目的:默克爾細胞在皮膚的觸覺傳導機制中起著重要的作用。雪旺氏細胞(SCs)是創(chuàng)傷后神經(jīng)纖維再生的重要細胞。外泌體中的各種因子可以促進創(chuàng)面愈合。觸覺功能障礙是否與全層皮膚缺損中默克爾細胞(MCs)缺失或Piezo2離子通道功能障礙有關,外泌體又是否可以促進創(chuàng)面觸覺的恢復,其分子機制尚不清楚。本研究旨在通過MCs中Piezo2離子通道的功能來確定雪旺氏來源的外泌體是否在全層皮膚創(chuàng)面觸覺恢復中發(fā)揮作用。方法:1)采用消化法從與動物模型同基因型新生SD大鼠皮膚內(nèi)和坐骨神經(jīng)內(nèi)分別提取、培養(yǎng)MCs和SCs,采用免疫熒光法及WB測定MCs中CK20及Piezo2和SCs中S-100、GFAP及P75的表達。ELISA法檢測培養(yǎng)至第0d、2d、4d、6d的MCs中分泌CGRP情況。2)提取SCs和MCs(control組)外泌體分別與MCs共培養(yǎng),分為三組:MCs組、MCs+exosome+control組和MCs+exo-SCs組;提取三組中蛋白檢測Piezo2的含量并在RNA水平上檢測Piezo2 m RNA的表達。用WB法及q PCR法檢測MCs組、MCs+SCs組及MCs+SCs+GW4869...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.免疫熒光檢測MCs標志性蛋白CK20：免疫熒光檢測CK20蛋白在MCs和成纖維細胞中的相對表達（標尺=50μm）

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文譚昊362結果2.1MCs和SCs的培養(yǎng)鑒定。2.1.1MCs的培養(yǎng)鑒定：采用酶消化法從新生SD大鼠體內(nèi)獲得MCs。用皮膚成纖維細胞作為對照組，將培養(yǎng)6d的Merkel細胞和成纖維細胞爬片做CK20免疫熒光檢測：免疫熒光成像顯示CK20在MCs中呈強陽性，....

圖2.WB檢測在MCs標志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纖維細胞中的相對表達，GAPDH作為內(nèi)參(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文譚昊37圖2.WB檢測在MCs標志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纖維細胞中的相對表達，GAPDH作為內(nèi)參(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Piezo2離子通道是默克爾細胞表達的典型的觸覺感受器。為....

圖3.WB和qPCR檢測Piezo2在MCs和成纖維細胞中的相對表達：A.Piezo2蛋白在MCs和成

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文譚昊37圖2.WB檢測在MCs標志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纖維細胞中的相對表達，GAPDH作為內(nèi)參(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Piezo2離子通道是默克爾細胞表達的典型的觸覺感受器。為....

圖4.ELISA和檢測MCs和成纖維細胞中分泌的CGRP的含量：(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文譚昊38纖維細胞中的相對表達，GAPDH作為內(nèi)參；B.Piezo2的mRNA在MCs和成纖維細胞中的相對表達(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Merkel細胞可分泌降鈣素基因相關肽(CGRP)，參與調節(jié)組織....

本文編號：3923393