目的:克隆并表達結(jié)核分枝桿菌重組融合蛋白Pst S1-Hsp16.3,建立基于重組融合蛋白Pst S1-Hsp16.3的納米金免疫傳感器和可視化免疫傳感器,評價其診斷結(jié)核病的效率。方法:根據(jù)Gen Bank中結(jié)核分枝桿菌標準株H37Rv的pst S1和hsp16.3基因序列分別設(shè)計并合成引物,PCR擴增pst S1和hsp16.3基因片段,重疊延伸PCR技術(shù)擴增融合基因pst S1-hsp16.3,克隆至p MD18-T載體,挑取菌落進行菌落PCR和測序鑒定后,亞克隆至原核表達載體p ET-28a(+),將序列正確的重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化至E.coli Resseta(DE3),誘導(dǎo)表達融合蛋白Pst S1-Hsp16.3,金屬螯合層析純化,免疫印跡法分析其反應(yīng)原性。晶種成長法制備金納米棒,經(jīng)11-巰基十一烷酸(MUA)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)化學(xué)修飾后,與融合蛋白Pst S1-Hsp16.3連接,構(gòu)建納米金免疫傳感器檢測血清抗體。谷胱甘肽還原法制備金納米簇,經(jīng)EDC、NHS化學(xué)修飾后,與羊抗人Ig G抗體連接,以Pst S1...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1.引言
2.材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種及血清
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 方法
3.結(jié)果
    3.1 融合基因pst S1-hsp16.3 的擴增
    3.2 p MD18-T-pst S1-hsp16.3 的篩選與鑒定
    3.3 重組質(zhì)粒p ET-28a(+)-pst S1-hsp16.3 的酶切鑒定
    3.4 Pst S1-Hsp16.3 的誘導(dǎo)表達及純化
    3.5 Pst S1-Hsp16.3 的反應(yīng)原性分析
    3.6 金納米棒的制備
    3.7 金納米棒的抗原修飾
    3.8 金納米棒免疫傳感器檢測血清抗體
    3.9 金納米簇的制備
    3.10 金納米顆粒顯色條件的優(yōu)化
    3.11 金納米簇可視化免疫傳感器檢測血清抗體
4.討論
5.結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄1:中英文縮略詞表
附錄2:在校期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3946303