858.31
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本文編號(hào)：1474675