目的:GATA4是參與心臟發(fā)育的重要轉錄因子。本課題組前期在室間隔缺損(ventricular septal defect,VSD)患者心肌組織中發(fā)現(xiàn)了一種特殊類型的GATA4突變(p.S335X),此突變可使終止密碼子提前產生,導致GATA4的C末端缺失。為進一步了解p.S335X突變對心肌細胞的作用及其機制,我們使用體外培養(yǎng)的大鼠心肌細胞株H9C2,轉染野生型GATA4(pcDNA6-GATA4-WT,WT)及突變型GATA4p.S335X(pcDNA6-GATA4-MU,MU)載體,驗證轉染效率后,考察GATA4 p.S335X對H9C2細胞凋亡的影響及經典凋亡通路AKT/FOXO/Bcl-2的參與作用。在此基礎上,我們進一步篩選了除經典Bcl-2凋亡途徑之外,GATA4 p.S335X對其他凋亡相關的下游分子/信號通路的調控作用。方法:大鼠心肌細胞H9C2體外培養(yǎng),轉染W(wǎng)T、MU及對照(pcDNA6,EV)載體,通過收集轉染后H9C2細胞的RNA和總蛋白,分別使用Real-Time PCR和Western blot驗證細胞中GATA4 mRNA和蛋白表達,鑒定轉染成功。進一步使...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料和方法
    一、材料與試劑
    二、實驗方法
        2.1 Western Blot
        2.2 Real-Time PCR
            2.2.1 提取RNA
            2.2.2 逆轉錄
            2.2.3 Real-Time PCR
        2.3 細胞學實驗
            2.3.1 細胞傳代
            2.3.2 細胞凍存
            2.3.3 細胞復蘇
            2.3.4 瞬時轉染H9C2細胞
            2.3.5 TNF誘導H9C2細胞凋亡模型
        2.4 TUNEL
        2.5 PCR Array
            2.5.1 RNA提取
            2.5.2 逆轉錄
            2.5.3 RT2 Profile PCR Arrays
        2.6 統(tǒng)計分析
結果
    1 載體在H9C2細胞中表達
    2 載體初步功能測定
    3 GATA4 p.S335X對AKT/FOXO/Bcl-2通路的影響
    4 TNF誘導后GATA4 p.S335X對AKT/FOXO/Bcl-2通路的影響
    5 PCR Array篩選GATA4 p.S335X與野生型差異基因
討論
結論和展望
參考文獻
中文綜述 轉錄因子與心肌細胞凋亡的關系
    參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的文章情況
致謝



本文編號：3992936