本文關(guān)鍵詞：基于動(dòng)力學(xué)ELISA法檢測(cè)血清天然抗體及其與HLA-DQB1攜帶差異分析的關(guān)聯(lián)

  更多相關(guān)文章： 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 動(dòng)力學(xué) 天然抗體 HLA 自身免疫病

【摘要】：目的:本文基于常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法,建立了動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法,在無需改變?cè)袃x器設(shè)備的基礎(chǔ)上提高了試驗(yàn)的準(zhǔn)確度和精密度,達(dá)到試驗(yàn)性能的提高;同時(shí)還使用此法對(duì)自身免疫病及其他疾病患者血清天然抗體進(jìn)行檢測(cè),并在分子水平上研究HLA-DQB1基因攜帶差異與人體天然抗體的關(guān)聯(lián)。方法:1.隨機(jī)選擇一份血清,使用常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法,針對(duì)其試驗(yàn)中的各個(gè)環(huán)節(jié)可能存在的影響因素進(jìn)行多因素多水平定量分析,探究其對(duì)結(jié)果的影響,找出對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大的因素。2.建立動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)和方法,并對(duì)其線性、精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行考察,同時(shí)使用動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法對(duì)常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法中存在的對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響較大的因素進(jìn)行測(cè)定。3.隨機(jī)選擇50例患者血清,使用動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法對(duì)其四種天然抗體(抗卵清蛋白抗體、抗淀粉多糖抗體、抗卵核抗體、抗牛血清蛋白抗體)分布情況進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)采集其他疾病患者全血標(biāo)本,采用PCR-SSP技術(shù)檢測(cè)50例患者全血中的HLA-DQB1等位基因,分析HLA-DQB1等位基因攜帶差異與天然抗體分布的關(guān)聯(lián)。4.隨機(jī)選擇176例自身免疫病患者血清,使用動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法對(duì)其四種天然抗體進(jìn)行檢測(cè),分析各種自身免疫病人群天然抗體之間是否存在差異。結(jié)果:1.通過探索的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中的血清濃度、孵育溫度、洗板次數(shù)、酶作用時(shí)間、加入終止液后測(cè)量時(shí)間、不同微孔板等6個(gè)影響因素,得出酶作用時(shí)間、血清濃度、微孔板、底物反應(yīng)時(shí)間為影響最大的四種影響因素,其他三種因素孵育溫度,洗板次數(shù)、加入終止液后測(cè)量時(shí)間雖然對(duì)測(cè)量結(jié)果也有部分影響,但是可在試驗(yàn)過程中通過嚴(yán)格控制反應(yīng)條件得到有效控制。同時(shí)使用試劑盒驗(yàn)證結(jié)果,得出四種較大影響因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響大小依次為:酶作用時(shí)間血清濃度微孔板底物反應(yīng)時(shí)間,底物反應(yīng)時(shí)間的影響大幅減少,幾乎可以忽略(P0.005)。2.新建立的動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法,其血清稀釋試驗(yàn)具有良好的線性,在重復(fù)試驗(yàn)中,批內(nèi)重復(fù)實(shí)驗(yàn)CV值為8.91%,批間重復(fù)實(shí)驗(yàn)CV值為8.02%,表明該方法具有良好的穩(wěn)定性;在靈敏度考察試驗(yàn)中,常規(guī)方法檢測(cè)的表面抗體陽(yáng)性血清稀釋倍度為10 mIU/ml,動(dòng)力學(xué)方法為0.625 mIU/ml,表明本法具有良好的靈敏度和準(zhǔn)確度;用本法測(cè)定影響因素,底物作用時(shí)間、微孔板對(duì)結(jié)果的影響基本得到消除,酶作用時(shí)間的影響也在較大程度上得到消除。3.在HLA-DQ B1基因多態(tài)性與天然抗體相關(guān)性分析中,發(fā)現(xiàn)人血清抗牛血清蛋白抗體的高低與HLA-DQB1*04位點(diǎn)呈現(xiàn)顯著性相關(guān)。4.各組自身免疫病患者血清內(nèi)天然抗體含量有顯著差異。結(jié)論:1.動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法具有良好的檢測(cè)精密度和準(zhǔn)確度,具有應(yīng)用價(jià)值。2.HLA-DQB1*04基因可能與抗牛血清蛋白抗體的含量高低存在一定的關(guān)聯(lián)。3.自身免疫病人群天然抗體含量有差異。
【關(guān)鍵詞】：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 動(dòng)力學(xué) 天然抗體 HLA 自身免疫病
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R446.6
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• 英文摘要12-14
• 前言14-18
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第一章 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定影響因素的定量分析18-28
• 材料和方法19-22
• 1.1 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定影響因素三水平定量分析19-21
• 1.1.1 標(biāo)本來源19
• 1.1.2 抗原包被19
• 1.1.3 試驗(yàn)方法19
• 1.1.4 加樣操作19
• 1.1.5 常規(guī)ELISA試驗(yàn)操作過程19-20
• 1.1.6 試驗(yàn)影響因素定量分析20-21
• 1.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)影響因素多因素五水平定量分析21
• 1.2.1 酶作用時(shí)間對(duì)ELISA方法的影響21
• 1.2.2 多因素五水平定量分析21
• 1.3 人乙型肝炎病毒表面抗體診斷試劑盒驗(yàn)證ELISA影響因素21-22
• 1.4 統(tǒng)計(jì)分析22
• 結(jié)果22-25
• 1.1 試驗(yàn)影響因素定量分析22-24
• 1.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)影響因素定量分析24
• 1.2.1 酶作用時(shí)間對(duì)ELISA方法的影響24
• 1.2.2. 多因素五水平定量分析24
• 1.3. 人乙型肝炎病毒表面抗體診斷試劑盒驗(yàn)證ELISA影響因素24-25
• 討論25-26
• 結(jié)論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-28
• 第二章 基于常規(guī)ELISA通過檢測(cè)酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)提高實(shí)驗(yàn)性能方法的建立28-46
• 材料和方法29-33
• 1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確立29
• 1.2 檢測(cè)血清中抗卵清抗體的動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法(K-ELISA)的建立29-30
• 1.3 線性研究30
• 1.4 穩(wěn)定性考察30-32
• 1.4.1 批內(nèi)重復(fù)試驗(yàn)30
• 1.4.2 批間重復(fù)試驗(yàn)30-31
• 1.4.3 試驗(yàn)校正曲線的建立31-32
• 1.5 適應(yīng)性及靈敏度檢驗(yàn)32
• 1.6 動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定ELISA法中影響因素32-33
• 1.7 統(tǒng)計(jì)分析33
• 結(jié)果33-42
• 1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確立33-34
• 1.2 線性研究34-36
• 1.3 穩(wěn)定性考察36-39
• 1.3.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)36-37
• 1.3.2 批間重復(fù)試驗(yàn)37-39
• 1.4 適用性和靈敏度檢驗(yàn)39-40
• 1.5 動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定ELIS A法中影響因素40-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-46
• 第三章 人體內(nèi)天然自身抗體分布與HLA-DQB1基因攜帶的差異分析46-60
• 材料和方法47-53
• 1.1 人全血基因組DNA提取47
• 1.1.1 標(biāo)本來源47
• 1.1.2 全血DNA提取47
• 1.2. PCR擴(kuò)增HLA-DQB147-51
• 1.2.1 PCR擴(kuò)增采用的引物47-49
• 1.2.2 目的基因擴(kuò)增49-51
• 1.2.3 PCR產(chǎn)物鑒定51
• 1.3 四種天然抗體的測(cè)定51-52
• 1.3.1 抗原包被微孔板的制備51-52
• 1.3.2 天然抗體的測(cè)定52
• 1.3.2.1 標(biāo)本來源52
• 1.3.2.2 動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定天然抗體52
• 1.4 統(tǒng)計(jì)分析52-53
• 結(jié)果53-57
• 1.1 稀釋試驗(yàn)結(jié)果PCR擴(kuò)增HLA-DQB1結(jié)果53
• 1.2 HLA- DQB1等位基因在50份標(biāo)本中的分布頻率結(jié)果53-54
• 1.3 HLA- DQB1等位基因與人體天然抗體分布相關(guān)性分析54-57
• 討論57-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-60
• 第四章 動(dòng)力學(xué)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)天然抗體與疾病的關(guān)系60-69
• 材料和方法61-62
• 1.1 天然抗體與自身免疫的病的相關(guān)性61
• 1.1.1 抗原包被板的制備61
• 1.1.2 天然抗體與自身免疫病的關(guān)聯(lián)61
• 1.2 統(tǒng)計(jì)分析61-62
• 結(jié)果62-66
• 1.1 自身免疫病人群中天然抗體的分布差異62
• 1.2 抗淀粉多糖抗體在自身免疫病人群中的分布比較62-64
• 1.3 抗牛血清蛋白抗體在自身免疫病人群中的分布比較64-66
• 討論66-67
• 結(jié)論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-69
• 全文總結(jié)69-70
• 工作展望70-71
• 綜述71-82
• 參考文獻(xiàn)79-82
• 附錄82-84
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷84-85
• 致謝85-86

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;汗水含天然抗體可殺菌防癌[J];甘肅科技縱橫;2004年05期

2 吳軍，賀萍;人類天然抗體在豬皮內(nèi)的結(jié)合部位[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;1996年06期

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6 章旭;3例獻(xiàn)血者天然抗體缺乏或減弱分析[J];臨床輸血與檢驗(yàn);2005年01期

7 張坤蓮;楊麗艷;王慧;李曉豐;李劍平;;獻(xiàn)血者天然抗體減弱的分析[J];中國(guó)輸血雜志;2010年S1期

8 謝正e，

本文編號(hào)：695016