本文關(guān)鍵詞：高尿酸血癥相關(guān)腸道菌群研究

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【摘要】：高尿酸血癥(Hyperuricemia, HUA)是一種由嘌呤代謝紊亂、尿酸產(chǎn)生過多或排泄減少引起的血尿酸水平升高的代謝性疾病。流行病學(xué)研究顯示,過去的多年內(nèi)高尿酸血癥的發(fā)病率呈上升趨勢,給患者的生活和工作帶來了極大的不便,作為一種代謝性疾病,腸道菌群在該疾病的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。本研究首先構(gòu)建了高尿酸血癥大鼠模型和高尿酸血癥小鼠模型,然后分離腸道菌群,利用無菌ICR小鼠,通過灌胃進(jìn)行菌群定植實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)選取了40只雄性無菌ICR小鼠為研究對象,分為3個組：大鼠腸道組(R組)12只、小鼠腸道組(M組)12只、對照組(C組)16只,然后,內(nèi)眥靜脈取血,分離血清檢測血尿酸水平(SUA)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)等生化指標(biāo),同時檢測體重、尿量、飲水量、進(jìn)食量等指標(biāo)變化；然后提取菌群定植模型小鼠(R組和M組)糞便中菌群基因組DNA,采用barcode 454測序技術(shù)對16S rRNA基因V1-V3區(qū)進(jìn)行測序,數(shù)據(jù)優(yōu)化后進(jìn)行OTU聚類分析和分類學(xué)分析。菌群定植5周時間內(nèi),3組之間體重、24h進(jìn)食量、24h尿量和24h飲水量差異不顯著。血生化檢測顯示,菌群定植5周后,R組TG顯著高于C組,其余的生化指標(biāo)在3組之間無顯著差異。糖耐量檢測顯示,菌群定植5周后,葡萄糖負(fù)荷30min時,R組血糖值顯著高于C組(p0.05),在負(fù)荷60、90、120min時,R組和M組的血糖值均顯著高于C組(p0.05),說明菌群的定植后引起了血糖代謝異常。菌群16S rRNA基因V1-V3區(qū)測序結(jié)果顯示,共獲得205,338條優(yōu)化序列,長達(dá)91,817,752 bp,構(gòu)建文庫的覆蓋率達(dá)99%,隨著測序深度的增加稀疏性曲線趨向平坦,說明庫容量足夠大,可以代表實(shí)驗(yàn)動物腸道菌群中的絕大多數(shù)細(xì)菌類群,且樣本量充分,可以進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。菌群組成分析顯示,在屬的分類水平上,M組和R組菌群分布差異不大,且隨著定植時間的增加菌群結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定,有助于研究和挖掘高尿酸血癥相關(guān)的微生物群體。主成分分析顯示,定植不同的腸道菌群可能是導(dǎo)致M組和R組分開的重要因素(可能性為35.68%)；每個組個體之間的差別可能會影響樣本的組成(可能性占13.29%)。另外,相似度分析顯示,M組與R組之間樣本的相似性低于組內(nèi)樣本的相似性,且兩組樣本之間的相似度隨著菌群定植的時間的增加不斷趨于穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,糞便菌群定植引起小鼠血脂、血糖等代謝相關(guān)指標(biāo)的變化與臨床上高尿酸血癥患者常伴發(fā)血脂、血糖等指標(biāo)異常相符;菌群微生態(tài)分析顯示,菌群定植2周后可達(dá)相對穩(wěn)定狀態(tài),菌群定植導(dǎo)致模型組菌群結(jié)構(gòu)和多樣性等指標(biāo)變化顯著,定植不同種屬的糞便菌群可能會對動物模型產(chǎn)生不同的影響。
【關(guān)鍵詞】：高尿酸血癥 腸道菌群 無菌ICR小鼠 菌群定植 16S rRNA基因
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R589.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第一章 前言12-27
• 1 高尿酸血癥概述12-20
• 1.1 簡介12
• 1.2 高尿酸血癥的病因?qū)W研究12-18
• 1.3 高尿酸血癥的治療18-20
• 1.3.1 飲食調(diào)節(jié)18
• 1.3.2 藥物治療18-20
• 2 腸道菌群與代謝性疾病的相關(guān)性研究20-25
• 2.1 腸道菌群簡介20-21
• 2.2 腸道菌群與代謝性疾病21-22
• 2.2.1 腸道菌群與肥胖21-22
• 2.2.2 腸道菌群與糖尿病22
• 2.3 腸道菌群與疾病的防治22-25
• 2.3.1 腸道菌群與益生元23
• 2.3.2 腸道菌群與益生菌23-24
• 2.3.3 腸道菌群與糞便移植24
• 2.3.4 小結(jié)24-25
• 3 16S rRNA基因與腸道菌群的研究進(jìn)展25-27
• 3.1 16S rRNA基因簡介25-26
• 3.2 16S rRNA基因與腸道菌群研究26-27
• 第二章 高尿酸血癥(HUA)模型的建立27-37
• 1 材料27
• 1.1 材料與試劑27
• 1.2 主要儀器27
• 1.3 試劑的配制27
• 2 研究方法27-28
• 2.1 動物飼養(yǎng)條件27
• 2.2 HUA大鼠模型的建立27
• 2.3 HUA小鼠模型的建立27-28
• 2.4 血生化指標(biāo)的檢測28
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28
• 3 結(jié)果與討論28-36
• 3.1 HUA大鼠生化指標(biāo)的變化28-33
• 3.2 HUA小鼠生化指標(biāo)的變化33-36
• 4 小結(jié)36-37
• 第三章 菌群定植模型的建立及其腸道菌群研究37-58
• 1 材料37-38
• 1.1 材料與試劑37
• 1.2 主要儀器37
• 1.3 試劑的配制37-38
• 2 研究方法38-44
• 2.1 動物飼養(yǎng)條件及分組38
• 2.2 腸道菌群的分離與保存38
• 2.3 無菌小鼠的檢測方法38
• 2.4 腸道菌群的定植與檢測方法38-39
• 2.5 糞便基因組DNA的提取及其鑒定39-40
• 2.6 PCR擴(kuò)增及擴(kuò)增產(chǎn)物純化40-41
• 2.7 熒光定量及em PCR擴(kuò)增41
• 2.8 454高通量測序及生物信息學(xué)分析41-44
• 2.8.1 454高通量測序41-42
• 2.8.2 生物信息學(xué)分析42-44
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析44
• 3 結(jié)果與討論44-58
• 3.1 無菌小鼠的質(zhì)控及菌群定植結(jié)果44
• 3.2 血生化指標(biāo)的結(jié)果分析44-46
• 3.3 糖耐量結(jié)果分析46-48
• 3.4 代謝結(jié)果分析48
• 3.5 細(xì)菌16S rDNA PCR擴(kuò)增結(jié)果48
• 3.6 454焦磷酸測序結(jié)果48-58
• 3.6.1 腸道菌群的統(tǒng)計(jì)學(xué)評估結(jié)果49-52
• 3.6.2 微生物群落變化分析結(jié)果52-58
• 總結(jié)58-60
• 本文創(chuàng)新點(diǎn)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 致謝67-68
• 個人簡歷68
• 所獲榮譽(yù)及獎勵68
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄧娟;賈紅;;高尿酸血癥的流行病學(xué)研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學(xué)綜述;2014年06期

2 Alexander Swidsinski;Vera Loening-Baucke;Herbert Lochs;Laura P.Hale;;Spatial organization of bacterial flora in normal and inflamed intestine: A fluorescence in situ hybridization study in mice[J];World Journal of Gastroenterology;2005年08期

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本文編號：642411