本文關(guān)鍵詞：PrP基因多態(tài)性及PrP多肽對樹突狀細(xì)胞作用的初步研究　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：朊病毒病也稱作傳染性海綿狀腦病(TSEs),是一類人和動物致死性的神經(jīng)退行性疾病,包括羊瘁病(scrapie)、瘋牛病(BSE)和人的克雅氏病(CJD)等。朊病毒是正常細(xì)胞型的朊蛋白構(gòu)象改變后形成的,有的動物對TSE易感,有的則存在種間屏障,甚至同品種間個體也有著差異。因此,本論文通過對3種地方品種家畜的朊蛋白基因多態(tài)性進(jìn)行研究,補(bǔ)充、填補(bǔ)了基因多態(tài)性方面的數(shù)據(jù)空白,便于更好地開展品種改良和TSEs的防控。同時本論文也研究了朊病毒替代模型朊蛋白多肽PrP106-126與樹突狀細(xì)胞之間的相互作用,豐富了朊病毒空間構(gòu)象改變研究和入侵機(jī)制研究的數(shù)據(jù)。采集89峰雙峰駝、112只寧夏灘羊和30只西吉驢的靜脈血,應(yīng)用PCR、基因克隆的方法,擴(kuò)增并克隆了三種家畜的朊蛋白基因的編碼區(qū)序列,分析了各自朊蛋白基因PRNP的多態(tài)性。雙峰駝的PRNP基因ORF區(qū)770 bp,編碼256個氨基酸。推導(dǎo)出的氨基酸有5個8肽(9肽)重復(fù)區(qū),兩個9肽的中間是3個8肽重復(fù)區(qū)。與其他反芻動物相比較,多態(tài)性出現(xiàn)在16(A→V)、17(M→T)、120(N→S)、176(R→K)、215(I-→V)、234(S→Y、237(Y→S)和239(Q→G)。89峰雙峰駝核苷酸只在264位有2個同義突變T堿基和C堿基。89峰雙峰駝基因序列高度保守,本實(shí)驗(yàn)中只出現(xiàn)了兩種多態(tài)性序列,已提交genbank.與單峰駝、綿羊和牛的序列顯現(xiàn)出高度一致性,百分值分別是(99.2%,99.1%)、(91.9%,91.8%)和(91.8%,91.6%)。灘羊的PRNP基因ORF區(qū)全長768 bp,編碼256個氨基酸。灘羊間PRNP和氨基酸的同源性很高,突變主要發(fā)生在154和171位的氨基酸殘基。112只灘羊136、154和171的等位基因主要是ARQ(86.6%)、AHQ(8.9%)和ARH(4.5%),提示寧夏灘羊這個品種對羊癢病易感。首次報道了西吉驢的PRNP基因多態(tài)性的資料。ORF區(qū)全長768 bp,編碼256個氨基酸。30頭西吉驢PRNP的一致性高達(dá)99.87%。主要的同義多態(tài)性位點(diǎn)是153(C→T、 237(T→C)和354(G→C),氨基酸序列一致性為100%。推導(dǎo)出的氨基酸以MVKSH起始,在45～95位氨基酸間有5個8(9)肽重復(fù)區(qū)。與其他動物比對顯示,西吉驢的氨基酸多態(tài)性主要如下：S100T、G101S、E171Q、V206I、K223R、Y225S、E226Q、F228Y、 Q229Y和V244I。西吉驢和其他馬科動物間只有兩個多態(tài)性位點(diǎn),顯示馬科動物朊蛋白基因在進(jìn)化過程中高度保守。與人相比較,三種動物朊蛋白106-126間的112位都發(fā)生了M→V的置換。人工合成的朊蛋白多肽106-126在作用于樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞(DCs)時,100μ組的DCs在12 h出現(xiàn)一定程度的凋亡,各組沒有出現(xiàn)明顯的細(xì)胞壞死。DCs能夠通過NF-κB通路釋放細(xì)胞因子,信號出現(xiàn)時間在本實(shí)驗(yàn)條件下約為1 h-2 h；NF-κB的表達(dá)與一定濃度范圍內(nèi)的多肽使用量有相關(guān)性。RAGE抑制劑奧美沙坦酯能夠抑制RAGE介導(dǎo)的NF-κB通路,提示PrP106-126多肽誘導(dǎo)下的NF-κB通路是由RAGE介導(dǎo)的。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.2

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本文編號：1310368