目的:Leber遺傳性視神經(jīng)病變（Leber hereditary optic neuropathy,LHON）是一種發(fā)生于視神經(jīng)的退行性疾病。在中國(guó)漢族人群中,其主要與三種線粒體DNA（mtDNA）突變:m.3460G＞A,m.11778G＞A和m.14484T＞C相關(guān)。盡管有幾種方法可以對(duì)這些突變進(jìn)行基因分型,如:SSCP-PCR、RFLP-PCR以及DNA測(cè)序等等,但由于費(fèi)用昂貴、手續(xù)復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)等因素,限制了其在臨床推廣使用。很少有針對(duì)LHON mtDNA三個(gè)突變位點(diǎn)的具備快速,低成本和易處理優(yōu)勢(shì)的定量方法的報(bào)道。因此,本研究詣在建立一種基于TaqMan小溝結(jié)合物（MGB）探針的熒光定量PCR（qPCR）方法,以對(duì)三個(gè)LHON mtDNA突變進(jìn)行定性和定量分析。方法:1.針對(duì)中國(guó)漢族人群mtDNA的m.3460G＞A,m.11778G＞A和m.14484T＞C 3個(gè)常見(jiàn)的突變位點(diǎn)分別構(gòu)建相應(yīng)的突變陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品。按照TaqMan-MGB探針qPCR引物探針設(shè)計(jì)原則分別針對(duì)LHON基因3種高頻突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物和探針。2.優(yōu)化引物和探針比例,優(yōu)化退火溫度,建立起可以... 

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分:mtDNA突變標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建及引物探針的優(yōu)化設(shè)計(jì)
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二部分:針對(duì)LHON三個(gè)突變位點(diǎn)定量檢測(cè)的TaqMan-MGB探針qPCR方法的建立
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三部分:三重TaqMan-MGB探針qPCR方法的臨床樣本驗(yàn)證
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]A Meta-analysis of the association between different genotypes（G11778A, T14484C and G3460A ） of Leber hereditary optic neuropathy and visual prognosis[J]. Dong-Yu Guo,Xia-Wei Wang,Nan Hong,Yang-Shun Gu.  International Journal of Ophthalmology. 2016(10)
[2]線粒體DNA在分子進(jìn)化研究中的應(yīng)用[J]. 陳星,沈永義,張亞平.  動(dòng)物學(xué)研究. 2012(06)



本文編號(hào)：3724292