背景:骨質(zhì)疏松癥是由體內(nèi)骨吸收-骨形成耦聯(lián)失衡引起的代謝性骨病,其治療著眼于恢復骨代謝平衡。蛇床子素被證實具有抗骨質(zhì)疏松的藥理作用,但其抗骨質(zhì)疏松的機制尚不清楚。目的:觀察蛇床子素對大鼠成骨細胞增殖與分化的影響,探討蛇床子素抗骨質(zhì)疏松的機制。方法:通過改良酶消化法及反復貼壁純化法從新生大鼠顱骨中獲取原代成骨細胞;通過光鏡下形態(tài)觀察、堿性磷酸酶染色、茜素紅法礦化結(jié)節(jié)染色等方式鑒定成骨細胞。采用CCK-8法篩選出10-6M、10-5M、10-4M作為低、中、高濃度蛇床子素組,以10-8Mβ-雌二醇作為陽性對照組,0.25%DMSO作為溶劑對照組,最后設(shè)立空白組排除DMSO對成骨細胞的干擾。本研究采用CCK-8法測定成骨細胞增殖能力、偶氮偶聯(lián)法測定細胞內(nèi)堿性磷酸酶表達、茜素紅染色法測定成骨細胞礦化能力以及酶聯(lián)免疫法測定骨鈣素分泌量,從不同角度、不同階段檢測蛇床子素對成骨細胞分化的影響。并通過檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志分子GRP78、PDI、CHOP以及Wnt/β-catenin信號通路的Wnt、β-catenin蛋白的表達來分析蛇床子素影響成骨細胞增殖和分化的機制。結(jié)果:10-4M的蛇床子素可以抑制...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
緒論
第一部分 成骨細胞增殖與分化的調(diào)控機制及實驗研究進展
    1 中藥及其有效成分調(diào)控成骨細胞增殖與分化的實驗研究進展
    2 蛇床子素對成骨細胞增殖與分化的影響及機制研究進展
    3 成骨細胞增殖與分化的調(diào)控機制研究
第二部分 成骨細胞的原代分離、培養(yǎng)及鑒定
    1 實驗材料
    2 成骨細胞的體外分離及原代培養(yǎng)
    3 成骨細胞傳代培養(yǎng)
    4 成骨細胞的鑒定
    5 結(jié)果
第三部分 蛇床子素對成骨細胞增殖與分化的影響
    1 實驗材料
    2 實驗分組
    3 CCK-8法測定成骨細胞增殖
    4 偶氮偶聯(lián)法定量檢測ALP
    5 酶聯(lián)免疫(ELISA)法測定骨鈣素
    6 茜素紅法礦化結(jié)節(jié)染色
    7 結(jié)果
    8 討論
第四部分 蛇床子素影響成骨細胞增殖與分化的機制研究
    1 實驗材料
    2 實驗分組
    3 蛋白質(zhì)免疫印跡( Western Blot)法測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與Wnt/β-catenin信號通路蛋白表達
    4 結(jié)果
    5 討論
結(jié)語
    1 總結(jié)
    2 創(chuàng)新點
    3 不足與展望
參考文獻
附錄1 英文縮寫對照表
附錄2 文獻綜述
    參考文獻
攻讀碩士學位期間取得的學術(shù)成果
致謝



本文編號：3865605