乙型肝炎(Hepatitis B)由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起,是全球最常見(jiàn)的傳染病之一。我國(guó)每年因乙肝感染導(dǎo)致死亡的人數(shù)約占全球HBV感染相關(guān)死亡人數(shù)的近50%。接種乙肝疫苗是目前防控乙型肝炎的最重要策略。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝疫苗的主要活性物質(zhì)。HBsAg是由多個(gè)單體通過(guò)二硫鍵形成的球形病毒樣顆粒(virus-like particles,VLPs),作為一種多聚亞基蛋白,HBsAg穩(wěn)定性較差,尤其是在純化過(guò)程中,因其易發(fā)生解聚或聚集等結(jié)構(gòu)變化而造成活性損失,導(dǎo)致產(chǎn)率下降,對(duì)乙肝疫苗大規(guī)模生產(chǎn)造成極大的負(fù)面效應(yīng)。保護(hù)抗原的完整性是解決這一問(wèn)題的重要手段之一。基于此,本文使用硅膠進(jìn)行初步吸附/解吸附實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)其可增強(qiáng)抗原顆粒穩(wěn)定性和完整性;進(jìn)一步探究不同pH條件下的抗原顆粒穩(wěn)定性,基于此,對(duì)硅膠實(shí)驗(yàn)中吸附與解吸附步驟進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳的純化方案;再與組合層析聯(lián)用進(jìn)一步純化抗原,采用穿透式離子交換層析,保護(hù)抗原結(jié)構(gòu),提升層析純化中抗原的活性收率。如下所述:1、在硅膠對(duì)抗原顆粒穩(wěn)定性和完整性分析研究中,對(duì)細(xì)胞破碎液進(jìn)行硅膠處理,將洗脫液進(jìn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．２兩種疏水層析洗脫峰電泳圖??（１?．Ｍａｒｋｅｒ：?２．硅膠－疏水層析洗脫峰：３．疏水層析洗脫峰）??．－ｏｅｕｔｏｎ??

?娃膠－層析聯(lián)用法純化漢遜酵母ＨＢｓＡｇ與疫苗顆粒完整性研宄???ＫＤａ?１?２?３??

圖２．３兩中疏水層析洗脫峰的ＨＰＳＦＣ譜圖??ｌ＇ｉｇ?２．３?ＩＩＰＳｌ＇Ｃ?ｏｆｌ?ＩＢｓＡｇ?ｅｌｕｅｎｌ?ｆｒｏｍ?ｔｗｏ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｎｉｃｔｌｉｏｄｓ??

ＨＢｓＡｇ的顆粒狀結(jié)構(gòu)是在下游純化過(guò)程屮形成的，對(duì)比有無(wú)硅膠純化步驟，可??以推斷硅膠有無(wú)促進(jìn)顆粒形成的作用。岡此在疏水Ｕ析前加入硅膠步驟，利用ＨＰＳＥＣ??對(duì)兩種純化方式獲得抗原顆粒進(jìn)行完整性分析，若完整性提高，則表明硅膠具有促進(jìn)??顆粒形成的作用。抗原完整分＋量大于２０００?....

圖２．４丨ＩＢｓＡｇ顆粒穩(wěn)定性分析??Ｆｉｇ．２．４?Ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＨＢｓＡｇ??

硅膠確實(shí)會(huì)促進(jìn)ＨＢｓＡｇ的顆粒的形成，但是硅膠促進(jìn)??形成的顆粒是否是穩(wěn)定，還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。十二烷基磺酸鈉可以斷開(kāi)抗原亞基之??間的非共價(jià)鍵連接，組裝完整的抗原顆粒會(huì)因此解聚形成分子量?jī)H有２４?ＫＤａ的亞基，??因此分別向硅膠吸附／解吸附與疏水層析聯(lián)用法和常規(guī)疏水層析法純化得....

圖３．８不同吸附ｐｉ?Ｉ對(duì)硅膠解吸附液中抗原顆粒占比的影響??Ｆｉｇ?３．８?Ｅｔｌｅｃｔ?ｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ?ｐＨ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ?ｏ?

?河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文???３５?■?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｒｅｃｏｖｅｒｙ?＃??？?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｒｅｃｏｖｅｒｙ??３０－?ｖ?－＇??卜Ｖ?、??〇?？??Ｉ?２０＇?＿??１５?－??、＇嚇??Ｌ」—一．丄?．?，?—????５?６?７?８?９??Ａｄｓｏｒｐ....

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