本文關(guān)鍵詞：昆蟲(chóng)桿狀病毒經(jīng)口感染因子間的相互作用及P74與宿主中腸互作蛋白的研究　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 桿狀病毒 經(jīng)口感染因子 PIF復(fù)合物 酵母雙雜交 P74相互作用

【摘要】：昆蟲(chóng)桿狀病毒在生活周期中會(huì)產(chǎn)生兩種表型不同但遺傳物質(zhì)相同的病毒,即出芽型病毒(Budded virus,BV)和包涵體衍生型病毒(Occlusion-derived virus,ODV)。ODV包裹在包涵體中,被幼蟲(chóng)食下后通過(guò)感染中腸上皮細(xì)胞感染宿主幼蟲(chóng),這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為經(jīng)口感染。多種ODV囊膜蛋白在經(jīng)口感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用,它們被稱(chēng)為經(jīng)口感染因子(PIFs)。之前研究表明有9種ODV蛋白,包括 7 種 PIFs：P74、PIF1、PIF2、PIF3、PIF4、PIF6、P95(Ac83)和 2 種ODV特異性蛋白,Ac5和Ac108,可能與ODV表面復(fù)合物相關(guān),該復(fù)合物被稱(chēng)為PIF復(fù)合物。本研究以桿狀病毒模式種-苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)為研究對(duì)象,利用酵母雙雜交和雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)探究了與PIF復(fù)合物相關(guān)的9種蛋白之間相互作用的特點(diǎn)。進(jìn)一步通過(guò)截短和敲除分析了 P95和PIF1相互作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。此外,作為最早被鑒定到的經(jīng)口感染因子,P74被發(fā)現(xiàn)與原發(fā)感染中ODV結(jié)合中腸上皮細(xì)胞相關(guān)。為了鑒定宿主中腸細(xì)胞中與P74互作的蛋白,構(gòu)建了家蠶中腸酵母文庫(kù),并以P74作為誘餌進(jìn)行酵母雙雜交文庫(kù)篩選。主要結(jié)論如下:1.PIF復(fù)合物相關(guān)的9種蛋白相互作用的特點(diǎn)。利用酵母雙雜交系統(tǒng)共鑒定到6個(gè)相互作用,分別為PIF1-PIF2、PIF1-PIF3、PIF1-PIF4、PIF1-P95、PIF2-PIF3 和 PIF3-PIF4,其中 PIF1-PIF3、PIF2-PIF3、PIF1-P95為強(qiáng)相互作用,其他的為中等強(qiáng)度相互作用。P74、PIF6、Ac5和Ac108沒(méi)有鑒定到參與相互作用。和Y2H結(jié)果一致,BiFC分析結(jié)果表明復(fù)合物中相互作用包括PIF1-PIF2、PIF1-PIF3、PIF1-PIF4、PIF1-P95、PIF2-PIF3 和 PIF3-PIF4,而其他組合沒(méi)有檢測(cè)到相互作用。根據(jù)這些結(jié)果推測(cè)PIF1是PIF復(fù)合物的中心,其他成分都和PIF1存在相互作用。2.P95和PIF1相互作用的深入分析分別對(duì)PIF1和P95進(jìn)行N端和C端分段截短,然后進(jìn)行Y2H分析。結(jié)果顯示截掉P95的第200-300個(gè)氨基酸(aa)會(huì)破壞PIF1和P95之間相互作用,敲除結(jié)果證明P95幾丁質(zhì)結(jié)合結(jié)構(gòu)域(224-282aa)為PIF1和P95相互作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。用相同方法證明PIF1的100-200aa也是PIF1和P95相互作用的關(guān)鍵序列。3.P74與家蠶中腸互作蛋白的鑒定提取5齡第3天家蠶幼蟲(chóng)中腸RNA,構(gòu)建了家蠶中腸酵母文庫(kù)。以P74作為誘餌對(duì)文庫(kù)進(jìn)行篩選,共篩選到6種候選蛋白,分別為U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein IMP3、60S ribosomal protein L5、JAB-MPN domain protein、Actin,cytoplasmic A3、35kDa proteasecysteine、histidine-rich protein 1-B 和 eukaryotic translation initiation factor 1A,最后鑒定到 3 種可能的互作蛋白,分別為 JAB-MPN domain protein、Actin,cytoplasmic A3、35kDa protease。免疫共沉淀結(jié)果進(jìn)一步表明JAB-MPN domain protein和P74之間存在強(qiáng)烈互作,這個(gè)蛋白可能是ODV結(jié)合中腸細(xì)胞的關(guān)鍵宿主因子。本研究結(jié)果闡明了桿狀病毒各經(jīng)口感染因子之間的相互作用,增加了對(duì)PIF復(fù)合物的認(rèn)識(shí),并重點(diǎn)分析了 P95和PIF1相互作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域,為研究它們的功能提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。同時(shí)鑒定到了 P74與家蠶中腸的互作蛋白,為進(jìn)一步闡明昆蟲(chóng)桿狀病毒經(jīng)口感染的詳細(xì)分子機(jī)制提供了參考。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S884.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陸承平;注意桿狀病毒科分類(lèi)的變化[J];中國(guó)病毒學(xué);2001年04期

2 王曉玲;魏美才;夏春蘭;;昆蟲(chóng)桿狀病毒的研究與應(yīng)用[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年06期

3 郭錫杰,楊明觀(guān),張耀洲;桿狀病毒的酪氨酸蛋白磷酸酯酶研究[J];蠶業(yè)科學(xué);2000年03期

4 郭錫杰,吳友良;昆蟲(chóng)桿狀病毒在生物技術(shù)研究中的應(yīng)用[J];常熟高專(zhuān)學(xué)報(bào);2001年04期

5 烏慧玲;曾黎平;吳巖;;桿狀病毒基因分子進(jìn)化研究的新方法[J];蠶業(yè)科學(xué);2005年04期

6 劉高強(qiáng);余曉丹;;昆蟲(chóng)桿狀病毒分子生物學(xué)及其應(yīng)用研究的新進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年09期

7 蘭麗盼;吳小鋒;;昆蟲(chóng)桿狀病毒研究和應(yīng)用新進(jìn)展[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2008年06期

8 馬景霞;;昆蟲(chóng)桿狀病毒作為外源基因表達(dá)載體的應(yīng)用[J];中國(guó)家禽;2008年11期

9 單曉紅;唐平;張雨;徐攀;;基于全基因組數(shù)據(jù)的桿狀病毒進(jìn)化研究進(jìn)展[J];科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào);2009年28期

10 管致和;昆蟲(chóng)病原桿狀病毒的研究和應(yīng)用[J];世界農(nóng)業(yè);1985年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 賈園;沈陽(yáng);邱亞峰;史子學(xué);邵東華;趙福廣;馬志永;;桿狀病毒的應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 葉林柏;陳海雷;郜金榮;朱應(yīng);梁東瑞;;昆蟲(chóng)桿狀病毒與哺乳動(dòng)物的相互作用[A];全國(guó)生物防治學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];1991年

3 龐義;;昆蟲(chóng)桿狀病毒基因工程[A];殺蟲(chóng)微生物[C];1992年

4 宋建華;梁昌鏞;陳新文;;桿狀病毒介導(dǎo)的p35基因抗哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡的研究[A];2006年度學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

5 萬(wàn)永繼;;桿狀病毒在組織細(xì)胞內(nèi)的感染傳輸機(jī)制及垂直傳播途徑的分析[A];中國(guó)蠶學(xué)會(huì)商品性小蠶飼養(yǎng)規(guī)程和蠶病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

6 趙耘;羅長(zhǎng)寶;何召慶;陳博文;劉尚高;王雙山;靳玉芬;歐陽(yáng)素貞;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒B_(13)株ORF_5基因在桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第五屆理事會(huì)第二次全體會(huì)議暨防檢疫專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第7次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2002年

7 蔡艷清;許東林;周?chē)?guó)輝;李華平;;廣東首次發(fā)現(xiàn)甘蔗桿狀病毒[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2004年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

8 段宇;周紅文;李倩;汪承亞;趙紅;覃又文;劉超;陳家偉;;利用桿狀病毒載體在家蠶幼蟲(chóng)中高效表達(dá)人胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(hIGF-1)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

9 杜恩岐;閆鋒;盧楠;齊義鵬;;桿狀病毒新調(diào)控基因p13的結(jié)構(gòu)功能及殺蟲(chóng)潛力研究[A];第十屆全國(guó)殺蟲(chóng)微生物學(xué)術(shù)研討會(huì)暨全國(guó)生物農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)研究與產(chǎn)業(yè)化會(huì)議論文摘要集[C];2006年

10 姜靜穎;王斌;宋良國(guó);;一種無(wú)包涵體桿狀病毒粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)電鏡觀(guān)察[A];第九次全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文摘要集（Ⅰ）[C];1996年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 程若琳;褐飛虱體內(nèi)共生病毒的研究[D];浙江大學(xué);2016年

2 文莉;桿狀病毒定點(diǎn)標(biāo)記及侵染行為動(dòng)態(tài)示蹤[D];武漢大學(xué);2015年

3 鄭秦;昆蟲(chóng)桿狀病毒經(jīng)口感染因子間的相互作用及P74與宿主中腸互作蛋白的研究[D];浙江大學(xué);2017年

4 鄭浩;利用桿狀病毒表達(dá)感染性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

5 劉陽(yáng)坤;優(yōu)化桿狀病毒系統(tǒng)作為動(dòng)物疫苗載體的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 姚相杰;桿狀病毒介導(dǎo)的丙肝病毒可感染體外細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2007年

7 梁昌鏞;桿狀病毒與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相互作用的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2005年

8 王鑫;桿狀病毒復(fù)制和基因表達(dá)的表觀(guān)遺傳學(xué)調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 張敏;雙啟動(dòng)子桿狀病毒介導(dǎo)~(131)I腫瘤靶向治療及抗腫瘤新生血管調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究[D];上海交通大學(xué);2013年

10 陳寅;桿狀病毒基因組掃描技術(shù)篩選病毒因子和順式元件及其表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 歐艷梅;抗宿主細(xì)胞凋亡策略以?xún)?yōu)化桿狀病毒表達(dá)載體[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 易命;火地塘林區(qū)昆蟲(chóng)和桿狀病毒多樣性調(diào)查[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 王建章;桿狀病毒介導(dǎo)的鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體應(yīng)用于人下咽癌分子成像和核素基因治療的可行性研究[D];上海交通大學(xué);2014年

4 劉璐璐;桿狀病毒蛋白激酶調(diào)控多角體組裝及病毒感染的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

5 黎潤(rùn)彩;桿狀病毒AcMNPV microRNA MR40 的鑒定及其靶基因初探[D];中山大學(xué);2015年

6 陳小紅;2型豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白的表達(dá)生產(chǎn)[D];華東理工大學(xué);2016年

7 孫生仁;甘蔗桿狀病毒群體的分子遺傳變異及進(jìn)化機(jī)制[D];福建農(nóng)林大學(xué);2016年

8 李明晶;對(duì)東方粘蟲(chóng)V-ATPase具有基因沉默功能的昆蟲(chóng)桿狀病毒的構(gòu)建[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

9 聶艷如;PPRV H蛋白的單克隆抗體制備與在桿狀病毒中的表達(dá)[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 薛亞男;桿狀病毒VLF-1蛋白磷酸化位點(diǎn)功能研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1330524