目的:闡明紫花牡荊素(casticin,CAS)通過調(diào)控miR-139-5p的表達(dá),從而抑制MHCC97-H源性肝癌干樣細(xì)胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)干性的機制。方法:1.球形成培養(yǎng)法從體外培養(yǎng)MHCC97-H細(xì)胞系獲得球形成細(xì)胞用作MHCC97-H源性LCSLCs模型。分別采用流式細(xì)胞術(shù)、球形成試驗、軟瓊脂集落形成試驗、創(chuàng)口愈合實驗、transwell小室侵襲實驗、q RT-PCR和蛋白印跡分析MHCC97-H細(xì)胞和球形成細(xì)胞CD24+、CD44+、CD90+細(xì)胞百分率、自我更新能力、遷移和侵襲能力以及干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD24、CD44、CD90和干性相關(guān)因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表達(dá)水平。q RT-PCR檢測L-02細(xì)胞、MHCC97-H細(xì)胞與LCSLCs miR-139-5p表達(dá)水平。2.分別利用miR-139-5p mimic(50 n M)或inhibitor(100 n M)轉(zhuǎn)染LCSLCs操縱miR-139-5p表達(dá)水平,測定miR-139-5p對LCSLCs干性的作用。3.以DMSO為陰性(...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 實驗試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與擴增
        2.2.2 腫瘤球細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 軟瓊脂集落形成試驗
        2.2.4 創(chuàng)口愈合實驗
        2.2.5 transwell小室細(xì)胞侵襲實驗
        2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)分析
        2.2.7 實時定量PCR檢測(qRT-PCR)
        2.2.8 CCK-8實驗
        2.2.9 蛋白質(zhì)印跡分析
        2.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 MHCC97-H源性LCSLCs制備和鑒別及mi R-139-5p表達(dá)
        3.1.1 MHCC97-H源性LCSLCs制備和鑒別
        3.1.2 miR-139-5p表達(dá)
    3.2 miR-139-5p抑制LCSLCs干性的作用研究
        3.2.1 miR-139-5p mimic對 LCSLCs干性的影響
        3.2.2 miR-139-5p inhibitor對 LCSLCs干性的影響
    3.3 CAS抑制LCSLCs干性的作用研究
        3.3.1 CAS對 LCSLCs干性的影響
    3.4 CAS聯(lián)合miR-139-5p mimic轉(zhuǎn)染抑制LCSLCs干性的作用機制研究
        3.4.1 CAS對 LCSLCs mi R-139-5p表達(dá)的影響
        3.4.2 CAS聯(lián)合miR-139-5p mimic轉(zhuǎn)染對LCSLCs干性的影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄1:英文縮略詞索引
附錄2:綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果
致謝



本文編號：3986973