本文關(guān)鍵詞：針刺山羊激活的核團(tuán)及誘導(dǎo)的阿片肽和抗阿片肽表達(dá)水平　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：針刺鎮(zhèn)痛在我國有悠久的歷史,已廣泛應(yīng)用于疼痛疾病的治療。電針是將脈沖電流通過針灸針導(dǎo)入穴位以代替手捻針法刺激,它與傳統(tǒng)針刺相比,不僅鎮(zhèn)痛效果更好,而且更容易調(diào)控刺激量。自上世紀(jì)60年代電針應(yīng)用以來,人們采用神經(jīng)生理學(xué)、生物化學(xué)和藥理學(xué)的方法證實(shí)針刺鎮(zhèn)痛是由神經(jīng)和體液共同參與的生理性調(diào)整過程。大量研究也表明針刺可以通過激活中樞阿片能、去甲腎上腺素能、多巴胺能、血清素能或膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng);通過神經(jīng)纖維、核團(tuán)的電刺激或損毀以及神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)特異性拮抗劑阻斷的方法,證實(shí)中樞特定神經(jīng)核團(tuán)和腦區(qū)參與針刺鎮(zhèn)痛的調(diào)節(jié)。由于神經(jīng)核團(tuán)通過神經(jīng)纖維網(wǎng)絡(luò)相互聯(lián)系、作用和影響,所以對特定神經(jīng)核團(tuán)各自功能的了解并不能完全闡明針刺鎮(zhèn)痛的中樞調(diào)節(jié)機(jī)制。C-Fos和c-Jun是用于定位各種特異性外周刺激所引起中樞神經(jīng)激活的可靠標(biāo)志。試驗(yàn)選取35只健康成年山羊,隨機(jī)分為5組,即空白組和不同頻率(0,2,60和100 Hz,3.2 V)電針組,每組7只。對于電針組山羊,分別采用不同頻率電針刺激“百會(huì)-三臺(tái)、耳根-三陽絡(luò)”組穴30 min�？瞻捉M山羊不作電針穴位刺激。采用鉀離子透入法測定側(cè)腹壁痛閾,免疫組化SABC方法檢測中樞鎮(zhèn)痛核團(tuán)(腦區(qū))c-Fos和c-Jun蛋白表達(dá)水平。擬觀察的腦核團(tuán)(腦區(qū))包括伏核、外側(cè)隔區(qū)、尾核、視上核、下丘腦室旁核)、下丘腦腹內(nèi)側(cè)核、弓狀核、基底杏仁核、外側(cè)韁核、黑質(zhì)致密部、導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)、臂旁核、藍(lán)斑、中縫大核、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核孤束核。結(jié)果顯示60 Hz電針誘導(dǎo)山羊痛閾升高82.2%,顯著高于(0.01)其他頻率。0、2和100 Hz電針誘導(dǎo)山羊痛閾分別升高6.4%、35.2%和40.9%。電針誘導(dǎo)c-Fos和c-Jun在多數(shù)鎮(zhèn)痛相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)和腦區(qū)中表達(dá)顯著增加(0.05)。0 Hz組c-Fos和c-Jun免疫活性樣神經(jīng)元數(shù)(c-Fos-IR和c-Jun-IR)與空白組無顯著差異(0.05)。與100 Hz相比,2 Hz電針誘導(dǎo)c-Fos-IR陽性神經(jīng)元數(shù)在下丘腦腹內(nèi)側(cè)核、弓狀核和基底杏仁核顯著增多(0.05),c-Jun-IR陽性神經(jīng)元數(shù)在下丘腦室旁核和基底杏仁核內(nèi)顯著增多(0.05)。與此相反,100 Hz電針誘導(dǎo)c-Fos-IR陽性神經(jīng)元數(shù)在外側(cè)僵核和黑質(zhì)致密部以及c-Jun-IR陽性神經(jīng)元數(shù)在伏核、外側(cè)隔區(qū)和尾核顯著高于(0.05)2 Hz。與2 Hz或100 Hz相比,60 Hz電針誘導(dǎo)c-Fos-IR和c-Jun-IR陽性神經(jīng)元數(shù)在所測神經(jīng)核團(tuán)和腦區(qū)(中縫大核、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核、孤束核)中顯著增加(0.05)。可見,60hz電針更為廣泛的激活山羊中樞神經(jīng)核團(tuán)和腦區(qū),產(chǎn)生較好的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。在針刺鎮(zhèn)痛的臨床應(yīng)用中,人們還發(fā)現(xiàn)持續(xù)電針較長時(shí)間或反復(fù)多次電針,電針鎮(zhèn)痛的效果會(huì)顯著下降,即產(chǎn)生“電針耐受”現(xiàn)象。研究表明,電針鎮(zhèn)痛效應(yīng)的發(fā)揮,主要是通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性的阿片肽,如內(nèi)啡肽、腦啡肽和強(qiáng)啡肽等在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的釋放來實(shí)現(xiàn)的。研究者進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),電針誘導(dǎo)內(nèi)源性阿片肽釋放的同時(shí)也增加抗阿片肽物質(zhì),如八肽膽囊收縮素、孤啡肽等的釋放�？拱⑵奈镔|(zhì)對抗內(nèi)源性阿片肽的鎮(zhèn)痛作用可能是電針耐受的重要機(jī)制之一,然而,電針耐受產(chǎn)生過程中腦內(nèi)阿片肽、抗阿片肽的功能消長尚未闡明。為了探討針刺鎮(zhèn)痛的耐受機(jī)制,78只健康成年山羊隨機(jī)分為空白組(6只)、假針組(6只)和電針組(66只)。對于電針組山羊,使用60hz(3.2v)電針持續(xù)刺激山羊“百會(huì)-三臺(tái)、耳根-三陽絡(luò)”組穴6h,分別于0、0.5、2、4、6、12、18和30h采用鉀離子透入法檢測側(cè)腹壁痛閾,各時(shí)間點(diǎn)分別取6只羊安樂死,并采集中樞試驗(yàn)樣本,包括伏核、尾核、丘腦室旁核、下丘腦室旁核、弓狀核、海馬區(qū)、杏仁核、丘腦中央中核、束旁核、中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)、黑質(zhì)、中縫大核、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核、神經(jīng)垂體和4~6腰椎段脊髓背角。采用elisa法檢測腦啡肽(enk,腦內(nèi)最重要阿片肽之一)含量,qpcr檢測前腦啡肽(enk前體)和抗阿片肽(膽囊收縮素;孤啡肽前體)及它們的受體(μ-受體,cckbr和orl-1)基因的mrna含量。剩下的山羊在12、18和30h,各時(shí)間點(diǎn)分別隨機(jī)選取6只山羊,給予額外的0.5h電針,電針前后測定痛閾來評估電針耐受恢復(fù)的狀況。假針組山羊僅插針,不通電�？瞻捉M和假針組山羊保定和痛閾測定同電針組山羊。結(jié)果顯示,空白組和假針組山羊痛閾率在試驗(yàn)期間無顯著變化,兩組間痛閾也無顯著差異(0.05)。電針山羊痛閾率0.5h為89.9±11.7%,6h降至 11.4±8.9%,表明持續(xù)電針誘導(dǎo)鎮(zhèn)痛耐受的形成。隨后,山羊痛閾在12.5、18.5和30.5h分別為升高15.2±7.1%,21.8±9.4%,67.28±10.8%(與0.5h痛閾無差異,0.05),顯示針刺耐受逐漸恢復(fù)。伏核enk在2~4h顯著降低(0.01),6~30h仍保持較低的含量水平(0.05)。尾核、丘腦室旁核、下丘腦室旁核、弓狀核、杏仁核和中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)enk含量均在0.5h達(dá)到峰值(0.05),但2h降至基礎(chǔ)水平(0.05)。中縫大核enk含量無顯著變化。脊髓背角enk含量呈現(xiàn)波動(dòng)性變化,在0.5h顯著升高,2h顯著降低(基礎(chǔ)值以下),隨后逐漸回升,18 h再次降低于(0.05)基礎(chǔ)值以下。被測神經(jīng)核團(tuán)(腦區(qū))中ENK含量與山羊痛閾率之間呈正相關(guān)性(0.05)。持續(xù)電針抑制前腦啡肽mRNA在伏核、海馬、弓狀核和巨細(xì)胞網(wǎng)狀核中的表達(dá);抑制μ-受體mRNA在海馬、束旁核、中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核和脊髓背角中的表達(dá)。而持續(xù)電針增加膽囊收縮素mRNA在丘腦中央中核、束旁核、中腦導(dǎo)水管中央灰質(zhì)、黑質(zhì)和神經(jīng)垂體中的表達(dá),增加孤啡肽前體mRNA在伏核、弓狀核、杏仁核、黑質(zhì)、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核和神經(jīng)垂體中的表達(dá),增加膽囊收縮素受體mRNA在伏核、尾核、丘腦中央中核、黑質(zhì)和脊髓背角中表達(dá)以及增加孤啡肽受體mRNA在下丘腦腹內(nèi)側(cè)核、丘腦中央中核、中腦導(dǎo)水管中央灰質(zhì)、束旁核、黑質(zhì)、中縫大核和神經(jīng)垂體中的表達(dá)。本試驗(yàn)結(jié)果表明60 Hz誘導(dǎo)山羊較好的鎮(zhèn)痛效應(yīng),這可能與電針廣泛激活中樞鎮(zhèn)痛相關(guān)核團(tuán)有關(guān)。持續(xù)電針(6 h)誘導(dǎo)鎮(zhèn)痛耐受,電針中止可使鎮(zhèn)痛耐受在24 h內(nèi)恢復(fù)。這一現(xiàn)象可能與中樞腦啡肽,八肽膽囊收縮素、孤啡肽以及他們受體在鎮(zhèn)痛相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)或腦區(qū)的表達(dá)方式有關(guān)。本研究初步闡明了針刺山羊鎮(zhèn)痛的神經(jīng)調(diào)節(jié)機(jī)制以及針刺鎮(zhèn)痛耐受的機(jī)理,可為針刺鎮(zhèn)痛在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S853.61

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本文編號(hào)：1330570