目的:上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與腫瘤的發(fā)生及一系列惡性進展密切相關,micro RNA(mi RNA)可通過調(diào)節(jié)相關基因調(diào)控EMT。本研究主要觀察mi R-205-5p對耐順鉑鼻咽癌細胞EMT的調(diào)控作用,并明確其作用機制,以期為開辟新的鼻咽癌臨床治療途徑提供理論和實驗依據(jù)。方法:1.mi RNA芯片技術檢測耐順鉑鼻咽癌HNE1/DDP細胞和敏感株細胞HNE1中mi RNAs表達的變化,篩選出表達差異顯著的mi RNAs,并通過實時熒光定量聚合酶鏈式反應(q RT-PCR)進行驗證;2.用Lipofectamine 2000將mi R-205-5p mimic或mi R-205-5p inhibitor轉(zhuǎn)染HNE1細胞或HNE1/DDP細胞,以改變細胞內(nèi)mi R-205-5p的表達水平;3.MTT法檢測鼻咽癌細胞增殖及存活情況;集落克隆形成實驗檢測細胞集落形成能力;Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡情況;4.劃痕愈合實驗檢測細胞水平運動能力;Transwell小室實驗檢測細胞的體外遷移及侵襲能力;5.倒置顯微鏡觀察細胞生物學形態(tài)的變化;Western blot及q RT-PCR檢...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1.材料與儀器
        1.1 細胞系
        1.2 試劑
        1.3 實驗儀器
    2.實驗方法
        2.1 細胞的培養(yǎng)與凍存
        2.2 細胞轉(zhuǎn)染
        2.3 MTT實驗
        2.4 Annexin V/PI雙染實驗
        2.5 集落克隆形成實驗
        2.6 侵襲與遷移實驗
        2.7 免疫印跡(Western blot)實驗
        2.8 q RT-PCR
        2.9 熒光素酶報告實驗
    3.統(tǒng)計學分析
結(jié)果
    1.HNE1/DDP細胞對順鉑具有耐藥性
    2.HNE1/DDP細胞中miR-205-5p高表達
    3.調(diào)控鼻咽癌細胞中miR-205-5p的表達
    4.miR-205-5p促進鼻咽癌細胞增殖
    5.miR-205-5p抑制劑增強鼻咽癌細胞對順鉑的敏感性
    6.miR-205-5p促進鼻咽癌細胞侵襲遷移
    7.miR-205-5p促進鼻咽癌細胞EMT進程
    8.PTEN是 miR-205-5p的下游靶基因
    9.PI3K/AKT信號通路參與miR-205-5p的調(diào)控作用
    10.敲低PTEN可促進鼻咽癌細胞增殖
    11.敲低PTEN拮抗miR-205-5p抑制劑的作用
    12.miR-205-5p通過PI3K/AKT信號通路調(diào)控EMT
討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄 A 中英文術語縮略詞表
附錄 B 常用試劑配制方法
附錄 C 個人簡歷
附錄 D miR-205-5p在腫瘤中的研究進展綜述
    參考文獻



本文編號：3785922