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定量分析LHON突變mtDNA拷貝數(shù)方法的建立與評價

發(fā)布時間:2022-12-22 23:52
  目的:Leber遺傳性視神經(jīng)病變(Leber hereditary optic neuropathy,LHON)是一種發(fā)生于視神經(jīng)的退行性疾病。在中國漢族人群中,其主要與三種線粒體DNA(mtDNA)突變:m.3460G>A,m.11778G>A和m.14484T>C相關(guān)。盡管有幾種方法可以對這些突變進(jìn)行基因分型,如:SSCP-PCR、RFLP-PCR以及DNA測序等等,但由于費用昂貴、手續(xù)復(fù)雜、耗時長等因素,限制了其在臨床推廣使用。很少有針對LHON mtDNA三個突變位點的具備快速,低成本和易處理優(yōu)勢的定量方法的報道。因此,本研究詣在建立一種基于TaqMan小溝結(jié)合物(MGB)探針的熒光定量PCR(qPCR)方法,以對三個LHON mtDNA突變進(jìn)行定性和定量分析。方法:1.針對中國漢族人群mtDNA的m.3460G>A,m.11778G>A和m.14484T>C 3個常見的突變位點分別構(gòu)建相應(yīng)的突變陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品和陰性對照標(biāo)準(zhǔn)品。按照TaqMan-MGB探針qPCR引物探針設(shè)計原則分別針對LHON基因3種高頻突變位點設(shè)計引物和探針。2.優(yōu)化引物和探針比例,優(yōu)化退火溫度,建立起可以... 

【文章頁數(shù)】:83 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【文章目錄】:
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分:mtDNA突變標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建及引物探針的優(yōu)化設(shè)計
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二部分:針對LHON三個突變位點定量檢測的TaqMan-MGB探針qPCR方法的建立
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三部分:三重TaqMan-MGB探針qPCR方法的臨床樣本驗證
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]A Meta-analysis of the association between different genotypes(G11778A, T14484C and G3460A ) of Leber hereditary optic neuropathy and visual prognosis[J]. Dong-Yu Guo,Xia-Wei Wang,Nan Hong,Yang-Shun Gu.  International Journal of Ophthalmology. 2016(10)
[2]線粒體DNA在分子進(jìn)化研究中的應(yīng)用[J]. 陳星,沈永義,張亞平.  動物學(xué)研究. 2012(06)



本文編號:3724292

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