本文關(guān)鍵詞：三種藥物在大口黑鱸體內(nèi)代謝動力學(xué)及代謝組學(xué)研究　出處：《浙江工商大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：大口黑鱸(Micropterus salmoides)俗名為加州鱸,原產(chǎn)于北美,我國于二十世紀(jì)八十年代初引進。該品種肉質(zhì)純白細(xì)嫩,味道鮮美可口,生長快,易起捕,具有較高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值,現(xiàn)已推廣到全國各地,成為我國新的重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一。2014年,我國淡水養(yǎng)殖的鱸魚產(chǎn)量達(dá)35.2萬噸,其中絕大部分為大口黑鱸。由于大口黑鱸引進時主要由野生種馴化而成,經(jīng)多年近親繁育和集約化養(yǎng)殖導(dǎo)致種質(zhì)退化和抗病能力降低等問題。為了防治微生物引起的各類疾病,常使用抗生素進行治療,而抗生素的不合理使用是影響水產(chǎn)品質(zhì)量安全的主要因素。目前國內(nèi)外對用抗生素治療大口黑鱸疾病的研究鮮有報道,尤其是抗生素在大口黑鱸體內(nèi)的代謝殘留及生物轉(zhuǎn)化的研究極少。因此,很有必要開展抗生素在大口黑鱸體內(nèi)的代謝研究。本文通過對大口黑鱸爆發(fā)性疾病致病菌的分離鑒定及藥敏試驗確定受試藥物,研究了受試藥物在大口黑鱸體內(nèi)的代謝動力學(xué)、代謝產(chǎn)物及代謝組學(xué)研究,以此為基礎(chǔ)研究了受試藥物在大口黑鱸體內(nèi)的代謝規(guī)律、生物轉(zhuǎn)化及對大口黑鱸機體的影響,在藥物調(diào)控與應(yīng)用上都具有重要的意義,現(xiàn)將主要研究結(jié)果摘要如下:(1)針對大口黑鱸在夏季常見的爆發(fā)性疾病,進行了致病菌分離鑒定與攻毒試驗。比較VITEK 2的64個生化反應(yīng)的分析提示和16s rDNA基因序列所構(gòu)建的發(fā)育樹,確定了致病菌為類志賀鄰單胞菌(Plesiomonas Shigeloides)。通過人工回歸感染試驗與毒力試驗,計算得出類志賀鄰單胞菌對大口黑鱸的半數(shù)致死量LD50為3.47×106 CFU/mL。選取菌株 LY4-p-1、LY4-p-2、LY4-s-1、LY4-s-2、LY4-g-1、LY4-g-2開展藥敏試驗。這6株菌對13種常見藥物呈現(xiàn)相同的耐藥譜:對頭孢哌酮、氨曲南、氟苯尼考、四環(huán)素、諾氟沙星、恩諾沙星和強力霉素等7種抗生素高度敏感;而對阿米卡星、新霉素、青霉素G、林可霉素、萬古霉素、復(fù)方新諾明等6種抗生素耐藥。選取氟苯尼考、強力霉素和恩諾沙星這三種國家許可用藥進行后續(xù)的試驗。(2)采用高效液相色譜技術(shù)(HPLC)對大口黑鱸體內(nèi)恩諾沙星(Enrofloxacin)、氟苯尼考(Florfenicol)和強力霉素(Doxycycline)的藥代動力學(xué)(Pharmacokinetics)進行了研究。測定了連續(xù)5d 口服30 mg/kgb.w劑量的氟苯尼考、強力霉素和恩諾沙星后、不同時間點大口黑鱸體內(nèi)各組織中氟苯尼考、強力霉素和恩諾沙星的含量,建立藥時曲線,并通過3p97藥動學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理,探討氟苯尼考、強力霉素和恩諾沙星在大口黑鱸體內(nèi)的代謝動力學(xué)規(guī)律。結(jié)果表明:在25±2℃水溫下,三種藥物在大口黑鱸體內(nèi)均可采用一室模型來表示。連續(xù)5d 口服30mg/kgb.w劑量的氟苯尼考,血液、肌肉和肝臟中的達(dá)峰時間均為4 h,吸收半衰期分別為:1.591 h、2.109h 和 1.599h:消除半衰期分別為:15.087 h、55.862 h 和 27.680 h,藥時曲線下總面積分別為:124.09μg/mL·h、219.83 μg/g·h和156.37μg/g·h。在25±2℃水溫下,大口黑鱸連續(xù)5d 口服30mg/kgb.w劑量的強力霉素,血液、肌肉和肝臟中的達(dá)峰時間為分別為2 h、8 h和4 h;吸收半衰期分別為:1.975 h、3.590 h和2.019 h;消除半衰期分別為:22.549 h、26.452 h和43.890 h;藥時曲線下總面積分別為:195.14μg/mL·h、269.49 μg/g·h 和 336.71μg/g·h。在 25±2℃水溫下,大口黑鱸連續(xù)5d 口服30 mg/kg b.w劑量的恩諾沙星,血液、肌肉和肝臟中的達(dá)峰時間均為4h;吸收半衰期分別為:0.998h、2.176h和1.892h;消除半衰期分別為:8.494 h、23.840 h和37.530 h;藥時曲線下總面積分別為:132.23 μg/mL·h、273.50 μg/g·h 和 247.12 μg/g·h。三種藥物建議的休藥期分別為:175度日、375度日和375度日。(3)采用超高效液相色譜技術(shù)串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜(UPLC-TOF/MS)對恩諾沙星、氟苯尼考和強力霉素在大口黑鱸體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化進行了研究。采用每尾大口黑鱸氟苯尼考、恩諾沙星或強力霉素150 mg/kg b.w的劑量,單次腹腔注射的方式給藥。優(yōu)化了恩諾沙星和強力霉素的提取前處理方法。先通過一級質(zhì)譜(Q1)掃描出可能的代謝產(chǎn)物,針對這些化合物進行二級質(zhì)譜(Q2)掃描。結(jié)果表明:氟苯尼考在大口黑鱸體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物為氟苯尼考胺。未檢出強力霉素在大口黑鱸體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。恩諾沙星在大口黑鱸體內(nèi)的代謝產(chǎn)物主要包括環(huán)丙沙星和�；撬峤Y(jié)合物。(4)應(yīng)用高分辨質(zhì)譜(UPLC-TOF/MS)平臺,研究了大口黑鱸血清中的藥物代謝組學(xué)。經(jīng)腹腔給藥30 mg/kg b.w的恩諾沙星后的0 h、24 h、48 h、96 h和168 h取樣,每次取大口黑鱸8個血清樣品進行研究分析。血清樣品經(jīng)過高通量的前處理后,待UPLC-TOF/MS測定。UPLC-TOF/MS采集數(shù)據(jù)時采用大梯度洗脫程序、采用正負(fù)離子掃描模式。數(shù)據(jù)經(jīng)過峰對齊預(yù)處理、質(zhì)量控制、MPP軟件進行數(shù)據(jù)提取與差異性物質(zhì)的篩查,聚類分析,主成分分析等研究表明:給藥后Oh時的樣品與對照組差異性較小,可歸并為一組進行處理,與對照組相比,給藥后24 h物質(zhì)的差異性變化最大。給藥后48 h、96 h和168 h時的樣品之間差異性較小,可歸并為一組樣品處理,該組樣品化合物的差異性變化減少。根據(jù)火山圖的篩查,表明Oh和24 h樣品之間有213種物質(zhì)發(fā)生差異性變化、24 h組和48 h、96 h、168 h組之間存在209個差異性物質(zhì),Oh和48 h、96h、168 h之間存在83種差異性化合物。其中:有4種化合物僅在0-24 h之內(nèi)發(fā)生改變,而在24 h-168 h的過程中未發(fā)生改變,比較起始0h和48 h后的濃度,變化倍數(shù)小于2倍或P0.05。有3種化合物,僅24h-168h之間發(fā)生顯著性變化(P0.05)。在0-24h之間未發(fā)生改變,比較起始Oh和48h后的濃度,未發(fā)生顯著性變化。有12種化合物,在0-24 h、24-168 h的過程中均未發(fā)生顯著性變化,但比較Oh和48h之后的數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)兩者存在顯著性變化。有174種化合物,在0-24 h之間和24-168 h之間都發(fā)生了顯著性變化,但比較Oh與48 h之后的濃度,兩者未存在顯著性差異。有18種化合物,在0-24 h之間未發(fā)生顯著變化,但在24-168 h之間發(fā)生了顯著性變化,比較Oh與48h之后的濃度,兩者也存在顯著性變化。有39種化合物,在0-24 h之間產(chǎn)生明顯的濃度變化,但在24 h至168 h之間濃度未發(fā)生顯著性變化,比較0 h與48 h之后的濃度,兩者存在顯著性變化。有14種化合物,在0-24 h、24-168 h之間一直在變化,而比較試驗初始時的濃度與試驗后期時的濃度,兩者也存在顯著性差異。對該14種化合物進行篩查,譜圖與分子量比對后的結(jié)果表明:這14種化合物中有3種可能成為生物標(biāo)志物,包括環(huán)化腺嘌呤脫氧核糖核苷一磷酸(Cyclic dAMP)、11-(3-乙酰氧基-1-丙炔基)-1,25-二羥基-9,11-雙脫氫維生素D3(11-(3-acetoxy-1-propynyl)-1,25-dihydroxy-9,11-didehydr-ovitamin D3)和泛酰巰基乙胺(Pantetheine)。
[Abstract]:This paper studies the metabolism dynamics , metabolic products and metabolic groups of macrostoma bass in China . It is very important to study the metabolism , metabolism and metabolism of macrostoma bass in China . The LD _ ( 50 ) LD _ ( 50 ) was 3.47 脳 106 CFU / mL . LY4 - p - 1 , LY4 - p - 2 , LY4 - s - 1 , LY4 - s - 2 , LY4 - g - 1 , LY4 - g - 2 were tested . ( 2 ) The pharmacokinetics ( Pharmacokinetics ) of Enrofloxacin ( Enrofloxacin ) , Flubena and Doxyfloxacin were studied by high performance liquid chromatography ( HPLC ) . The pharmacokinetic parameters of flubena , strong omycin and Ennofloxacin were measured at 25 鹵 2 鈩，

本文編號：1357620