本文關鍵詞：雌二醇及雌激素受體抑制劑對上皮性卵巢癌SKOV3細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過檢測雌激素及其受體抑制劑對體外培養(yǎng)的卵巢癌SKOV3細胞系信號轉(zhuǎn)導通路和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相關蛋白表達的影響,探討雌激素在卵巢癌發(fā)生發(fā)展機制中的作用。方法:體外培養(yǎng)人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌SKOV3細胞系,分為正常對照組、E2組、ICI182,780組、E2+ICI182,780組四組。采用MTT比色法檢測細胞增殖情況;Annexin V/PI流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率;在培養(yǎng)的不同時點收集細胞并分別以Western-Blot法檢測AKT、p-AKT、E-cadherin、Vimentin蛋白表達;RT-PCR檢測Snailm RNA、Slug m RNA轉(zhuǎn)錄因子表達;免疫熒光檢測ER-α、ER-β蛋白表達的經(jīng)時變化。結(jié)果:1.體外培養(yǎng)的SKOV3細胞在雌激素作用24小時后開始出現(xiàn)偽足,細胞由橢圓形變?yōu)槎噙呅巍⒓忓N形等間質(zhì)細胞樣形態(tài),隨時間推移細胞間質(zhì)化變化明顯,細胞核皺縮。2.E2作用于SKOV3細胞24h、48h后,細胞凋亡率(1.203±0.0764%、1.99±0.1127%)均低于control組(2.857±0.3150%、4.21±0.0173%)(P0.05);ICI182,780作用于SKOV3細胞24h、48h后,細胞凋亡率(5.787±0.8857%、8.44±1.1530%)均高于control組(P0.05);(E2+ICI182,780)組藥物作用于SKOV3細胞24h、48h后,細胞凋亡率(4.153±0.1457%、5.98±0.2352%)均高于control組,低于單純ICI182,780組(P0.05)。3.E2能上調(diào)SKOV3細胞p-AKT蛋白表達,并存在時間依賴性,E2+ICI182,780聯(lián)合應用上調(diào)p-AKT蛋白表達的程度低于E2組,ICI182,780能部分抑制E2以上作用(P0.05),三組藥物均不改變AKT蛋白表達,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.E2能下調(diào)SKOV3細胞E-cadherin蛋白的表達,E2+ICI182,780組聯(lián)合應用下調(diào)E-cadherin蛋白表達程度小于E2組,ICI182,780能部分抑制E2下調(diào)E-cadherin蛋白的作用(P0.05);E2能上調(diào)SKOV3細胞Vimentin蛋白的表達,E2+ICI182,780組聯(lián)合應用上調(diào)Vimentin蛋白表達程度小于E2組,ICI182,780能部分抑制E2上調(diào)Vimentin蛋白的作用(P0.05)。單獨應用ICI182,780組藥物對E-cadherin、Vimentin兩種蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.E2作用于SKOV3細胞24小時后,Snail m RNA、Slug m RNA相對表達量升高,E2+ICI182,780組作用于SKOV3細胞24小時后,Snail m RNA、Slug m RNA相對表達量升高,Snail m RNA、Slug m RNA相對表達量升高程度E2組E2+ICI182,780組control組(P0.05)。單獨應用ICI182,780組,Snail m RNA、Slug m RNA相對表達量差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。6.SKOV3細胞高表達ERα,E2可使ER-α蛋白表達較control組降低,ICI182,780可使ER-α蛋白表達進一步降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。SKOV3細胞低表達ERβ,各加藥組ERβ表達均無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:雌激素E2能夠促進SKOV3細胞由上皮形態(tài)向間質(zhì)形態(tài)轉(zhuǎn)變,發(fā)生EMT的形態(tài)學改變;E2促進SKOV3細胞增殖,抑制SKOV3細胞凋亡;E2誘導SKOV3細胞EMT的發(fā)生,其可能的機制是E2通過上調(diào)p-AKT激活PI3K/AKT信號通路,通過非經(jīng)典途徑上調(diào)EMT的上游信號轉(zhuǎn)錄因子Snail m RNA、Slug m RNA的表達進而抑制上皮細胞標志物E-cadherin的表達,同時使間質(zhì)細胞標志物Vimentin增加,誘發(fā)SKOV3細胞發(fā)生EMT,而雌激素受體抑制劑ICI182,780能部分抑制E2的上述作用。
【關鍵詞】：雌激素E2雌激素受體抑制劑ICI 182 780 SKOV3細胞 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標志蛋白
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一部分 基礎研究12-41
• 前言12-13
• 材料與方法13-20
• 一、材料13-15
• 1.研究對象13
• 2.實驗試劑與儀器13-15
• 二 方法15-20
• 1 細胞培養(yǎng)15
• 2 SKOV3 細胞生長曲線測定15
• 3 四甲基偶氮唑蘭（MTT）比色法檢測藥物作用后細胞增殖情況，制成增殖曲線15-16
• 4 流式細胞術(shù)測細胞凋亡（Annexin V-FITC）16-17
• 5 蛋白印跡法（Western-Blot）檢測 SKOV3 細胞的 E-cadherin、Vimentin、 p-AKT、AKT 蛋白表達17-18
• 6 實時熒光定量 PCR 法（RT-PCR）檢測 Snail、Slug 轉(zhuǎn)錄因子表達18
• 7 細胞免疫熒光化學檢測 ERα、ERβ蛋白表達18-19
• 8 統(tǒng)計學方法19-20
• 結(jié)果20-41
• 第二部分 臨床病例41-48
• 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述52-70
• 一 雌激素對卵巢癌的多途徑影響52-55
• 二 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導腫瘤機制55-64
• 參考文獻64-70
• 附錄1 英文縮寫70-71
• 附錄2 實驗方法71-79
• 致謝79-80

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本文編號：427495